TGFβ1及Ⅰ型受体ALK1／ALK5
2006;26(5)南方医科大学(JSouthMedUniv)?675??
TGFB1及I型受体ALK1/ALK5mRNA
陈光忠-.李铁林-，全伟z，黄涛-，赵庆平,，王建奇，段传志，汪求精，姜晓丹(南方医科大学珠江医院神
经外科，广东广州510282;z广州市第一人民医院神经外科，广东广州510180；山东省烟台市毓璜顶医院神
lisa多高经外科，山东烟台264000)
摘要：目的探讨转化生长因子131(TGFI31)及其I型受体l,ALK5在脑动静脉畸形中的表达，并探讨其在脑动静
脉畸形发生，发展中的作用.方法应用半定量RT.PCR方法检测脑动静脉畸形中TGFIB1,ALKl及5mRNA的表
达.结果TGFIB1及其受体ALK5mRNA在脑动静脉畸形中的表达均显着性升高，其相对表达量分别为O.777~0.047和
O.585~0.074：受体山【lmRNA表达则显着性降低，相对表达量为O.173~0.O44，与正常对照组的O.720~0.098比较差异
有显着性(.01).结论TGFIB1及其受体山【l,AIrK5mRNA的表达平衡在脑动静脉畸形发生，发展形成中具有重
要作用.
关键词：转化生长因子B1;Alk1;Alk5；脑动静脉畸形
中圈分类号:R651.12文献标识码:A文章编号:16734254(2006)05—0675-03 ExpressionofTGFplanditstypeIreceptorsALK1andALK5mRNAinbrainarteriovenous malformation
CHENGuang-zhong.,LITie-lin.,QUANWei2,HUANGTao.,ZHAOQing-ping~,WANG Jian-qi.,DUANChuan-zhi.,W ANGQiu-jing.,
HANGXiao-dan0
.DepartmentofNeurosurgcry,ZhujiangHospital,SouthernMedicalUniversity,Guangzho
u510282,China;2DeparlmentofNourosurgcry,
FirstMunicipalPeople'SHospitalofGuangzhou,Guangzhou51000,China;~Departmentof Nourosurgcry,YuhuangdingHospitalof
Y antai,Y antai265000,China
Abstract:ObjectiveToexplorotheexpressionoftransforminggrowthfactorbetal(TGFIB1) anditstypeIreceptors
acfivin.1ikekinasel(ALKl1andAI.K5mRNAinthedevelopmentofbrainarteriovenousmal formation(8AVM).Methods
11lemRNAexpressionsofTGFBl,ALKlandAI5weredetectedwithsemiquanfitafiveRT-P CRinpatientswithBAVM.
Results11leexpressionsofTGFB1andAI5mRNAincreasedsignificantlyinBAVM.andthe irrelativeexpressionquantity
were0.777±0.047and0.585±spectively.However,AUlmRNAexpressiondeclinedsignificantlieswitharelative expressionofO.173±0.044incomparisonwiththecontrolgroup(0.720±o.098,P<0.01).Conclusion11lebalance0f.I.GFB1 anditstypeIreceptorsALKlandAI.K5mRNAexpressionsmayplayimportantroleinthedev elopment0fBAVM.
Keywords:transforminggrowthfactorbetal;acfivin-likekina~el:acfivin-likekina~e5:brai narteriovenousmalformation
脑动静脉畸形(BA VMs)是血管畸形中最常见,
血管构筑极其复杂的疾病.目前，对其发生，发展机制
认识甚少，以往研究主要集中在血管内皮生成因子
(VEGF)等血管活性因子方面.而对在血管重塑过程
中具有重要作用的转化生长因子B1(TGFB1)及其受
体研究报道甚少，故本研究拟对TGFI31及其I型受
体ALK1,ALK5在BAVMs中的表达进行研究，探讨
其在BAVMs发生，发展中的意义，为进一步理解
BAⅧs的形成提供理论依据，也为BA VMs的生物
学靶向提供可能.
1材料和方法
1.1一般资料
收藕日期:2005-12-09
作者筒介：陈光忠(1973-)，男，在读博士研究生，电话*************, E-mail:chengz9732~163.~om
收集北京天坛医院，宣武医院，广州珠江医院，广
东省中医院，广州南方医院等多家医院2004年5月
至2005年10月手术切除的BAVM标本20例.其中
男12例，女8例；年龄18～57岁.平均29.5岁.以脑
出血或脑室出血为首发症状者11例；以癫痫为首发
.症状者5例；以头痛为首发症状者3例；偶然发现者
1例.所有病例均按Spetzeler-Martin分级.其中1级
1例,2级2例,3级9例,4级7例,5级1例.因正常
脑组织标本难以获取，故选取15例原发性癫痫病人
的手术标本为正常对照….
1.2的提取及保存
手术切除的脑标本组织无菌条件下保存于冻存
管中.无菌匀浆器匀浆，沉淀中加入Trizol试剂(美国
GibcoBRL产品)，根据试剂说明提取RNA.用紫外
分光光度仪测定RNA浓度，并经琼脂糖凝胶电泳证
实RNA无降解后于一70℃贮存备用.
676?南方医科大学(JSouthMedUniv)第26卷
1.3半定量RT.PCR
选用13-actin基因为内参照基因.反应中所用
B-actin上游引物:5'TTCGCGGGCGACGATGC3'，下
游引物:5'CGAAGTCCAGGGCGAC3'，扩增产物为
609bp:TGFI31上游引物:5'AGGTCACCCGCGTGC TAAT3'.下游引物:5'TCAACCACTGCCGCACAAC T3'.扩增产物为309bp;ALK1上游引物:5'AGC CGCAATGTGCTGGTCAA3'.下游引物:5'AGTCCT CCACGATGCCATTC3'，扩增产物为264bp;ALK5
上游引物:5'AGAGCTGTGAAGCCTTGAGA3'，下游引物:5'TGATGCCTTCCTGTTGACTG3'，扩增产物
为128bp.cDNA序列查自GENEBANK，引物由上
海博亚生物公司合成.(1)反转录：反转录体系及步骤见试剂RNA反转录酶(日本TaKaRa公司)说明，其中RNA酶抑制剂为日本TaKaRa公司产品.(2) PCR反应：反应体系见试剂DNA聚合酶(日本TaKaRa公司)说明.反应步骤为预变性94℃,10min 后加入5U/1聚合酶1ILl；然后94℃,60S,65℃,40 S,72℃,60S,30个循环；最后72℃,10min.(3)琼脂
糖凝胶电泳及半定量分析：取PCR扩增产物5l，置1%琼脂糖凝胶中(含0.15g/ml溴乙啶),TBE电泳
缓冲液中,4Wcm电压电泳45min，用GDAS lmagestone7500图像分析系统(英国,I'公司)对凝
胶上各泳道的2条带分别进行密度扫描定量，以靶基因与p.actin比值表示TGFI31,ALK1及ALK5 mRNA的相对表达水平.
1.4统计学处理
数据输入SPSS10.0统计软件，所有实验组均进
行方差齐性分析，均数比较采用两样本t检验.
2结果
2.1RNA分析
3IRNA样品经甲醛，琼脂胶变性电泳,80V
电压电泳45min，紫外灯下观察到28SRNA:18S
RNA约为1.5:1,5SRNA呈淡云雾状.表明样品为RNA，且无降解.另取样品在紫外分光光度扫描仪上
测吸光度值，计算RNA浓度.各组RNA吸光度值均
大于1.9，说明所提取得RNA纯度较高.
2.2TGFI31,ALK1及ALK5mRNA表达的RT—PCR
检测结果
将提取的RNA与目的基因和内参照基因的引
物置于同一管内行逆转录和PCR扩增，扩增产物与PCRMarker同时电泳(图1)，结果扩增产物大小正
确.用图像分析系统密度扫描定量，计算TGF{3l,
ALK1及ALK5mRNA相对表达水平.TGFI31及ALK5 mRNA表达与正常对照组相比，相对表达量明显升
高(0.01),ALK1mRNA表达与对照组比较，相对
表达量显着性下降(P<0.01，表1).
750
5o0
250
~-actin
TGF-~1
3O9
图1TGFIB1PCR结果
Fig.1PeRproductsofTGYB1
M:Marker;Lanel:Controlgroup;2:BAVM
表lTGFI31,Au(1及AI.K5mRNA在正常对照及BAVMs中的表达
Tab.1ExpressionofTGF131.ALK1andALl【5 mRNAincontrolandBAVMgroups(Mean~D) GroupnTGFB!ALKIALK5
Controll5O.252±o.0140.72O±O.O980.069:e0.060