韦汝 张纲维
姜武民;黄波
【摘 要】目的 建立0.025%规格维A酸乳膏的HPLC含量测定方法.方法 用紫外分光光度法和高效液相谱法测定维A酸乳膏的含量.用十八烷基键合硅胶为填充剂,以甲醇-2%冰醋酸溶液(81:19)为流动相,检测波长350nm.结果 紫外分光光度法测定结果:107.43%±3.1%、107.35%±3.0%、112.39%±1.1%、109.09%±1.3%.HPLC法测得结果:106.75%±0.32%、107.39%±0.73%、107.93%±0.06%、110.31%±0.11%.结论 紫外分光光度法测得的结果易受外界影响,精密度和准确度不佳,HPLC法测定结果稳定可靠.%Objective To establish the determination method of tretinoin cream (0.025％ ).Methods The tretinoin cream was determined by UV and HPLC, the condition of HPLC was as follows: the tretinoin cream was separated on ODS column with methanol-20％ as mobile phase ,the detection wavelength was 350 nm.Results The results of UV ∶107.43％ ±3.1％ ,107.35％ ±3.0％ ,112.39％ ± 1.1％, 109.09 ± 1.3％ ;the results of HPLC∶ 106.75％ ± 0.32％ ,107.39％ ±0.73％ ,107.93％ ± 0.06,110.31％ ±0.11％.Conclusion Content determination by UV of treti
noin cream is easily influenced by circumstance,and its precision accurate is not good enough compared with the result of HPLC which is steady and reliable.
【期刊名称】《实用药物与临床》
【年(卷),期】2011(014)003
【总页数】2页(P229-230)
富士康员工人数【关键词】维A酸;含量测定;紫外可见分光光度法;高效液相谱法
【作 者】姜武民;黄波
【作者单位】湖北恒安药业有限公司,湖北宜昌,443100;湖北恒安药业有限公司,湖北宜昌,443100
戚薇身高【正文语种】中 文
维A酸乳膏是常见的抗皮肤角化异常药及细胞诱导分化药［1］。主要成分是维A酸不稳定，
见光易分解［2］。而在用紫外法对0.025%规格进行含量测定的过程中，经常会出现结果不准确、不精确、数据易波动等问题。因此，本文用药典收载的方法对0.025%规格的维A酸乳膏进行含量测定，并对具体方法条件进行探究。
1 仪器与试药
1.1 实验仪器 岛津LC-10AT高效液相谱仪，岛津UV-2401PC紫外分光光度计，梅特勒-托利多AB204-S电子分析天平，超声仪。
1.2 实验试剂 维A酸对照品(中国生物制品检验检定所提供，批号:100307-200201)，维A酸乳膏(规格:25 g∶6.25 mg，批号:100701、100702、100705;规格:15 g∶3.75 mg，批号:100904。湖北恒安药业有限公司生产)、异丙醇(HPLC级)、甲醇(HPLC 级)、冰醋酸(分析纯)、N，N-二甲基甲酰胺(分析纯)、氯仿(分析纯)，其他试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 紫外分光光度法(UV) 按国家药品标准WS-10001-(HD-0282)-2002中有关维A酸乳膏含量测定的规定避光操作。对照品溶液的制备:精密称取在105℃干燥至恒重的维A酸对照品
适量，加 N，N-二甲基甲酰胺-氯仿-异丙醇(1∶2∶2)溶解制成每1 mL中约含3.75 μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备:取维A酸乳膏适量(约相当于维A酸0.375 mg)，精密称定，置100 mL量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺20 mL振摇溶解后，加氯仿-异丙醇(1∶1)稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。
测定法:取上述两种溶液，照紫外分光光度法操作规程测定，在358 nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。平行操作6次，取均值。
2.2 高效液相谱法(HPLC)
2.2.1 溶液的配制［3］ 对照品溶液的配制:避光操作，精密称取维A酸对照品约10 mg置100 mL量瓶中，加异丙醇10 mL使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL置200 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，取80 μL进入高效液相谱仪。
供试品溶液的配制:避光操作，分别精密称取乳膏约1、2和4 g置100 mL容量瓶内，加异丙醇10 mL，振摇，加入甲醇适量，超声10 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，
分别精密量取续滤液80、40、20 μL，进入高效液相谱仪。各浓度平行进样6次，结果取均值。
避光操作，精密称取本品约1 g，置100 mL容量瓶中，加异丙醇10 mL，摇匀，加甲醇适量，分别超声处理10、15和20 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液80 μL注入高效液相谱仪。各浓度平行进样6次，结果取均值。
2.2.2 谱条件与系统性实验 按照中国药典2010年版二部规定的维A酸乳膏的含量测定标准:用十八烷基键合硅胶做填充剂，以甲醇-2%冰醋酸溶液(81∶19)为流动相，检测波长为350 nm。理论塔板数按维A酸峰计算不低于3 000，维A酸峰与异维A酸峰的分离度应大于5.0。
3 结果与讨论
3.1 UV法测定结果 按规定方法对4个批号的样品进行了测定，结果见表1。
表1 UV法测定维A酸乳膏结果(±s，n=6)批号100701 100702 100705 100904百分含量(%)107.43±3.0 107.35±3.0 112.39±1.10 109.09±1.3
3.2 HPLC法测定结果 分别称取乳膏约1、2和4 g，进样量分别为 80、40和20 μL。结果见表2。
表2 不同称样量的HPLC法结果(批号:100904，±s，n=6)称样量(g)124进样量(μL)80 40 20百分含量(%)108.36±0.01 108.01±0.02 102.85±0.10
从表2可以看出，随着称样量增高，测得的百分含量降低，而且溶解过程中发现称样量为1 g的样品溶解比较完全，称样量为2 g和4 g的样品有部分样品不能完全溶解，因此，选定称样量为1 g，进样量为80 μL。精密称取本品约1 g，依法处理后分别超声10、15和20 min，进样量为80 μL的实验结果如表3所示。
表3 不同超声时间的HPLC法结果(±s，n=6)超声时间(min)100701 100702 100705 10 106.70±0.08 106.40±0.03 107.14±0.04 15 106.39±0.05 108.17±0.04 108.43±0.03 20 107.17±0.02 107.60±0.01 108.21±0.04
从表3可以看出，不同超声时间与测得结果之间没有规律变化，而且超声时间长短对测定结果没有太大的影响，因此，选定超声时间为10 min。
教师节手工礼物qq空间签名大全综上所述，本实验探究的0.025%规格维A酸乳膏含量测定的HPLC方法:避光操作，精密称取本品约1 g，置容量瓶中，加异丙醇10 mL，摇匀，加甲醇适量，超声处理10 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。照维A酸含量测定项下谱条件，精密量取续滤液80 μL注入液相谱仪，记录谱图。精密称定维A酸对照品约10 mg置100 mL量瓶中，加异丙醇10 mL使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，稀释成每1 mL含2.5 μg的溶液，用甲醇定容至刻度，同法测定，按外标法以峰面积计算即得。
3.3 探究的HPLC法和国家标准方法测得结果对比 分别用两种方法对4批0.025%规格的维A酸乳膏进行了含量测定，结果见表4。
表4 HPLC法和UV法测定维A酸乳膏结果(%，n=6)批号100701 100702 100705 100904 HPLC法 106.75±0.32 107.39±0.73 107.93±0.61 110.30±0.12 UV法 107.43±3.00 107.35±3.00 112.39±1.10 109.09±1.30
从表4可见，0.025%规格的维A酸乳膏用国家标准UV法测得结果的准确度和精密度均不理想，对药典原规定方法改进后的HPLC法与原标准方法相比，准确度和精密度都有了很大提高，结果表明，原标准中方法测定结果不准确，改进后的HPLC法结果准确。
赵晓岗等［4］发现，维A酸乳膏中，维甲酸最大吸收的波长不在352 nm处，而是在346 nm处，维A酸乳膏中的基质对紫外测定有一定的干扰［5］。夏曙辉等将中国医院制剂规范［6］采用分光光度法测定维A酸的吸光度作为质控指标。由于软膏基质中的凡士林和其他辅料在此波长有吸收，掩盖了维A酸的吸收峰，方法特异性较差［7］。
维A酸对光、空气等敏感，很不稳定。郭怀忠等［8］研究发现，在不避光的条件下进行维A酸溶液的稳定性试验，发现吸收度约以0.007/min的速度下降，并且发现这个比率与光强成正比关系，变化显著。所以，进行维A酸的鉴别和含量测定时一定要注意避光操作，须使用深棕量瓶，否则会造成明显的负误差。测定应该快速进行，所用对照品、溶剂宜现配现用，尽量减少操作时间和溶剂挥发。在进行过滤操作时，应使溶液冷却后再过滤，温度较高时不宜操作，易带入固体杂质。
综上所述，对于维A酸乳膏(0.025%)的含量测定，改进后的2010版维A酸(0.1%)药典方法比原国家标准的紫外方法更适宜，结果更准确可靠。
参考文献:
［1］ 葛继红，张全梅，刘冰，等.紫外分光光度法测定维甲酸软膏中维甲酸的含量［J］.新疆医科大学学报，2009，32(6):737-738.
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