a理论鏡验-铤学分册I工作简报PTCA(PART B:CHEM.ANAL.)
DOI:10.11973/lhjy-hx202012004
薄层谱法和高效液相谱法
鉴别掺龙血竭的血竭
张明童'蔦刘志荣'，李冬华'，马潇，宋平顺：，晋玲—
（1.甘肃中医药大学，兰州730000； 2.甘肃省药品检验研究院甘肃省中藏药检验检测技术工程实验室，兰州730070；
3.中（藏）药资源研究所，兰州730070）
摘要：采用薄层谱法对血竭样品进行定性鉴别筛查，采用高效液相谱法进行定量分析（固定波长）和定性鉴别（全波长扫描）。血竭和龙血竭的薄层谱图、高效液相谱图和紫外光谱差异显著，可明显区分血竭和掺龙血竭的血竭。27批血竭中发现掺龙血竭的血竭有15批，掺假率为
55.6%，薄层谱法和高效液相谱法鉴别的结果一致。
关键词：薄层谱法；高效液相谱法；血竭；龙血竭；鉴别
中图分类号：0657.7文献标志码：A文章编号：1001-4020（2020）12-1267-05
血竭为棕櫚科植物麒麟竭果实渗出的树脂加工制成，具有活血定痛、化瘀止血、生肌敛疮的功效，用于跌打损伤、心腹瘀痛、外伤出血、疮疡不敛⑴，是常用的名贵中药。血竭始载于南朝刘宋《雷公炮炙论》，原文无原植物形态描述，所以当时所用血竭基源已较难考证。宋代《重修政和经史证类备用本草》⑵中有记载“麒麟竭，出于西胡”，《本草纲目》⑶中记载“麒麟竭多出大食诸国”，说明血竭最早可能来源于西方，现今的血竭来源于东南亚国家。另外和血竭功能相似的龙血竭是由百合科剑叶龙血树的含脂木材经提取得到的树脂勺。
血竭中主要含有黄酮类衍生物血竭素、血竭红素、去甲血竭素和去甲血竭红素等成分卩切；龙血竭
主要含有二氢查尔酮类化合物（龙血素A、龙血素B）、脂肪桂、脂肪酮和酯类化合物33。二者化学成分有显著差异，但粉碎之后均为砖红粉末，外观极为相似，性状鉴别有难度。由于进口血竭价格昂贵，存在掺假情况，如血竭中掺达玛烷树脂、松香、龙血竭以及非法染等W⑷，通过检验发现市场上血竭以掺龙血竭较为多见，因此需建立一种快速、准确、便捷地鉴别掺龙血竭的血竭的方法。本工作首先采用薄层谱法对血竭样品进行定性鉴别筛查，
收稿日期：2020-02-09
基金项目：甘肃省科技重大专项计划项目（17ZD2FAOO9）
作者简介：张明童，硕士研究生，主要从事中藏药检验研究工作*通信联系人。zyxyjl@163 然后通过高效液相谱法（固定波长）定量分析龙血
素A进行验证，还可以利用高效液相谱法（全波长扫描）进行定性鉴别，进一步证明本研究鉴别结果
的准确性和可靠性。
本工作建立了掺龙血竭的血竭的鉴别方法，并
测定27批血竭样品中龙血素A的含量，以达到定性定量鉴别掺龙血竭的血竭的目的，本研究可为监管和检验部门鉴别掺龙血竭的血竭提供强有力的依据。
1试验部分
1.1仪器与试剂
KQ5200E型超声波清洗器；ZF7型三用紫外分析仪;Waters2695型高效液相谱仪；硅胶G板为高效薄层板。
李梦个人资料简介龙血素A标准储备溶液（高效液相谱法用）：0.8870g•，称取龙血素A对照品&870mg，用甲醇溶解并定容至10mL棕容量瓶中，于-20°C保存。
血竭素高氯酸盐标准溶液（薄层谱法用）：80.28mg•，称取血竭素高氯酸盐对照品4.014mg，用甲醇溶解并定容至50mL棕容量瓶中，于一20°C保存。
、甲酸均为优级纯；甲醇和乙睛均为谱纯；试验用水为超纯水。
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张明童.等：薄层谱法和高效液相谱法鉴别掺龙血竭的血竭A理但緬嚇-吗分册
1.2仪器工作条件
Phenomenex Synergi C”谱柱（250mm X
4.6mm,4|nm），柱温30°C；流量1mL•min1；进
样量10测定波长277nm0流动相：A为乙月青，
B为0.1%（体积分数）甲酸溶液。梯度洗脱程序：
0〜20min时.A为40%；20〜23min时.A由40%
升至80%，保持4min；27~29min时.A由80%降至40%，保持3min。
1.3试验方法
1.3.1薄层谱法
血竭对照药材和龙血竭对照药材购于某食品药品检定研究院。血竭样品为国家评价性抽验样品（27批，GP1〜GP27），已除去龙血竭样品和染样品。
称取血竭样品粉末约0.1g，加乙瞇10mL，振摇10min，过滤，取滤液作为样品溶液。
称取血竭对照药材约0.1g，龙血竭对照药材约0.1g，按上述方法制成对照药材溶液。
采用薄层谱法进行试验「⑷，移取样品溶液、对照药材溶液及血竭素高氯酸盐标准溶液各10“L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以、甲醇、甲酸以体积比19：1：0.1组成的混合液为展开剂，饱和30min展开，上行展开8cm取出，晾干，置于日光和波长366nm下检视。
1.3.2高效液相谱法
称取血竭样品粉末约0.25g置于具塞锥形瓶中，加入甲醇25mL，密塞，超声处理20min，放冷，再称重，用相同溶剂补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液用微孔滤膜（0.45”m）过滤，取滤液.按仪器工作条件进行测定。
2结果与讨论
2.1 高效液相谱法测定龙血素A的分析方法
建立
2.1.1测定波长的选择
将龙血素A标准溶液在波长200—400nm内进行紫外光谱扫描.龙血素A的紫外光谱见图1。
由图1可知：龙血素A在波长277nm处有较大吸收。试验选择测定波长为277nm。
2.1.2谱行为
取龙血素A的标准溶液和正品血竭样品（即未掺龙血竭的血竭样品），进行全波长扫描（200-400nm）和固定波长（277nm）分析，其谱图见
A/nm
图1龙血素A的紫外光谱
Fig.1UV spectrum of Loureirin A
图2。
f/min
（a）龙血素A标准溶液
f/min
(b)正品血竭样品
图2龙血素A标准溶液和正品血竭样品的谱图Fig.2Chromatograms of standard solution of Loureirin A and the sample of genuine Draconis Sanguis
由图2可知：龙血素A的保留时间约为21.174min，与其他组分峰的分离度均大于1.5；正
品血竭样品中无龙血素A。
2.1.3标准曲线、检出限和测定下限
移取适量的0.8870g•L"龙血素A标准储备溶液，配制成 3.548,7.096,17.74,35.48,70.96, 177.4mg-L^1的龙血素A标准溶液系列。按仪器工作条件对上述标准溶液系列进行测定，并绘制标准曲线。结果表明：龙血素A的质量浓度在3.548〜177.4mg•内与其对应的峰面积呈线性关系，线性回归方程为y=2.001X ICT'z—1.616X 10"1，相关系数为0.9998。
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根据3倍信噪比计算方法的检出限（3S/N ），龙 血素A 的检出限为0.03 mg • g"'；根据10倍信噪
比计算方法的测定下限（10S/N ），龙血素A 的测定 下限为 0.10 mg • g7。
2.1.4 精密度试验
按仪器工作条件对龙血素A 标准溶液进行测 定，平行测定6次，龙血素A 峰面积的相对标准偏 差（RSD ）为0.30%，保留时间的RSD 为0.20%。
按试验方法（高效液相谱法）对血竭样品（掺
龙血竭）进行分析，平行测定6次，龙血素A 测定值
的RSD 为1.6%。方法精密度良好。
2.1.5 稳定性试验
按试验方法（高效液相谱法）对血竭样品（掺
龙血竭）进行分析，并分别于2,4,6,12,24 h 后再次
进行分析，龙血素A 峰面积的RSD 为0.60%。这 表明样品溶液在24 h 内稳定。
2.1.6 回收试验
取已知龙血素A 含量的血竭样品9份，每份约
0.12 g，按试验方法（高效液相谱法）进行分析，并
（c ） 样品GP1〜GP12，波长366 nm 下检视
适量（对照品加入的质量与样品中待测成分的质量 之比分别约为1.5 : 1,1.0 : 1,0.5 : 1）进行回收试
验，计算回收率，结果见表1。
表1回收试验结果(n=3)
Tab. 1 Results of test for recovery (n = 3)
本底值加/
mg 加标量m /mg 测定总量加/
mg
回收率/ %
0.332 90.511 70.850 8
101
0.332 50.341 10.672 3
99.60.332 4
0.170 6
0.502 2
99.5
由表1可知：回收率为99.5%〜101 %，符合《中
国药典》要求。
2.2 薄层谱法鉴别结果
按试验方法（薄层谱法）对血竭样品GP1-
GP27（1〜27）、血竭对照药材、龙血竭对照药材、血
竭素高氯酸盐标准溶液进行展开，取出晾干，置于日 光和波长366 nm 下检视，结果见图3。图3（a ）和
（b ）中斑点为黄，图3（c ）和（d ）的框线中为蓝紫
荧光斑点。
13 14 15 16 17 18 19 20 Si S & 21 22 23 24 25 26 27
(b)样品GP13-GP27, B 光下检视
（d ） 样品GP13〜GP27，波长366 nm 下检视
S 】一血竭对照药材；S —血竭素高氯酸盐标准溶液；S2—龙血竭对照药材
图3薄层谱图
Fig. 3 Thin layer chromatograms
由图3可知：日光下检视，血竭样品（除GP6）与 置均具有黄的斑点，而龙血竭对照药材在相应位血竭对照药材及血竭素高氯酸盐标准溶液在相应位
置无斑点，日光下检视无法准确鉴别掺龙血竭的血
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•
竭。在波长366nm下检视，掺龙血竭的血竭样品与龙血竭对照药材在相应位置均具有相同的蓝紫
荧光斑点。由此可以得出：样品GP1,3,7,12,16, 17,20,23,24,25,26,27为正品血竭样品，共12批；样品GP2,4,5,6,8,9,10,11,13,14,15,18,19,21, 22为掺龙血竭的血竭样品，共15批，掺假率55.6%。薄层
谱法具有良好的分离度，可有效地区分正品血竭、掺龙血竭的血竭。2.3高效液相谱法分析结果
2.3.1固定波长（277nm）
按试验方法（高效液相谱法）对龙血竭对照药材、血竭对照药材和掺龙血竭的血竭样品进行分析.谱图见图4。
由图2、图4可知：掺龙血竭的血竭样品、龙血竭对照药材、龙血素A标准溶液中均有龙血素A；血竭对照药材和正品血竭样品中均无龙血素A；在
龙血素A
010203040
t/min t/min t/min （a）龙血竭对照药材（b）血竭对照药材（c）掺龙血竭的血竭样品图4龙血竭对照药材、血竭对照药材和掺龙血竭的血竭样品的谱图Fig.4Chromatograms of Resina Draconis control drug,Draconis Sanguis control drug and the sample
of Draconis Sanguis adulterated with Resina Draconis
波长277nm下，掺龙血竭的血竭样品和正品血竭样品的谱图差异明显，掺龙血竭的血竭样品在21.1min左右有较大吸收峰。样品GP2,4,5,6,8, 9,10,11,13,14,15,18,19,21,22共］5批血竭样品的谱图和龙血竭对照药材的谱图基本相同.上述样品均为掺龙血竭的血竭样品。样品GP1,3,7. 12,16,17,20,23,24,25,26,27共12批血竭样品的谱图和血竭对照药材的谱图基本相同，上述样品均为正品血竭样品。这与薄层谱法鉴别结果一致。
掺龙血竭的血竭样品中龙血素A的质量分数为0.264%〜0.604%。
2.3.2全波长扫描（波长200~400nm）
按试验方法（高效液相谱法）对血竭样品进行分析，提取保留时间为21.1min左右的血竭样品的紫外光谱（波长200-400nm）。结果表明：正品血竭样品在波长277nm处无较大吸收峰；掺龙血竭的血竭样品在波长277nm处有较大吸收峰.为龙血素A的吸收峰；在该波长范围内.无其他干扰成分吸收峰。对比27批血竭样品的紫外光谱.样品GP2,4,5,6,8,9,10,11,13,14,15,18,19,21,22共15批血竭样品在波长277nm处有较大吸收峰.与龙血素A标准溶液的紫外光谱一致.该结果与薄层谱法筛查结果一致。
本工作首先采用薄层谱法对血竭样品进行定性鉴别筛查，然后采用高效液相谱法进行定量分析（固定波长）和定性鉴別（全波长扫描）。结果表明：血竭和龙血竭的薄层谱图、高效液相谱图和紫外光谱差异显著，可明显区分血竭和掺龙血竭的血竭。所建立的定性定量方法快速、简便、准确
、灵敏度高，适用于掺龙血竭的血竭的定性定量研究，可实现对血竭的质量控制。
薄层谱法选用血竭对照药材作为对照，龙血竭掺的量较少时较难定性鉴别，所以需高效液相
谱法用龙血竭指标性成分龙血素A为对照品进行定性定量确认.两者结合可明显提高试验结果的准
确性。试验中血竭样品掺假率高达55.6%，说明血竭中掺入龙血竭较为普遍，建议加强对生产、流通、使用领域的监管。开展专项抽验，并对血竭生产加工中的违法行为进行跟踪追查.保障公众的用药安全、有效。
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口4]国家药典委员会.中华人民共和国药典-四部[M].北京：中国医药科技出版社，2015.
Identification of Draconis Sanguis Adulterated with Resina Draconis
by Thin Layer Chromatography and HPLC
ZHANG Mingtong1*2,LIU Zhirong2,LI Donghua,MA Xiao2,
SONG Pingshun2,JIN Ling1
(1.Gansu University of Chinese Medicine»Lanzhou730000,China；
2.Gansu Inspection and Testing Technical Engineering Laboratory for Chinese Herbal and
Tibetan Medicine»Gansu Institute for Drug Control,Lanzhou730070»China;
3.(Tibet)Traditional Medicine Resources Institute,Lanzhou730070»China)
Abstract:The Draconis Sanguis samples were screened and qualitatively identified by thin layer chromatography»quantitatively analyzed by HPLC with fixed wavelength and qualitatively verified by HPLC with full wavelength scanning.Thin layer chromatogram♦high performance liquid chromatogram and UV spectrum of Draconis Sanguis were significantly different from Resina Draconis»which could obviously distinguish Draconis Sanguis and Draconis Sanguis adulterated with Resina Draconis.15batches of Draconis Sanguis adulterated with Resina Draconis were found i
n27batches of Draconis Sanguis,with an adulteration rate of55.6%.The results of thin layer chromatography were consistent with HPLC.
Keywords:thin layer chromatography；HPLC;Draconis Sanguis；Resina Draconis；identification
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