网络出版时间：２０２１－１－２０１１：４６ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０２１０１１９．１０５９．００１．ｈｔｍｌ
刘 甜，任家材，张世英，任俊奇，袁静萍
关键词：新型冠状病毒；细胞蜡块；安全防护；免疫组织化学中图分类号：Ｒ４４６ ９ 文献标志码：Ｂ 文章编号：１００１－７３９９（２０２１）０１－０００３－０３ｄｏｉ：１０．１３３１５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｅｐ．２０２１．０１．００２
接受日期：２０２０－１１－２５
作者单位：武汉大学人民医院病理科，武汉 ４３００６０作者简介：刘 甜，女，技师。Ｅ ｍａｉｌ：８７９３１５０１４＠ｑｑ．ｃｏｍ
袁静萍，女，博士，主任医师，通讯作者。Ｅ ｍａｉｌ：ｙｕａｎｊｉｎｇ ｐｉｎｇ２００３＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ
新型冠状病毒肺炎（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｄｉｓｅａｓｅ２０１９，ＣＯＶＩＤ １９）作为一种急性呼吸道传染病，可通过飞沫、气溶胶等方式进行传播
［１］
。病理科细胞室工作人员在日常工作中，会接触
确诊或疑似ＣＯＶＩＤ １９患者的痰液、胸腔积液、腹腔积液等标本，这些标本在离心包埋过程中易产生气溶胶污染以及液体飞溅导致的体液污染，因此如何在细胞学制片的技术环节阻断生物安全隐患对医务人员的安全防护具有重要意义。新型冠状病毒（
ｓｅｖｅｒｅａｃｕｔｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ ＣｏＶ ２）属于β属的冠状病毒，对紫外线和热敏感，５６℃３０ｍｉｎ、７５％乙醇、含氯消毒剂等脂溶剂均可有效灭活病毒，病理科常用的福尔马林、戊二醛也可以通过烷基化反应有效灭活Ｓ
ＡＲＳ ＣｏＶ ２［２］
。然而，笔者发现福尔马林固定后的细胞学标本常常发生细胞固缩，尤其是细胞学涂片标本细胞固缩较为严重，对诊断影响较大，但福尔马林对免疫组化影响不大。如果将固定后的细胞学标本收集制作
细胞蜡块，结合免疫组化可达到明确诊断的同时预防ＳＡＲＳ ＣｏＶ ２感染传播效果，现介绍如下。１ 材料与方法
１．１ 一般资料 选取２０２０年３月武汉大学人民医院病理科细胞室接收的胸、腹腔积液标本３例作为研究对象，所有标本ＳＡＲＳ ＣｏＶ ２核酸检测均为阴性，但为防止可能的感染，病理细胞室在岗技术人员接收标本时仍需重点做好三级防护措施，应戴口罩、手套、护目镜、穿防护服。
１．２ 方法 将接收后的细胞学标本一部分作为固定组，按照细胞学标本与１００％福尔马林原液１０∶１的比例混匀后（福尔马林浓度为１０％）固定４～６ｈ后再离心。剩余细胞学标本作为未固定组，采用传统方法，即不加固定液直接离心。离心后的标本按照常规操作制作细胞涂片和细胞蜡块，分别采用瑞氏－
吉姆萨染和ＨＥ染观察细胞病理形态，若细胞蜡块ＨＥ染切片中查见肿瘤细胞，进一步行免疫组化染。免疫组化染采用ＥｎＶｉｓｉｏｎ两步法，抗体购自ＤＡＫＯ公司。２ 结果
２．１ 福尔马林固定对细胞涂片瑞氏－吉姆萨染的影响 未固定组制作出的细胞涂片，脱落细胞形态结构异型性明显，细胞呈团片状分布，核质比高，细胞质蓝染，染质及核膜清晰，可以分辨细胞类型（图１）；经福尔马林固定后，镜下见细胞数量减少，细胞呈团状分布，细胞核皱缩明显，结构不清，未见明显细胞质（图２），对诊断影响很大。
２．２ 福尔马林固定对细胞蜡块ＨＥ染的影响 固定组与未固定组中细胞蜡块Ｈ
Ｅ染均可见大量散在分布的肿瘤细胞，部分呈巢状分布，细胞异型性明显，细胞质强嗜酸性，细胞核呈毛玻璃状（图３、４）。相对于未固定组，固定组中福尔马林对细胞形态学有一定的影响，可见细胞皱缩，细胞核形态模糊，胞质内沉淀增加。此外，比较固定后的细胞涂片和细胞蜡块中的细胞形态，可见福尔马林固定对细胞蜡块中细胞形态学的影响低于细胞涂片。
２．３ 福尔马林固定对细胞蜡块免疫组化染的影响 由于细胞涂片细胞量通常较少，而细胞蜡块含有大量散在分布的肿瘤细胞，具有组织学形态，可通过免疫组化进一步辅助判断肿瘤细胞的来源及分类。笔者发现福尔马林固定对免疫组化影响较小：固定组与未固定组中免疫组化染背景均干净，细胞质（图５、６）、细胞膜（图７、８）及细胞核（图９、１０）的阳性着部位均正确，且特异性强，无非特异性着。３ 讨论
ＣＯＶＩＤ １９作为一种急性呼吸道传染病已被纳入《传染病防治法》规定的乙类传染病，并要求采取的预
防与控制措施［
３］
。
病理细胞室会接触感染性标本，包括未灭活的含ＳＡＲＳ ＣｏＶ ２的标本，如痰、支气管灌洗液、纤维支气管镜涂片和胸、腹水标本等。因此，对细胞学标本进行固定灭活尤其重要，以防止生物安全感染。福尔马林对各种病原体（细菌、芽胞、病毒等）有强大的灭活作用。据报道，０ ０５％～０ ２５％甲醛在６～１２ｈ内能杀死细菌、芽胞及病毒，１％～２％甲醛在几分钟内可杀死普通细菌，４％甲醛１５ｍｉｎ可杀死芽胞、结核杆菌及多数病毒。病理科常用福尔马林原液（即４０％甲醛）以体积比１∶１０比例固定细胞学标本以防止胸水变质退变，同时也能达到对标本固定灭活的作
用［４－５］
。
①②③④⑤⑥⑦⑧
⑨⑩图１ 未固定组细胞学涂片，瑞氏－吉姆萨染 图２ 固定组细胞学涂片，瑞氏－吉姆萨染 图３ 未固定组细胞蜡块切片图４ 固定组细胞蜡块切片 图５ 未固定组细胞质ＣＫ７阳性，ＥｎＶｉｓｉｏｎ两步法 图６ 固定组细胞质ＣＫ７阳性，ＥｎＶｉｓｉｏｎ两步法 图７ 未固定组细胞膜ＥＭＡ阳性，ＥｎＶｉｓｉｏｎ两步法 图８ 固定组细胞膜ＥＭＡ阳性，ＥｎＶｉｓｉｏｎ两步法 图９ 未固定组细胞核ＷＴ １阳性，ＥｎＶｉｓｉｏｎ两步法 图１０ 固定组细胞核ＷＴ １阳性，ＥｎＶｉｓｉｏｎ两步法
贺卡祝福语
福尔马林虽然具有灭活病毒和标本固定的作用，然而经福尔马林固定后的细胞胞核染加深，细胞形态易皱缩。笔者发现细胞学标本固定后制作的细胞涂片细胞量减少，细胞核皱缩明显，结构不清，未见明显细胞质，无法明确诊断，因此防疫期间尽量避免细胞涂片的特殊操作。虽然福尔马林固定使细胞蜡块中细胞形态皱缩，但相比于细胞涂片，福尔马林固定对细胞蜡块中细胞形态学的影响较小，我们仍然能够从固定后的细胞蜡块ＨＥ染中观察到大量散在分布的肿瘤细胞，究其原因可能是细胞涂片一般细胞量少，无组织结构，经福尔马林固定后细胞缩小更易脱落，因此残余的散在分布且皱缩明显的细胞对诊断影响较大，而细胞蜡块收集的细胞丰富且集中，有较好的组织结构，类似于组织蜡块，而福尔马林对组织收缩较小，因此福尔马林对细胞蜡块中的细胞形态学整体影响小于细胞涂片。另一方面，细胞蜡块还可以通过免疫组化进一步明确诊断肿瘤细胞类型及来源。福尔马林固定液主要通过使蛋白质分子发生交联而产生作用，因此可原位保存抗原，且对组织穿透性强，收缩性小，是免疫组化应用最广泛的固定液［６］。本实验结果显示，福尔马林固定液对细胞蜡块中细胞质、细胞膜和细胞核的阳性着及定位影响均较小。因此，在ＣＯＶＩＤ １９疫情期间，不建议做细胞学涂片，建议对新鲜的细胞学标本用福尔马林固定后制作细胞蜡块结合免疫组化结果来进行诊断，从而在预防生物安全感染的基础上保证医疗质量。
工作人员虽然已经采用对细胞学标本进行固定后再操作以减少细胞学生物安全感染，但仍需做好自身防护，这样才能保证医疗生物安全。因此病理细胞室应使用专门通道接收细胞学标本，且接收细胞学标本过程中不应打开密闭包装，密闭包装外表使用７５％医用乙醇（或１０００ｍｇ／Ｌ的含氯
消毒液）进行喷洒消毒（注意保护样本标签）。请注意乙醇和含氯消毒液会使某些标记笔书写消失。接触感染性标本的人员应执行三级防护，至少应着医用防护口罩、帽子、护目镜（或防护面屏）、连体防护服、双层乳胶手套及鞋套，操作完毕后应及时更换外层乳胶手套。完成工作后，应该按照标准步骤脱掉防护用品，并做好手部卫生。剩余的胸、腹腔积液以及痰液应统一放置专门回收容器按照医疗废弃物或者感染废弃物进行处理。每天检测完毕后，工作环境使用紫外线照射消毒１ｈ，设备表面、台面及地面按规定进行清洁、消毒。
综上所述，作者建议疫情期间病理细胞学标本固定后制作细胞蜡块进行诊断，同时也要做好细胞病理室的生物安全防护。
参考文献：
［１］ 国家卫生健康委员会．关于印发新型冠状病毒肺炎诊疗方案
（试行第７版）的通知［ＥＢ／ＯＬ］．［２０２０－０３－０４］．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｃ．ｇｏｖ．ｃｎ／２０２０ ０３／０４／ｃ＿１５８４８７２６３４６４４６３３．ｈｔｍ．［２］ 胡雪莲，顾 鹏，胡田雨，等．冠状病毒的环境抵抗力及消毒剂选择［Ｊ］．重庆医学，２０２０：１－８．
索芭朵
［３］ 国家卫生健康委员会．《中华人民共和国国家卫生健康委员会公告２０２０年第１号》［ＥＢ／ＯＬ］．［２０２０ ０１ ２０］．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｈｃ．ｇｏｖ．ｃｎ／ｊｋｊ／ｓ７９１６／２０２００１／４４ａ３ｂ８２４５ｅ８０４９ｄ２８３７ａ４ｆ２７５２９ｃｄ３８６．ｓｈｔｍｌ．
［４］ 孟宪涛．甲醛在和消毒上的应用［Ｊ］．上海畜牧兽医通讯，１９８８，２：１３－１４．
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［６］ 苟继周，李晓星，孙 炎，等．组织固定对下游基因和蛋白分子检测的影响［Ｊ］．临床与实验病理学杂志，２０２０，３６（４）：４３９
－４４１．
网络出版时间：２０２１－１－２０９：１７ 网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０２１０１１９．１０５９．００３．ｈｔｍｌ新型冠状病毒肺炎尸检样本中福尔马林素的识别与消除
段 裴，刘旭光，付 冉，蔡航航，刘泰文，许三鹏
关键词：新型冠状病毒；尸检；福尔马林素；氨水乙醇
中图分类号：Ｒ４４６ ９ 文献标志码：Ｂ
文章编号：１００１－７３９９（２０２１）０１－０００５－０３
ｄｏｉ：１０．１３３１５／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｅｐ．２０２１．０１．００３
２０１９年底至今肆虐全球的新型冠状病毒（ｓｅｖｅｒｅａｃｕｔｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ２，ＳＡＲＳ ＣｏＶ ２）已经造成全球７５１２万余人感染［１］。新型冠状病毒肺炎（ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓｄｉｓ ｅａｓｅ２０１９，ＣＯＶＩＤ １９）尸检样本是珍贵并极具价值的诊断和研究材料。２０２０年２～３月华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所与同济医学院法医学系共同完成了９例ＣＯＶＩＤ １９尸检工作。在病理诊断与研究过程中，首先在部分免疫组化切片中发现了棕褐大小不等的圆形球状颗粒。这些棕褐颗粒对免疫组化结果判读造成了困扰。复习ＨＥ切片时，发现在相同位置存在类似的棕黑颗粒分
口袋妖怪叶绿版攻略接受日期：２０２０－１１－１６
基金项目：科技部公共安全风险防控与应急技术装备—应急项目（２０２０ＹＦＣ０８４４７００）、华中科技大学同济医学院附属同济
医院院基金（ＸＸＧＺＢＤＹＪ０１０）
作者单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所，武汉 ４３００３０
作者简介：段 裴，男，技师。Ｅ ｍａｉｌ：６１６３１６５７＠ｑｑ．ｃｏｍ
许三鹏，男，博士，主管技师，通讯作者。Ｅ ｍａｉｌ：
５６５１１０００５＠ｑｑ．ｃｏｍ布，需与肺部的碳颗粒、含铁血黄素颗粒、脑的脂褐素、肝脏的胆素等素鉴别。综合分析认为这些棕褐、棕黑近圆形颗粒更像是福尔马林素。查阅文献［２］后使用消除福尔马林素的方法对相关切片进行处理，发现经处理后相关素消失，证明了最初的推断。现对相关实验方法、处理经验介绍如下。
１ 材料与方法
１．１ 标本来源 收集２０２０年２～３月华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所和同济医学院法学系共同尸检的９例ＣＯＶＩＤ １９，尸检组织行ＨＥ染，镜下观察。取其中１例ＣＯ
ＶＩＤ １９尸检样本的心、肝、脾、肺、肾等组织和１例非ＣＯＶＩＤ １９子宫肌瘤手术样本（对照组织）制备组织芯片，进行脱素和相关实验。非诚勿扰白闪闪
１．２ 试剂配制 ５０ｍＬ氨水加入３５０ｍＬ无水乙醇，使用蒸馏水补足５００ｍＬ，得到１０％氨水乙醇溶液。Ｋｉ ６７（ＵＭ ＡＢ１０７，１∶４００稀释，北京中杉金桥公司），免疫组化二抗系统（ＥｎＶｉｓｉｏｎＫ８００２，ＤＡＫＯ公司）。ＨＥ染使用日本樱花全自动ＨＥ染与封片系统进行，Ｋｉ ６７免疫组化染在ＤＡＫＯ公司ＡＵＴＯＳＴＡＩＮＥＲＬＩＮＫ４８自动免疫组化仪上进行。１．３ 方法 （１）观察９例ＣＯＶＩＤ １９尸检样本ＨＥ染切片中心、肝、脾、肺、肾等组织中福尔马林素存在状态。（２）取其中１例ＣＯＶＩＤ １９心、肝、脾、肺、肾等样本和１例非ＣＯ ＶＩＤ １９子宫肌瘤组织（组织对照），制作成多组织芯片蜡块。
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