用体外细胞培养法研究药物的作用，观察各种药物及其不同剂量对离体细胞的作用，可作为机体使用时的参考。
一、细胞培养在药物敏感试验中的作用
鬼片排行榜采用细胞培养法不仅了可以检查细胞系（株）对药物的敏感性，而且还可做体内和体外敏感性的比较，同时也可观察不同药物所引起的体外细胞形态结构和生理、代谢的变化，如铵盐和腺苷均可使细胞浆内形成空泡；脓绿素可增加细胞对氧的吸收，抑制细胞核的分裂；一定剂量的复方丹参能阻碍细胞贴壁，可影响人食管癌细胞对基质的附着作用，故有“活血化瘀”的疗效。有些药物时细胞核分裂的毒物，如吖啶黄、秋水仙素与肾上腺素。吖啶黄可使细胞在核分裂时形成染“桥”，使已分裂的两个细胞不能完全分开。秋水仙素可以抑制细胞纺锤体的活动，是有丝分裂中控制细胞分裂中期染体图像的有效药物。肾上腺素可以引起细胞核的分裂异常。
利用细胞培养法进行抗癌药物的研究不仅可以帮助解决药物的机制问题，而且可以精确地
测定和计算出各种药物的有效作用浓度，如半数抑制浓度（IC50）;半数致死浓度（LD50）等对临床均有一定的参考价值。
试验中应注意的问题：
●有的药物在体外试验时无致癌性，进入体内在某些酶的激活下可产生致癌作用，另外还存在着癌细胞耐药性问题。
●一般来说，细胞培养比较适用于单质药物测试，在用复方药或中药进行试验时，由于药物成分多，加上每批药物之间可能存在着质和量上的差异，评价时应考虑这些因素，持客观而谨慎的态度。
●非水溶物测试的溶剂，应设溶剂对照组，以排除溶剂作用。
郑元畅演过的电视剧二、药物敏感试验方法
（一）药物的准备
一般试验均以100倍浓缩液做储备液，根据不用药物可以用生理盐水、平衡盐溶液、葡萄
糖盐水融解和稀释，但有的需用75%酒精或二甲基亚砜等有机物溶剂进行融解，但这种溶剂在细胞培养基总浓度不宜过大，一般为0.5%-1%，以防止溶剂对细胞产生毒性作用而影响细胞生长，不同的药物储备液应妥善保存在合适的环境和条件下，有的需暗藏，有的需低温保存。有的甚至需达-70℃以下药物才可获得稳定保存，如细胞因子药物。
体外药物敏感性试验所用的药物浓度，一般为临川血浆高峰浓度的0.1倍及10倍为宜。
试验时既要有阴性对照，又要有阳性对照，稀释药物要呈5-7个对数级浓度，所用药物的浓度选择亦有差异，但试验中应先做预实验来选定。同时要选择合适浓度以避免非特异作用所产生的假阳性的结果。药物作用时间可因试验方法而异，短期法，如测NKCF只需4-5h，中期法如MMT法测细胞因子活性需4-6天，长期打如集落形成试验造血细胞因子则需2-3周等。
（二）受试细胞的准备
根据实验目的可选用体外培养的肿瘤细胞系（株），如国内外确认的稳定细胞系（株），也可以用肿瘤患者的新鲜手术肿瘤标本，后者需采用机械分散法或酶消化法等分离技术，
分离出肿瘤细胞悬液，血液系统肿瘤患者可取外周血或骨髓标本分离单个核细胞（MNC），制成悬液，以供试验用。原则上要选用对药物能产生特定作用的细胞种类，其一致性和符合性越大越好，若人源细胞不能获得，可用哺乳动物细胞。
（三）药效的评价
1、体外抑瘤试验
合成化合物或植物提取物纯品的IC50<10ug/ml，或植物粗提物的IC50<20ug/ml，并且有细胞毒性的剂量依赖性关系，其最高抑制效应达80%以上，发酵液IC50应大于1：100，则判定样品在体外对细胞有杀伤作用，同时应设有阴性对照和阳性对照药物以排除实验系统的误差，同时要有正常二倍体细胞与癌细胞作对照，以判定抗癌作用的药效特异性。
2、已被抑瘤试验
实体瘤的疗效以瘤重抑制率表示
罗云煕中草药抑制率大于3%，合成药大于40%，且有统计学意义。重复3次，结果稳定，每个剂
量所用动物不少于4只，应设阴性和阳性对照组。如果属间接抑癌药物应提前1周给药以使免疫-内分泌对药物产生应答。
（四）体外药物对肿瘤细胞的敏感试验
1、美蓝法
其原理是利用活细胞的脱氢酶提供氢离子，使甲烯蓝（美蓝）还原为甲烯白（无），细胞死亡之后，脱氢酶失活，无法使甲烯蓝还原，因此被染成蓝，检测用药后的死细胞数能反映药物的抑瘤作用。
2、染料排除法
反义词的词语根据活细胞在低浓度染液中不着的特点，一般用0.2%台盼蓝或0.1%伊红染料，当药物导致细胞死亡时，细胞膜通透性增加，致使染料进入胞内而着，加药后计算着细胞数，以示药效，由于某些濒临死亡的细胞不宜着，故假阴性率较高。
3、生长曲线测定法
癌细胞在最适条件下呈指数生长，当细胞处于对数生长期时用于试验，以细胞数的对数与培养时间可得一条生长曲线，比较加药组合对照组细胞生长曲线，可反映出药物对肿瘤细胞生长的影响。本实验可获得3方面的数据。
（1）药物对细胞生长的抑制率：将对照组及加药组细胞生长曲线的线性部分延伸至Y轴，可分别得到载距N0及N0/。它们分别代表两组接种后具有增值能力的细胞数。
（2）药物对倍增时间（TD）的影响：以t代表培养时间，N0及Nt分别代表接种时刻及经培养t小时后的细胞数，按公式计算倍增时间，如果药物组倍增时间延长表明药物使细胞增值能力减弱。
（3）药物对细胞生长饱和密度（NS）的影响：取处于生长稳定期的培养细胞，计算单位面积或体积的细胞均数，即为细胞生长达饱和的密度，此数值减小也表示细胞增殖活性减弱。
4、集落形成试验法
三个火是什么字肿瘤细胞与造血干/祖细胞一样，含有极少部分具有自我复制和增值能力的干细胞，具有分
化和形成集落的特性，肿瘤细胞干细胞可为放射和化疗药物的靶细胞，它与肿瘤的治愈、复发或转移关系密切。造血干/祖细胞与机体造血功能及经放化疗后患者骨髓抑制状态的恢复和造血功能的重建也密切相关，故集落形成试验既可作为体外检测抗癌药物对肿瘤细胞敏感性的试验方法，又可作为抗癌药物所产生的患者骨髓抑制的恢复和造血功能重建的重要手段。并可对患者的骨髓造血状态进行动态观察。
（1）肿瘤干细胞集落形成试验：
根据公式计算肿瘤细胞干细胞集落抑制率。
在半对数纸上以集落抑制率与计量对数作图，可以得到一条S形曲线并求出药物的IC50值，或者求出集落存活分数（S）.
以集落存活分数的对数与计量作图，可以得到细胞存活曲线，由于药物对细胞杀伤作用一般遵循一级动力学，即一定量的药物杀死一定百分比的细胞，故存活曲线呈带肩区的斜率的向下的直线，其方程为S=1-(1-e-D/D0)n，S为存活分数，D是药物剂量，D0是存活分数在细胞存活曲线中直线部分下降63%所需的剂量，n是曲线指数部分外延至Y轴的截距，称
为推值。D0越小，敏感性越高。n反映细胞对药物引起的损伤的修复能力，n越大，表示杀死细胞所需的药物阈剂量越大。
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