[摘要] 目的 探讨子宫内膜、正常早孕和原因不明复发性流产患者蜕膜上Foxp3的表达情况。 方法 收集来我院进行的自然流产次数不低于3次的患者37例作为流产组；选取正常妊娠妇女40例作为正常妊娠组；孕龄期妇女的增生期内膜及分泌期内膜分别为25例、20例，对各组中的Foxp3的表达及分布情况采用统计学方法进行分析。 结果 （1）Foxp3在分泌期内膜的表达与正常妊娠组及URSA组比较明显较低，在URSA患者蜕膜中的表达与正常妊娠组比较明显较低（P < 0.05）。（2）蜕膜间质为URSA组Foxp3的主要表达部位，蜕膜腺上皮细胞为正常妊娠组患者Foxp3表达的主要位置，蜕膜腺上皮细胞为增生期内膜阴性表达及分泌期子宫内膜Foxp3的主要分布位置。 结论 在胚泡植入及早期妊娠的维持中分泌期子宫内膜和蜕膜组织中Foxp3的表达具有非常重要的意义，在URSA的发生发展过程中Foxp3的表达水平的降低可能具有重要的作用。
[关键词] 子宫内膜；正常早孕；原因不明复发性流产；Foxp3
[中图分类号] R714.21 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）21-0036-02
在育龄夫妻中复发性流产的发病率约为1%～2%，其中有超过一半的患者没有明确的发病原因，即原因不明性复发性流产，该种疾病在临床上较难治愈，给患者的心理及生理均造成严重的影响[1]。有报道表明，在胎儿免遭母胎界面同种异体免疫损害保护作用中CD4+CD25+调节性T细胞（T regulatory cell，Tr）发挥着重要的作用，在CD4+CD25+Tr发育和功能的维持中转录因子Foxp3是一个重要调节基因，其基因功能多态性对URSA疾病的发生及发展均具有重要的意义[2]。我们对正常妊娠妇女、URSA患者及增生期内膜、分泌期内膜中转录因子Foxp3的表达情况采用免疫组化法进行观察，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
本研究中收集2011年5月～2012年8月来我院进行的自然流产次数不低于3次的患者37例作为流产组，其中年龄最小为24岁，最大为39岁，平均（31.2±6.5）岁。研究对象均按照我院常规进行病因的筛查，微量淋巴细胞毒试验结果表现为阴性，研究对象共检测抗磷脂
抗体3次，每间隔3周进行一次，均得到阴性的结果。选取同期来我院就诊的正常妊娠妇女40例作为正常妊娠组，该组研究对象的妊娠时间均不超过12周并均有人工流产的意愿，其中年龄最小为21岁，最大为36岁，平均（28.1±6.8）岁，患者均不存在自然流产史、死胎及死产史等。将存在先兆流产症状和体征的研究对象排除出研究范围；对其进行B超检查，结果表明该组研究对象的胚胎发育正常。流产组及正常妊娠组均将染体、内分泌等方面存在异常的研究对象排除出本次研究范围，患者均不存在自身免疫性疾病及合并感染等。共收集来我院进行的孕龄期妇女的增生期内膜及分泌期内膜分别为25例、20例，患者年龄最小为25岁，最大为39岁，平均（32.7±7.6）岁，无自然流产、死胎、死产史。
1.2 研究方法
蜕膜组织均在手术后进行采集，使用4%多聚甲醛液进行固定，固定时间为24～48 h，常规脱水、石蜡包埋，每个标本均做3 μm片厚的连续切片，常规HE染，对蜕膜形态进行观察。对蜕膜Foxp3表达进行观察的方法为S-P免疫组化染法。其中以具有Foxp3表达的胸腺组织为阳性对照，阴性对照使用TBS代替一抗，为了达到将批内及批间存在的误差降低到最低限度的目的集中切片进行染。
1.3 结果的判断依据[3]
结果判断中对阳性反应的观察采用双盲法。Foxp3表达免疫组化阳性信号为棕黄，位于胞浆，随机抽取每张切片中的10个视野进行观察，以在总细胞中阳性细胞所占的比例为依据将结果分为阴性、可疑阳性、轻度阳性、中度阳性及强阳性5级，具体标准如下：无阳性细胞存在为阴性（-）；阳性细胞数低于25%为可疑阳性（±）；阳性细胞数介于25%～50%之间为轻度阳性（+）；阳性细胞数介于50%～75%之间为中度阳性（++）；阳性细胞数高于75%为强阳性（+++）。
1.4 统计学分析
采用SPSS 13.0统计分析软件包进行分析，各个组间数据的分析处理采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Foxp3的分布与不同组间表达水平的比较
Foxp3在妊娠后的蜕膜组织及分泌期子宫内膜中均有表达。Foxp3在URSA组的表达与正常妊娠组比较明显较低（P < 0.05），Foxp3在分泌期内膜的表达与正常妊娠组及URSA组比较明显较低（P < 0.05）。见表1。
2.2 Foxp3在各组中不同分布部位表达水平的比较
蜕膜间质为URSA组Foxp3的主要表达位置，与同组的蜕膜腺上皮细胞中的Foxp3表达水平比较明显较高（P < 0.05）；蜕膜腺上皮细胞为正常妊娠组患者Foxp3表达的主要位置，与同组中的蜕膜间质中Foxp3表达水平比较明显较高（P < 0.05）。Foxp3在增生期内膜阴性表达主要分布于蜕膜腺上皮细胞，与同组中蜕膜间质中的阴性表达比较差异具有显著性（P < 0.05）；蜕膜腺上皮细胞为分泌期子宫内膜Foxp3的主要分布位置，与蜕膜间质细胞的分布比较明显较高（P < 0.05）。见表1。
3 讨论
不明原因复发性流产具有复杂的病因，其中主要为同种免疫型RSA，再次发生流产的风险随着临床妊娠丢失次数的增多而加大。正常的妊娠与同种异体移植具有相似性，母体对胚
胎的免疫排斥在妊娠失败的原因中占有较重要的位置[4]。有学者研究证明，CD4+CD25+Tr在人胸腺及外周血中天然存在，在人外周血CD4+T细胞中所占的比例约为5%～10%。CD4+CD25+高表达亚中有人类调节性T细胞存在，而正常活化的T细胞在CD4+CD25+低表达T细胞亚中占有较高的比例。在人类正常妊娠的孕早期中CD4+CD25+Tr出现明显升高，其达到高峰的时间为孕中期，在产后CD4+CD25+Tr则慢慢地出现降低的趋势[5]。本次结果表明，URSA与正常妊娠组比较具有明显较低的外周血CD4+CD25+Tr细胞数量，结果提示在正常妊娠的维持过程中及病理妊娠的发生过程中CD4+CD25+Tr均具有重要的意义。
在CD4+CD25+Tr发育和功能维持中Foxp3是一个重要的调控基因，T2型细胞由初始型T细胞分化而来，CD4+CD25+Tr在该过程中具有非常重要的作用。BALB/c×BALB/c和BALB/c×C57BL/6孕鼠与同龄未孕鼠比较其子宫组织Foxp3 mRNA的表达明显较高，前者约为后者的1 000倍，而Foxp3 mRNA表达在同种异体和同基因型的孕鼠间进行比较则差异无统计学意义，结果表明妊娠可能会导致Tr表达出现变化，同种抗原的刺激则不会导致Tr的表达出现变化。本次研究发现，Foxp3在分泌期子宫内膜、妊娠的蜕膜组织均出现表达，正常妊娠组和URSA组的蜕膜组织与分泌期内膜比较具有明显较高的Foxp3表达水平，URSA组和分泌期内膜与正常妊娠组比较具有明显较低的Foxp3表达水平，结果提示在正常妊娠的维持
中Foxp3具有非常重要的意义，母胎界面局部免疫耐受形成的调控中Foxp3有可能是一项重要的因素，URSA的发生发展中Foxp3的表达异常发挥着重要的作用[6]。
子宫内膜具有两个方面的免疫潜能，即免疫杀伤功能和免疫耐受或者免疫保护功能。在妊娠成功中子宫内膜两个方面的作用平衡非常重要，在子宫局部免疫调节过程中均有参与，子宫内膜的形态和功能在分泌期和早孕期发生变化为其突出的变化。我们研究发现，Foxp3在分泌期内膜存在表达，妊娠蜕膜组织中Foxp3的表达水平明显增加；Foxp3在正常妊娠组及URSA组的主要分布部位分别为腺上皮细胞及蜕膜间质，提示母体在胎儿免疫耐受的形成过程中子宫内膜、蜕膜组织在胎母界面均进行了参与，该参与方式可能是以自分泌或者旁分泌的方式进行的。
[参考文献]
[1] 刘爽，霍红. 复发性自然流产的病因学研究进展[J]. 中国当代医药，2013，20（2）：20-21.
[2] 梅珊珊，谭剑平，陈慧，等. CD4+CD25highT细胞和Foxp3在不明原因复发性自然流产中的作用[J]. 中山大学学报（医学科学版），2010，31（4）：461-466.
[3] 杨卉，林其德，肖云山，等. Foxp3在子宫内膜、正常早孕和原因不明复发性流产患者蜕膜上的表达[J]. 现代妇产科进展，2005，14（2）：129-131.
[4] 陈玲，陈晓勇. 不明原因复发性流产的免疫学研究进展[J]. 江西医药，2012，47（7）：650-652.
[5] 蒋国静，邱丽华，林其德. 原因不明复发性流产与蜕膜CD4+CD25+T调节细胞和CD8+CD28-T细胞的关系[J]. 范玮琪怀孕现代妇产科进展，2008，17（12）：894-896.
[6] 刘爱珍，古亚丽，李静. Foxp3和TGF-β1在复发性流产患者绒毛组织中的表达[J]. 中国误诊学杂志，2008，8（35）：8572-8574.
（收稿日期：2013-04-26）
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