冉海霞，邱佳，刘亮*
(遵义医药高等专科学校，贵州遵义563006)
[摘要]目的：丰富对坐叶药材的质量标准内容。方法：依据2015版《中国药典》(四部)通则中相关实验方法进行对坐叶药材含量测定。
结果：对坐叶药材水分含量在12.32 %~15.37 %之间；总灰分含量在7.66 %~9.32 %之间；酸不溶性灰分含量在2.23 %~4.60 %之间；50 %乙醇浓度醇浸出物含量在18.97 %~23.87 %之间。结论：初步建议对坐叶药材水分含量低于15.50 %，总灰分不超过9.5 %，酸不溶性灰分控制在5 %之内，醇溶性浸出物最高24 %为宜。
[关键词]对坐叶；水分；灰分；浸出物
[中图分类号]O65 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2020)23-0112-02
Content Determination of the Moisture Content, Ash Content and Extract of
Hedyotis Arn. from Guizhou
Ran Haixia, Qiu Jia, Liu Liang*
(Zunyi Medical and Pharmaceutical College, Zunyi 563006, China)
Abstract: In order to increase the content of the quality standard of the Hedyotis Arn.. Used by this study, the contents of Hedyotis Arn. Were to select and use the protocol in China Pharmacopeia 2015, four section.The result display that Hedyotis Arn. moisture content was between 12.32 % and 15.37 %. The total ash content ranged from 7.66 % to 9.32 %. acid insoluble ash ranged from 2.23 % to 4.60 %. The concentration of 50 % ethanol was 18.97 %~23.87 %. Therefore, it is suggested that the moisture content of Hedyotis Arn. is less than 15.50 %, the total ash content is less than 9.5 %, the acid insoluble ash content is less than 5 %, and the alcohol-soluble extract is less than 24 %.
Keywords: Hedyotis Arn.；Moisture Content；Ash Content；Extractum
对坐叶，2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》收录药材，茜草科植物对坐叶Hedyotis Arn.的干燥全草，具有清热解毒、调中止泻的功效，为贵州少数民族常用药[1]。民
间多用于腹泻、腹胀、腹痛等胃肠道疾病，也用于癌肿、风湿、毒蛇咬伤等疾病。经文献查阅，目前关于对坐叶的研究多集中于化学活性成分及指纹图谱[2-4]相关领域，仅潘亚平[5]建立以对坐叶齐墩果酸和熊果酸两种活性成分作为的指标性成分采用HPLC法制定对坐叶的药材质量标准，此为并未见有关于对坐叶水分、灰分及浸出物等相关研究。因此本实验通过文献查阅并参照其他药材质量评估标准的制定方法[6-8]，按照2015版《中国药典》(四部)通则中0832、2302及2201方法，初次对对坐叶药材的水分、灰分及浸出物等进行研究，希望为丰富对坐叶质量标准内容提供实验依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器
TP-A500电子天平(福州华志科学仪器有限公司)、小型粉碎机、干燥器、DHG-90AOA型电热恒温鼓风干燥箱(宁波江南仪器厂)、恒温水浴锅、SX-2-5-12箱式电阻炉(北京科伟永兴仪器有限公司)、锥形瓶、扁形称量瓶、粉碎机、坩埚、蒸发皿等。
1.2 试剂与药材
实验所用试剂均为分析纯，蒸馏水为实验室制备。对坐叶药材由遵义医药高等专科学校刘亮教授进行鉴定。药材来源见表1。
表1 对坐叶药材来源
Tab.1 Sources of medicinal herbs of Hedyotis uncinella Hook．et Arn.
序号名称药材来源编号
1
对坐叶(Hedyotis uncinella Hook．et Arn.) 贵州省贵定县201601
2 201602
3 201603
4
对坐叶(Hedyotis uncinella Hook．et Arn.) 贵州省黄平县201604
5 201605
6 201606
7
对坐叶(Hedyotis uncinella Hook．et Arn.) 贵州省紫云县201607
8 201608
9 201609
10
对坐叶(Hedyotis uncinella Hook．et Arn.) 贵州省石阡县201610
11 201611
12 201612
2 实验方法与结果
2.1 药材粉末的制备
取适量经鉴定后的对坐叶药材，用小型粉碎机粉碎后，过2号筛，并装入密封袋中，做好记录，备用。
2.2 水分测定
[收稿日期] 2020-10-15
[基金项目] 贵州省科技计划项目(No.黔科合LH字[2016]7419号)
[作者简介] 冉海霞(1989-)，女，贵州遵义，中药学讲师，主要研究方向为中药、民族药质量标准及活性成分。
*为通讯作者：刘亮(1981-)，男，贵州遵义，中药学教授，主要研究方向为中药、民族药质量标准研究。
表2 对坐叶药材水分含量结果
Tab.2 Results of water content of Hedyotis uncinella Hook. et
Arn.
序号编号药材来源水分含量/% 平均水分含量/%
1 201601
贵州省贵定县13.04
13.62
2 201602 12.46
大笑江湖cf版歌词3 201603 15.37
4 201604
贵州省黄平县15.13
15.05
5 201605 15.05
6 201606 14.97
7 201607
贵州省紫云县12.36
12.36
8 201608 12.32
9 201609 12.39
10 201610
贵州省石阡县14.32
14.42
11 201611 14.50
12 201612 14.44
以0832下烘干法进行实验[9]，精密称取“2.1”项下药材粉末3 g于已恒重扁形称量瓶中，平铺厚度不得高于10 mm，称重，烘箱干燥5 h，温度控制在100~105 ℃，移至干燥器中放冷30 min，称重，再以100~105 ℃温度烘箱干燥1 h，放冷后再次称重，直至连续精密称重的重量不超过5 mg，以减少重量计算样品含水量(%)。通过表2可知，对坐叶药材水分含量范围在12.32 %~15.37 %。
2.3 灰分测定
2.3.1 总灰分测定
以2302下总灰分测定法进行实验[9]，称取“2.1”项下不同编号药材粉末3 g，放入恒重坩埚中，精密称重，放入箱式电阻炉中慢慢加热，期间注意避免燃烧，并逐步提升温度升至600 ℃，待药材完全灰化至恒重后，根据残渣重量，计算药材总灰分的含量(%)。通过表3可知，对坐叶药材总灰分含量范围在7.66 %~9.32 %。
2.3.2 酸不溶性灰分测定
采用2302项下酸不溶性灰分测定法[9]，取“2.3.1”项下所得灰分，小心加入约10 mL稀盐酸于装有灰分得坩埚中，盖好表面皿，水浴加热10 min，用约5 mL热水冲洗表面皿置坩埚中，过滤，直至残渣洗液在滤纸上不发生氯化物反应，残渣和滤纸一起放入坩埚中灼烧至恒重，最后根据残渣重量，计算药材中酸不溶性灰分的含量(%)。结果见表3，对坐叶药材酸不溶性灰分含量在2.23 %~4.60 %。
表3 对坐叶药材灰分含量结果
Tab.3 Ash content results of medicinal materials of Hedyotis uncinella Hook. et Arn.
序号编号药材来源总灰分含量/%平均总灰分含量/%酸不溶性灰分含量/% 平均酸不溶性灰分含量/%
1 201601
贵州省贵定县8.50
8.38
4.60
3.58
2 201602 8.36 2.41
3 201603 8.28 3.73
红警戒2中日战争4 201604
贵州省黄平县9.19
9.06
2.86
2.90
江南style女主角金泫雅5 201605 8.7
6 2.70
6 201606 9.23 3.13
7 201607
贵州省紫云县9.20
9.26
2.88
2.91
8 201608 9.32 2.72郭志坚老婆
9 201609 9.26 3.14
10 201610
贵州省石阡县7.69
7.77
2.23
2.38
11 201611 7.66 2.29
12 201612 7.95 2.61 2.4 浸出物测定
2.4.1 不同方法水溶性浸出物含量测定
以2201项下水溶性浸出物测定法进行实验，精密称取“2.1”
项下编号201602药材粉末约4 g置锥形瓶中，准确加水100 mL，
计算其浸出物含量(%)[9]。结果见表4，对坐叶药材采用冷浸法
所得水溶性浸出物含量最高，为19.67 %。
表4 不同处理方法水溶性浸出物含量测定结果
Tab.4 Determination results of water-soluble extract content by
different treatment methods
方法水溶性浸出物/%
冷浸法19.67
热浸法10.71
2.4.2 不同溶剂浓度醇溶性浸出物含量测定
表5 不同乙醇浓度醇溶性浸出物含量测定结果
Tab.5 Determination results of alcohol soluble extract at different感叹时光流逝的诗句
ethanol concentrations
乙醇量
醇溶性浸出物/%
冷浸法热浸法
30 % 8.92 17.81 50 % 10.65 22.98 70 % 10.71 13.87 90 % 9.28 19.98 无水乙醇8.74 12.35
以2201项下醇溶性浸出物法进行测定，精密称取“2.1”项下编号201602药材粉末约4 g于锥形瓶中，准确加不同浓度乙醇溶液100 mL。计算样品中浸出物的含量(%)[9]。结果见表5，对比表4、表5可知，对坐叶药材采用50 %乙醇溶剂热浸法所测的浸出物含量最高，为22.98 %。因此对坐叶药材的浸出物含量测定采用醇浸出物含量测定法进行测定。
2.4.3 对坐叶药材醇溶性浸出物含量测定
表6 对坐叶药材醇浸出物含量结果
Tab.6 Content results of alcohol extracts from Hedyotis uncinella
Hook. et Arn.
序号编号药材来源浸出物含量/% 平均浸出物含量/%
1 201601饮食搭配
贵州省贵定县
22.63
22.62
2 20160221.36
3 20160323.87
4 201604
贵州省黄平县
19.09
19.66
5 20160518.99
6 20160620.90
7 201607
贵州省紫云县
18.97
19.97
8 20160819.85
9 20160921.09
10201610
贵州省石阡县
21.94
21.42 1120161123.09
1220161219.23
(下转第119页)
保留，通过改变流动相pH值可控制果糖的保留时间。通常在样品组分较为简单时，可采用适当浓度的氢氧化钠溶液等度洗脱，但由于饲料样品基质复杂，为了排除杂质和水解产生的葡萄糖的干扰，采用了梯度洗脱方法，先以较低浓度的氢氧化钠溶液分离果糖和葡萄糖，后通过高浓度氢氧化钠和洗脱能力较强的乙酸钠溶液对其他杂质进行洗脱。结果如图1所示，采用梯度洗脱可得到很好的分离效果。
图1 果糖标准溶液(A)、饲料样品加标(B)和饲料空白样品(C)
谱图
Fig.1 The chromatograms of the fructose standard solution (A), the feed sample that was added standard sample (B) and the blank
feed sample (C)
2.2 线性方程、线性关系、检出限及定量限
配置浓度为2~50 μg/mL果糖系列标准工作溶液，以果糖峰面积对浓度进行线性回归，相关系数为0.9999，表明具有很好的线性关系。以3倍S/N为检出限，10倍S/N为定量限，得到低聚果糖的检出限为0.3 g/kg，定量限为1.0 g/kg。
2.3 回收率和精密度
在优化后的测定条件下，对饲料空白样品进行加标回收实验，加标水平分别为18.12、34.24、72.47 g/kg，每个水平重复测定6次，结果如表2所示，该方法的加标回收率为95.7 %~100.5 %，相对标准偏差(RSD)为0.8 %~2.8 %，结果表明方法具有较好的回收率和准确性。
表2 低聚果糖加标回收实验结果
Tab.2 Recoveries of fructooligosaccharides spiked into blank
samples
目标物加标量/(g/kg)平均值/(g/kg) 回收率/%RSD/%低聚果糖
18.12 17.34 95.7 2.8
34.24 35.81 98.8 1.8
72.47 72.75 100.5 0.8
3 结论
本实验采用酶解法结合离子谱-安培检测器，建立了饲料添加剂中低聚果糖含量的测定方法，方法操作简单、快速，能实现准确定量，重复性好，适用于饲料添加剂样品中低聚果糖含量的测定。
参考文献
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(上接第113页)
以50 %浓度乙醇的热浸法进行实验。精密称取“2.1”项下药材粉末约4 g和精密量取50 %乙醇溶液100
mL置250 mL锥形瓶中，称重，静置1 h，回流加热并持续微沸1 h。放冷，再次称重，相应溶剂补重，摇匀，过滤，精密量取滤液25 mL置于蒸发皿中，水浴蒸干，并以105 ℃温度持续干燥3 h，放入干燥器中冷却30 min，快速精密称重[9]。根据实验结果，计算样品醇溶性浸出物的含量(%)。结果见表6，对坐叶药材醇浸出物含量范围在18.97 %~23.87 %。
3 讨论
本实验研究首次对对坐叶药材进行水分、灰分(包括总灰分和酸不溶性灰分)及浸出物等进行研究，发现黔产不同地区对坐叶药材在这些方面含量存在一定差异，水分含量以黄平县15.05 %最高，紫云县12.36 %最低；总灰分以紫云县9.26 %最高，石阡县7.77 %最低；酸不溶性灰分以贵定县3.58 %最高，石阡县2.38 %最低；醇浸出物以贵定县22.62 %最高，黄平县19.66 %最低。经过分析导致含量差异的原因有多种，如采集季节、生长海拔、土壤类型、光照等等，但具体原因有待进一步研究。
其次根据实验结果及结合《中华人民共和国药典》2015版相关规定，初步建议对坐叶药材水分含量不超过15.50 %，总灰分低于9.5 %，酸不溶性灰分控制在5 %以下，热浸法50 %乙醇浓度醇溶性浸出物不超过24 %。未来，本项目组将继续检测多批次、不同产地及不同采收时节的对坐叶药材进行进一步研究。
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(本文文献格式：冉海霞，邱佳，刘亮．黔产对坐叶药材水分、灰分及浸出物的含量测定[J]．广东化工，2020，47(23)：112-113)
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