地补更年安颗粒是在原甘麦大枣汤的基础上，通过加减药味改制成的新型中药复方制剂，由五味子、葛根、当归、补骨脂等中药组成，具有镇惊安神、宽胸宁心之功效，主要用于妇女更年期综合征引起的脏躁，临床表现为情绪多变、烦躁不安、失眠多梦、头昏目眩、潮热自汗、心悸、胸闷等证。为保障制剂稳定和可控，笔者对其制备工艺进行了研究，并建立质量控制方法，以满足中医临床的需要，以及适应中药现代化的需求。
1仪器与试药
高效液相谱（HPLC）仪，包括510高压泵、486紫外检测器、N2000谱数据工作站（美国Waters公司）；AUW120D十万分之一分析天平（日本Shimadzu公司）；DK-98-1型电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；JYL-19BE5型电磁炉（山东九阳小家电有限公司）；PB10pH检测计（德国Sartorius公司）。
五味子、熟地黄、黄芪、党参、补骨脂、当归、丹参饮片（安国市健仁药材有限公司，批号分别为080326、080326、080311、080226、080226、080317、080317）；五味子醇甲对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110857-200709）；甲醇、乙腈为谱醇，其他试剂均为分析纯。
2五味子醇甲提取方法的选择[1～3]
工业常用提取方法有回流法、渗漉法、冷浸法。笔者首先对不同提取方法进行考察，在相同溶媒条件下，以五味子醇甲含量为指标，优选最佳提取方法。
2.1样品溶液的制备
取五味子药材，粉碎，平行称取3份，每份24g。（1）回流法：加10倍量乙醇，回流提取1h；（2）渗漉法：95％乙醇提渍48h后，控制流速为1～3mL·min-1，渗漉过程中不断补充溶剂，制备渗漉液；（3）冷浸法：用10倍量体积分数95％乙醇冷浸48h，过滤，回收部分乙醇，定容至50mL量瓶中。精密吸取3种样品溶液各5mL，置10mL量瓶中，乙醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，滤液备用。
2.2对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的五味子醇甲对照品适量，用甲醇溶解，制备成每1mL含0.203mg五味子醇甲的对照品溶液。
2.3五味子醇甲含量测定[4～8]
2.3.1谱条件谱柱：Kromasil C
18
（200mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（45∶55）；流速：1mL·min-1；检测波长：250 nm；柱温：室温；进样量：20μL。
2.3.2含量测定分别精密吸取对照品溶液、样品溶液各20μL，按上述谱条件进样测定峰面积，以五味子醇甲的进样量对峰面积积分值作线性回归，得回归方程为Y＝52739890.52X－140.14（r＝0.9993），计算样品含量。结果，回流法、渗滤法、冷浸法提取得到的五味子醇甲含量分别为0.5261％、0.4582％、0.4424％，表明回流法提取所得的五味子醇甲含量最高，故选用回流法提取五味子浸膏。
3正交试验优选提取工艺
3.1因素水平的选择
根据预试验和以往经验，选取影响回流法提取的乙醇浓度（A）、溶媒用量（B）、提取时间（C）为考察因素，选用L9（34）正交试验表筛选最佳工艺。因素水平见表1。
3.2供试品溶液的制备
称取五味子药材27g，粉碎，平均分成9份，按照L9（34）正交表安排试验，滤过，滤液回收乙醇，转移至50mL量瓶中，精密量取25mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，冷却0.5h，迅速称重。
精密吸取50mL量瓶中溶液5mL，置10mL
正交试验优选地补更年安颗粒中五味子药材的醇提工艺
赵明宏＊，安晔，王丹，王常丽，吴琼（沈阳军区总医院药剂科，沈阳市110840）
中图分类号R284.2；R283.627文献标识码A文章编号1001-0408（2011）27-2539-02
摘要目的：优选地补更年安颗粒中五味子药材的醇提工艺。方法：以乙醇浓度、溶媒用量、提取时间为考察因素，以五味子醇甲含量和浸膏得率的综合评分为评价指标，采用正交试验优选制剂中五味子药材醇提最佳工艺。结果：最佳醇提工艺为五味子加10倍量95％乙醇回流提取3h。结论：优选工艺简单、可行，可为该制剂的后续研究提供理论依据。
关键词地补更年安颗粒；正交试验；制备工艺；质量控制；五味子醇甲
Optimazition of the Ethanol Extraction of Schisandra chinensis in Dibu Gengnianan Granules by Orthogo-nal Test
ZHAO Ming-hong，AN Ye，WANG Dan，WANG Chang-li，WU Qiong（Dept.of Pharmacy，General Hospital of Shenyang Military Region，Shenyang110840，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To optimize the ethanol extraction of Schisandro chinensis in Dibu gengnianan granules.METHODS：Orthogonal test was used to optimize the extraction technology of Dibu gengnianan granules using ethanol concentration，ethanol amount and extraction time as factors and with the content of schisandrin and the yield of extract as index.RESULTS：Optimized extraction process was as follows：S.chinensis was extracted with10-fold95％alcohol for3h by the method of refluxing.CON-CLUSION：The optimal process is simple and feasible，and can provided reference for sequential studies.
KEY WORDS Dibu gengnianan granules；Orthogonal test；Preparation process；Quality control；Schisandrin
＊副主任药师，博士。研究方向：中药新药研发。电话：024-
28851751。E-mail：minghongzhao@163
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中国药房2011年第22卷第27期China Pharmacy2011V ol.22No.27
量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
3.3正交试验结果
按“2.3.1”项下谱条件，取各供试品溶液10μL，注入液相谱仪，计算五味子醇甲的含量，并按下式计算浸膏得率：浸膏得率＝获得浸膏重量/原药材重量×100％。根据药材性质以及剂型要求，选取浸膏得率、五味子醇甲含量为评价指标，进行综合评价。五味子醇甲含量的权重系数为0.6，浸膏得率的权重系数为0.4，综合评分＝0.6×五味子醇甲含量（％）+0.4×浸膏得率（％）。综合评分数值越大，则工艺越佳。结果，经方差分析可知，各因素对提取工艺的影响程度依次为A＞C＞B，其中乙醇浓度和提取时间对提取效果有显著性影响（P＜0.05），溶媒用量无显著性影响；由直观分析得五味子醇提最佳工艺为A1B2C3，即95％乙醇，10倍量回流提取3h。正交试验结果见表2；方差分析结果见表3。
表2正交试验结果
Tab2Results of orthogonal experiment
试验号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2 K3 R SS
因素
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
283.019
240.472
197.852
85.167
1208.903
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
243.167
244.404
233.772
10.632
22.537
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
214.014
253.102
254.227
40.214
429.256
D
1
2
3
3
1
2
2
3
1
244.570
234.247
242.526
10.322
19.920
评价指标
甲含量/％
0.4544
0.5230
0.5210
0.4159
刘永辉照片0.4401
0.2467
0.2643
0.1771
剑灵有哪些职业0.2556
/％
21.83
23.13
23.02
23.41
22.61
监理员证23.71
23.90
23.76
24.47
评分
87.81
97.81
97.40
85.97
凤凰传奇是两口子吗87.44
67.05
69.38
59.15
69.32
权利的游戏大结局表3方差分析结果
Tab3Results of variance analysis
方差来源
A
B
C 误差离均差平方和
1208.903
22.537
429.256
19.920
自由度
2
2
2
2
方差
604.452
11.269
214.628
9.960
F
60.687
1.131
21.549
P
＜0.05
＞0.05
＜0.05
注：F0.05（2，2）＝19.00
note：F0.05（2，2）＝19.00
3.4验证试验
按优选的最佳工艺制备3份样品，考察五味子醇甲的含量和浸膏得率及其综合评分。结果，各项指标均与正交试验中较高水平相当，表明选取的最佳制备工艺稳定、可靠。因此，确认五味子醇提最佳工艺为95％乙醇，10倍量回流提取3h。验证试验结果见表4。
表4验证试验结果
Tab4Results of verification test
样品批号
080720
080722
080727
五味子醇甲含量/mg·g-1
0.524
0.521
0.535
浸膏得率/％
22.93
23.01
22.79
综合评分
98.63
98.43
99.62
RSD/％
0.64
4讨论
本方是在临床经验方甘麦大枣汤的基础上增加药味，结合现代工艺制成的复方制剂，具有滋阴清热功能，用于更年期综合征阴虚内热证。
五味子醇甲在本制剂中含量较低，故选择适当的提取方法尤为重要。曾试以甲醇超声、回流，乙酸乙酯回流的方法提取，结果表明，采用甲醇回流方法，可达到使杂质减少、基线分离效果好、五味子醇甲含量较高的目的。
五味子醇甲是五味子的主要活性成分，因此选用五味子醇甲作为评价指标之一；浸膏得率太高或太低均会影响成型工艺、除杂方法的选择和成品稳定性，并且是选择剂型的参考指标，故浸膏得率也作为评价指标之一。
通过对处方中各味药材的分析并参考有关文献，经多次试验，摸索出了文中的谱条件。试验中曾试以文献条件甲醇-水（65∶35、60∶40、55∶45）、乙腈-0.1％磷酸（60∶40、55∶45）作为流动相，但效果均不理想，分离度不好，拖尾严重。结果表明，以乙腈-水（45∶55）为流动相，分离效果好。在该条件下，待测成分与相邻峰达到了基线分离，峰形较好，且具有较好的重复性，可用于地补更年安颗粒中五味子醇甲的含量测定。参考文献
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（收稿日期：2010-06-11修回日期：2010-12-01）
表1因素水平Tab1Factors and levels
水平
1 2 3
因素
购车流程A/％
95
70
45
B/倍
8
10
12
C/h
1
2
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China Pharmacy2011V ol.22No.27中国药房2011年第22卷第27期