(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书 | ||
(10)申请公布号 CN 114026236 A (43)申请公布日 2022.02.08 | ||
(21)申请号 CN202080046692.7
(22)申请日 2020.04.23
(71)申请人 宾夕法尼亚州大学信托人
地址 美国宾夕法尼亚州
(72)发明人 J·M·威尔逊 R·施米德
(74)专利代理机构 72001 中国专利代理(香港)有限公司
代理人 黄登高;李唐
(51)Int.CI
C12N15/117(20060101)
C12N15/861(20060101)
A61P25/00(20060101)
C12N15/861(20060101)
A61P25/00(20060101)
权利要求说明书 说明书 幅图 |
(54)发明名称
可用于雷特综合征的组合物 | |
183组合(57)摘要
法律状态
法律状态公告日 | 法律状态信息 | 法律状态 |
2022-02-08 | 公开 | 国际专利申请公布 |
2022-05-13 | 实质审查的生效IPC(主分类):C12N15/117专利申请号:2020800466927申请日:20200423 | 实质审查的生效 |
权 利 要 求 说 明 书
1. 一种能用于雷特综合征的重组腺相关病毒(rAAV),其中所述rAAV包括:
(a)AAV衣壳;以及
(b)载体基因组,所述载体基因组包装在(a)的所述AAV衣壳中,其中所述载体基因组包括反向末端重复序列(ITR)和核酸序列,所述核酸序列在调控序列的控制下编码功能性人甲基-CpG结合蛋白2(hMECP2),所述调控序列指导所述hMECP2在中枢神经系统细胞中的表达,并且其中所述hMECP2编码序列是SEQ ID NO: 3或与SEQ ID NO: 3至少约95%相同的序列。
2. 根据权利要求1所述的rAAV,其中所述hMECP编码序列与hMECP转录物变体1到3(NM_001316337.1(SEQ ID NO: 16)、NM_004992.3(SEQ ID NO: 17)和NM_001110792.1(SEQ IDNO: 18))中的任一种的同一性小于80%。
(a)AAV衣壳;以及
(b)载体基因组,所述载体基因组包装在(a)的所述AAV衣壳中,其中所述载体基因组包括反向末端重复序列(ITR)和核酸序列,所述核酸序列在调控序列的控制下编码功能性人甲基-CpG结合蛋白2(hMECP2),所述调控序列指导所述hMECP2在中枢神经系统细胞中的表达,并且其中所述hMECP2编码序列是SEQ ID NO: 3或与SEQ ID NO: 3至少约95%相同的序列。
2. 根据权利要求1所述的rAAV,其中所述hMECP编码序列与hMECP转录物变体1到3(NM_001316337.1(SEQ ID NO: 16)、NM_004992.3(SEQ ID NO: 17)和NM_001110792.1(SEQ IDNO: 18))中的任一种的同一性小于80%。
3. 根据权利要求1或2所述的rAAV,其中所述功能性hMECP2具有SEQ ID NO: 2的氨基酸序列。
4.根据权利要求1到3中任一项所述的rAAV,其中所述调控序列包括神经元特异性启动子。
5.根据权利要求1到3中任一项所述的rAAV,其中所述调控序列包括组成型启动子。
6.根据权利要求1到5中任一项所述的rAAV,其中所述调控序列包括人突触蛋白启动子或CB7启动子。
7.根据权利要求1到6中任一项所述的rAAV,其中所述调控元件进一步包括Kozak序列、聚腺苷酸化序列、内含子、增强子、TATA信号和polyA序列中的一种或多种。
8.根据权利要求1到7中任一项所述的rAAV,其中所述载体基因组进一步包括hMECP的3'非翻译区中的背根神经节(drg)特异性miRNA靶序列的至少两个串联重复序列,其中所述至少两个串联重复序列包括至少第一miRNA靶序列和至少第二miRNA靶序列以及靶miR183或miR182,所述至少第一miRNA靶序列和所述至少第二miRNA靶序列可以相同或不同。
9. 根据权利要求81到6中任一项所述的rAAV,其中表达盒mRNA或DNA正链的所述至少第一mi
RNA靶序列和/或所述至少第二miRNA靶序列的所述miRNA靶序列是:(i)AGTGAATTCTACCAGTGCCATA(miR183,SEQ ID NO: 7);以及(ii)AGCAAAAATGTGCTAGTGCCAAA(SEQ ID NO: 9)。
10.根据权利要求8或9所述的rAAV,其中所述miRNA靶序列中的两个或更多个miRNA靶序列由间隔子隔开,并且每个间隔子独立地选自以下中的一个或多个:(A)GGAT;(B)CACGTG;或(C)GCATGC。
11.根据权利要求110所述的rAAV,其中定位在所述miRNA靶序列之间的所述间隔子可能定位在第一个miRNA靶序列的3'和/或最后一个miRNA靶序列的5'。
10.根据权利要求8或9所述的rAAV,其中所述miRNA靶序列中的两个或更多个miRNA靶序列由间隔子隔开,并且每个间隔子独立地选自以下中的一个或多个:(A)GGAT;(B)CACGTG;或(C)GCATGC。
11.根据权利要求110所述的rAAV,其中定位在所述miRNA靶序列之间的所述间隔子可能定位在第一个miRNA靶序列的3'和/或最后一个miRNA靶序列的5'。
12.根据权利要求10或11所述的rAAV,其中所述miRNA靶序列之间的所述间隔子是相同的。
13. 根据权利要求1到11中任一项所述的rAAV,其中所述载体基因组包括SEQ ID NO:6的核酸1到2802。
14.根据权利要求1到13中任一项所述的rAAV,其中所述衣壳是AAVhu68衣壳。
15.一种组合物,其包括根据权利要求1到14中任一项所述的rAAV的原液和水性悬浮介质。
16.根据权利要求l5所述的组合物,其中悬浮液被调配用于静脉内递送、鞘内施用或脑室内施用。
17. 一种载体,其包括表达盒,其中所述表达盒包括核酸序列,所述核酸序列在调控序列的控制下编码功能性人甲基-CpG结合蛋白2(hMECP2),所述调控序列指导hMECP2表达,并且其中所述hMECP2编码序列是SEQ ID NO: 3或与SEQ ID NO: 3至少约95%相同的序列。
18.根据权利要求17所述的载体,其中所述载体是选自重组细小病毒、重组慢病毒、重组逆转录病毒或重组腺病毒的病毒载体;或选自裸DNA、裸RNA、无机颗粒、脂质颗粒、基于聚合物的载体或基于壳聚糖的调配物的非病毒载体。
19.一种雷特综合征的方法,所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的根据权利要求1到18中任一项所述的rAAV或根据权利要求23到24所述的载体。
20.一种能用于产生根据权利要求1到18中任一项所述的rAAV的rAAV产生系统,其中所述产生系统包括细胞培养物,所述细胞培养物包括:
(a)编码进化枝F衣壳蛋白的核酸序列;
(b)载体基因组;以及
(c)足以允许将所述载体基因组包装到所述进化枝F衣壳中的AAV rep功能和辅助功能。
21. 根据权利要求20所述的rAAV产生系统,其中所述载体基因组是SEQ ID NO: 1的nt1到nt 2728、或SEQ ID NO: 4的nt 1到nt 3949、或SEQ ID NO: 6的nt 1到nt 2802。
22.根据权利要求20或21所述的rAAV产生系统,其中所述细胞培养物是人胚肾293细胞培养物。
23. 根据权利要求20到22中任一项所述的系统,其中所述AAV rep来自不同的AAV。
24. 根据权利要求23所述的系统,其中所述AAV rep来自AAV2。
25. 根据权利要求20到24中任一项所述的系统,其中AAV rep编码序列和cap基因在同一核酸分子上,其中所述rep序列与所述cap基因之间任选地存在间隔子。
26. 根据权利要求25所述的系统,其中所述间隔子是atgacttaaaccaggt(SEQ ID NO:14)。
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