食用油中苯并[a]芘的分析（紫外分光光度法）
一、原理
将食用油样品的环己烷溶解液与DMSO进行液-液分配，借助PAH与BaP 共轭体系π-键系统与DMSO分子中的S原子相互作用，使PAH与BaP富集于DMSO中，BaP在DMSO-环己烷中的分配系数为5.1，两次分配即达90%以上的富集效率。而脂肪烃和其他脂溶性化合物仍留在环己烷中，从而达到PAH与脂肪烃的分离。当DMSO液加水或加稀盐酸，立即使DMSO-π键离析，再用环己烷反提取PAH或BaP，制备成BaP的环己烷溶解液，部分极性化合物或非烃杂质仍留在稀的DMSO中。用乙酰化纸层分离BaP，在紫外分光光度计上进行测定。紫外分光光度法测定BaP的原理是由于BaP或PAH分子存在着共轭双键π-电子系统，所有的π轭系统均对紫外光有不同程度的吸收。BaP对紫外特征吸收峰为385nm，以此作为BaP的定性测定的依据。
（为进一步除去烷烃和极性较强的杂质，将BaP或PAH的环己烷液通过氧化铝柱，借助PAH与BaP分子中存在着较多的共轭双键，致使它们在氧化铝上的吸附保留特性比烷烃强。从而换用不同的溶剂进行洗脱，使烷烃、芳烃与极性化合物再度分离。）
紫外分光光度法适用于BaP含量在76-30000μg/kg的样品。
附：
◆二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)是一种强吸湿性液体，无无臭，相
对密度为1.100，熔点为18．45℃，沸点为189℃，折射率为1.4795。它是一种既溶于水又溶于很多有机溶剂的非质子极性溶剂。DMSO在芳烃抽提中作为萃取溶剂，具有对芳烃的选择性高，常温下对芳烃无限制混溶，萃取温度低，且不与烷烃、烯烃、水反应、无腐蚀、无毒，萃取工艺简单、设备少、节能，不溶于烯烃，适合含烯烃高的油料，溶剂回收可用反萃取等优点。DMSO对烷烃不溶，因此可用于食品蜡、食用白油的精制和治癌物的检测中。DMSO对乙炔易熔，用于石油气中乙炔回收和溶解乙炔生产中。它还对有机硫化化物、芳烃易溶，因而常用于润滑油、柴油精制中。DMSO含水40％时在一60℃时不冻，而且DMSO与水、雪混合时放热。
◆环己烷(C6H12)，相对分子量84.16，密度（25℃）0.7739 g/cm3，熔点6.5℃，
沸点80.7 ℃，折射率1.4264
二、实验仪器食用油标准
仪器：紫外分光光度计，分液漏斗，三角瓶，试管（带塞），具塞比管，电热恒温水浴锅，振荡器，5ml、100ml容量瓶，瓷盘，大烧杯（制乙酰化纸）
三、实验材料
环己烷(A．R．)，DMSO，无水乙醇(A．R．)；(A．R．)，浓硫酸(A．R．)，氢氧化钠(A，R．) ，无水硫酸钠(A．R．) ，1:1的盐酸，乙醇-二氯甲烷（2:1）乙酰化纸，BaP标准液
◆乙酰化纸：取中速层析滤纸，按纸纹顺向裁成4×30cm 的纸条，松松卷成
环，纸条之间尽量留有空隙，放入盛有360ml苯、260ml（乙酸酐）和0.25ml浓硫酸混合液（三者预先混合均匀再放纸）的大烧杯中用玻璃棒轻轻拨动，排出纸条间的气泡，使纸条充分接触溶液，并不时用玻璃棒在纸环中心搅动反应6h（如果纸条没完全浸没在溶液中再按其比例配适量混合液倒入烧杯中），静置过夜，约20h。取出纸条，置于干净的瓷盘中，在通风橱内凉干，再将纸条卷起，浸没在无水乙醇中，并用玻璃棒拨动纸条，放出加在纸条之间的气泡，然后静置反应4-6h（过夜也可），取出纸条，在室内晾干，压平备用。
BaP标准液：准确称取苯并[a]芘黄结晶25mg，用苯溶解并定容至25ml棕容量瓶中，此液为1mg/ml (1μg/μg) 苯并[a]芘标准贮备液。
从中吸取100μl(0.10ml)于100ml容量瓶中，用苯定容至刻度，加盖摇匀，此液为1μg/m1（1ng/μl）苯并[a]芘的标准使用液，置于冰箱中保存。有效期3-6个月。
另一种方法：苯并[a]芘标准贮存溶液(100μg/m1)：准确称取纯品3，4—苯并芘10．0mg，用环己烷溶解并定容至100ml。
苯并芘[a]标准应用溶液(1μg/m1)): 准确吸取3，4-苯并芘标准贮存液(100μg/m1 ) lml于l00ml容量瓶中，用环己烷稀释定容至刻度.
四、实验步骤
1、样品的浸提：
（1）称取20g食用油于烧杯中用100ml环己烷分次溶解，溶解液倒入分液漏斗中，最后用20mlDMSO分次洗烧杯，洗液也倒入分液漏斗中。
（2）称取2g食用油于烧杯中用15ml环己烷分次溶解，溶解液倒入试管中，最后用2ml DMSO分次洗烧杯，洗液也倒入试管中。
2、DMSO-环己烷液-液分配
（1）向上一步骤中的环己烷浸提液中加入50ml 30-35℃的DMSO，加盖振摇1-2min，静置分层。上层环己烷液再用50nlDMSO提取1次，弃去环己烷液。合并两次DMSO液，加入150ml 1:1的盐酸，冷却后用环己烷反提取两次，每次70ml，振摇1-2min。合并两次环己烷液，弃去下层DMSO稀释液，环己烷液用50ml 6%的NaOH溶液洗一次，蒸馏水3次，每次100ml振摇1min。弃尽水相的环己烷加10-15g无水硫酸钠，摇匀，放置30min脱水。
（2）向上一步骤中的环己烷浸提液中加入5ml 30-35℃的DMSO，加盖振摇1-2min，静置分层。上层环己烷液再用5nlDMSO提取1次，弃去环己烷液。合并两次DMSO液，加入15ml 1:1的盐酸，冷却后用环己烷反提取两次，每次7ml，振摇1-2min。合并两次环己烷液，弃去下层DMSO稀释液，环己烷液用5ml 6%的NaOH溶液洗一次，蒸馏水3次，每次10ml振摇1min。弃尽水相的环己烷加1.0-1.5g无水硫酸钠，摇匀，放置30min脱水
3、纸层分离BaP
上一步得到的脱水的环己烷液点在乙酰化纸条上，BaP含量高的浓缩液部分点样，含量低的浓缩液全部点样。距样品点或带约1cm处点BaP标准约0.05μg，以定位用，点样完毕在暗室进行展开，展开剂为乙醇-二氯甲烷(2:1).待展开剂前沿上升至25cm，去除纸条挥干，然后在365nm紫外灯下观察，用铅笔划出与
BaP 标准点相同颜，相同高度的亮紫荧光带或点。剪下，置于10ml 具比管中，加4ml 环己烷，加盖，于62-65℃水浴上热浸30min ，并不时摇动试管，在365nm 紫外灯下观察纸片上的亮紫荧光带是否全被浸在溶液中，如纸片上仍有亮紫颜，再继续加热10-15min ，直至全部被浸下，冷却后备紫外测定。
4、紫外测定
● 标准与标准曲线：吸取1μg/m1BaP 的标准使用液0.10， 0.20 ，0.40ml ，分别置于5ml 容量瓶或具塞比管中，用环己烷稀释至刻度，加盖摇匀，此标准系列液BaP 的浓度为0.02，0.04，0.08μg/m1或20,40,80ng/ml 。分别倒入石英液槽
中，进行355-410nm 紫外光谱扫描，观察3个标准液在385nm 的吸光度是否成比例，如果成比例，可吸取3个标准液中的任意一个浓度与吸光度为计算依据。 ● 样品测定：保持上述标准测定时的仪器条件，将样品液倒入石英液槽中，进行355-410nm 紫外光谱扫描，以385nm 的实际吸光强度与标准液385nm 的实际吸光度比较，求得样品中BaP 的含量。
5、计算：
BaP 含量（μg/kg ）=W V
A A C
∙∙21
苯并芘测定
分光光度计测定苯并芘环己烷溶液自350一410毫微米波段的吸收光谱曲线。3，4一苯并芘在364、384、403毫微米处有三个吸收波峰，可作为定性参考依据。
样品的提取与定量：取各样品油数毫升，加环己烷及DMF 除油，再用环己烷反萃取3次，收集萃取液于浓缩瓶中浓缩至0.5-1.0mL ，层析后，在紫外灯下定性、定位，采用“底线法”在紫外分光光度计上定量，分别在375nm , 385nm , 395nm 处测光密度，计算样品的相对光密度，从工作曲线中检出样品中BaP 含量，该法检测极限为0. 06mg/L 。
检测限
IUPAC 检出限的定义：“检出限以浓度(或质量)表示，指由特定的分析方法能够合理地检测出的最小分析信号xL 求得的最低浓度cL(或质量qL)”，表达式为：cL(或qL)=(xL-b)/m=KSb/m
式中m 为分析校准曲线在低浓度范围内的斜率；b 为空白平均值；Sb 为空白标准偏差。测定次数为20次，IUPAC 建议K=3作为检出限计算标准。
根据 IUPAC 对检测限 LD 的规定，分光光度分析中可测量的最小分析信号(吸光度) A min 以下式确定：
式中为多次空白测量的平均值；s b为多次空白测量的标准偏差：K为一定置信水平下确定的系数，当置信水平为90%时，K=3。
与A min-相应的浓度即为检测限LD：
式中S 为方法的灵敏度，即回归方程的斜率。
根据20次空白实验结果，求得=0.0018，s b=0.0015，已知S 为3.48×10-3，则
回收率
精密度同一样品重复5次，RSD%
重现性在不同的两天，做相同的样，进行测定，结果的RSD%