ｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｅｄｇｒｏｕｐ，ＧＵｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｏｍｅｐｒａｚｏｌｅｐｏｓｉｔｉｖｅｇｒｏｕｐ（３．６ｍｇ·ｋｇ－１），ａｎｄｌｏｗ，ｍｅｄｉｕｍａｎｄｈｉｇｈｄｏｓｅｏｆＢＰＳｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓ（１００，２００ａｎｄ４００ｍｇ·ｋｇ－１）．ＴｈｅＧＵｍｏｄ ｅｌｇｒｏｕｐｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｂｙａｃｅｔｉｃａｃｉｄｃａｕｔｅｒｙｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆｕｌｃｅｒｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｖｉｓｕａｌｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈＨＥｓｔａｉｎｉｎｇ，ａｎｄｔｈｅｕｌｃｅｒａｒｅａａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄａｎｄｃａｌｃｕｌａｔｅｄ；ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ）ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）ｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＧＳＨ ＰＸ）ａｃｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅｍｅａｓ ｕｒｅｄｂｙｅｎｚｙｍａｔｉｃａｓｓａｙ；ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ α（ＴＮＦ α）ａｎｄｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６（ＩＬ ６）ｃｏｎｔｅｎｔｗｅｒｅｄｅｔｅｃ ｔｅｄｂｙＥＬＩＳＡ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓｏｆｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＥＧＦ）ａｎｄｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅ ｃｅｐｔｏｒ（ＥＧＦＲ）ｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓ ｔｒｙｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｅｄｇｒｏｕｐ，ｏｂｖｉｏｕｓｕｌｃｅｒｄａｍａｇｅｗ
ａｓｓｅｅｎｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅＢＰＳ ｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｓｈｏｗｅｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｒｅ ｄｕｃｔｉｏｎｉｎｕｌｃｅｒａｒｅａ，ａｎｉｎｃｒｅａｓｅｉｎＳＯＤａｎｄＧＳＨ ＰＸａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＥＧＦａｎｄＥＧＦＲｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓ，ａｎｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｉｎＭＤＡ，ＴＮＦ αａｎｄＩＬ ６ｃｏｎｔｅｎｔ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　ＢＰＳｈａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎＧＵｉｎｒａｔｓ，ａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｍａｙｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｉｎｈｉｂｉ ｔｉｏｎｏｆｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ，ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｓｔｉｍｕｌｉａｎｄｐｒｏｍｏｔｉｏｎｏｆｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｒｅｐａｉｒｏｆｇａｓｔｒｉｃｍｕｃｏｓａ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｂａｌａｎｏｐｈｏｒａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｇａｓｔｒｉｃｕｌ ｃｅｒ；ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓ；ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ；ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ；ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ
网络出版时间：２０２２－１２－０９１７：５８：５２　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／／３４．１０８６．Ｒ．２０２２１２０９．１４２９．０３７．ｈｔｍｌ◇研究简报◇
二氢杨梅素抑制ＪＮＫ信号减少Ｔ２ＤＭ
大鼠海马神经细胞凋亡、Ａβ和ｐ Ｔａｕ蛋白水平
李梦伟１，奉水东２，颜　欣３，王紫涵１，李　琪１，吕慧婕１，颜灿４，凌宏艳１
（１．衡阳医学院生理学教研室，２．公共卫生学院社会医学与卫生事业管理学教研室，
３．衡阳医学院，４．南华大学附属第二医院健康管理中心，湖南衡阳　４２１００１）
ＤＨＭｒｅｄｕｃｅｓｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎａｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ，Ａβａｎｄｐ ＴａｕｐｒｏｔｅｉｎｓｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇＪＮＫｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎＴ２ＤＭｒａｔｓ
ＬＩＭｅｎｇ ｗｅｉ１，ＦＥＮＧＳｈｕｉ ｄｏｎｇ２，ＹＡＮＸｉｎ３，ＷＡＮＧＺｉ ｈａｎ１，ＬＩＱｉ１，ＬＹＵＨｕｉ ｊｉｅ１，ＹＡＮＣａｎ ｑｕｎ４，ＬＩＮＧＨｏｎｇ ｙａｎ１
（１．ＤｅｐｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＨｅｎｇｙａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ；２．Ｄｅｐｔｏｆ
收稿日期：２０２２－０８－１１，修回日期：２０２２－１０－２０
基金项目：湖南省自然科学基金资助项目（Ｎｏ２０１８ＪＪ２３４７，２０２１ＪＪ３０５９５）；湖南省研究生科研创新项目（Ｎｏ
ＣＸ２０１９０７５４）湖南省大学生创新创业项目（Ｎｏ
Ｓ２０２０１０５５５１１９）
作者简介：李梦伟（１９９７－），女，硕士生，研究方向：糖尿病认知功能障碍，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｍｅｎｇｗｅｉ００６＠１６３．ｃｏｍ；
颜灿（１９７１－），女，博士，副主任医师，研究方向：糖尿病
认知功能障碍，通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：１２１２７６０２１＠ｑｑ．ｃｏｍ；
凌宏艳（１９７５－），女，博士，教授，硕士生导师，研究方向：糖
尿病认知功能障碍，通讯作者，Ｅ ｍａｉｌ：ｌｉｎｇｈｏｎｇｙａｎ０２０３＠
１２６．ｃｏｍＳｏｃｉａｌＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＨｅａｌｔｈＭａｎａｇｅｍｅｎｔ，ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＣｏｌｌｅｇｅ；３．ＨｅｎｇｙａｎｇＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ；４．
ＨｅａｌｔｈＭａｎａｇｅｍｅｎｔＣｅｎｔｅｒ，ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａ，ＨｅｎｇｙａｎｇＨｕｎａｎ　４２１００１，Ｃｈｉｎａ）
ｄｏｉ：１０．１２３６０／ＣＰＢ２０２１０４１１６
文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２３）０１－０１９９－０２
中国图书分类号：Ｒ ３３２；Ｒ３２２ ８１；Ｒ３２９ ２５；Ｒ５８７ １；Ｒ９７７ ６
关键词：二氢杨梅素；ＪＮＫ信号；Ｔ２ＤＭ大鼠；海马神经细胞凋亡；Ａβ；ｐ Ｔａｕ蛋白
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ；ＪＮＫｓｉｇｎａｌｉｎｇ；ｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｒａｔｓ；ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｎａｌｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ；Ａβｐｒｏｔｅｉｎ；Ｐ Ｔａｕｐｒｏｔｅｉｎ
开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：
  海马神经元是中枢神经系统的重要细胞之一，与认知功能有密切的联系［１］。二型糖尿病（ｔｙｐｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓ，Ｔ２ＤＭ）大鼠海马损伤与其海马Ｔａｕ蛋白磷酸化和Ａβ沉积有
·
９
李梦个人资料简介９
１
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中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２３Ｊａｎ；３９（１）：１９９～２００Copyright©博看网. All Rights Reserved.
关［２］。
  二氢杨梅素（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ，ＤＨＭ）是一种黄酮类物质，具有抗炎、抗氧化等作用［３］。研究显示：减少海马神经细胞凋亡的重要机制之一是抑制ＪＮＫ信号［４］。本实验通过高糖高脂和低浓度ＳＴＺ喂养ＳＤ大鼠复制Ｔ２ＤＭ大鼠模型，探讨ＤＨＭ通过抑制ＪＮＫ信号降低Ｔ２ＤＭ大鼠海马神经细胞凋亡、Ａβ和ｐ Ｔａｕ水平。
１　材料与方法
１．１　材料　ＳＰＦ级雄性Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠（长沙市天勤公司［ＳＣＸＫ（湘）２０１４ ００１１］）；二氢杨梅素（ＤＨＭ，Ｂ２０３７２）购于源叶；链脲佐菌素（ＳＴＺ，Ｓ０１３０）和ｐ Ｔａｕ试剂盒（ＫＨＯ０６３１）购自于Ｔｈｅｒｍｏ；ＡＭＹ（ＪＮＫ激动剂，ＳＣ０１３２）、Ａβ试剂盒（ＰＡ０７９）、Ｂａｘ抗体（ＡＦ１２７０）、Ｂｃｌ ２抗体（ＡＢ１１２）、ＪＮＫ／ＳＡＰＫ抗体（ＡＪ５１８）、ｐ ＪＮＫ抗体（ＡＦ５８６０）、β ＡｃｔｉｎＭｏｕｓｅＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｙ（ＡＦ５００１）、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠ＩｇＧ（Ａ０２１６）、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔ＩｇＧ（Ａ０２０８）购自于上海Ｂｅｙｏｔｉｍｅ。
１．２　分组　７６只雄性ＳＤ大鼠高糖高脂喂养建立Ｔ２ＤＭ大鼠模型。分为以下４组：ＮＤ组（ｎ＝２４），Ｔ２ＤＭ组（ｎ＝１６），ＮＤ＋ＤＨＭ组（ｎ＝８），Ｔ２ＤＭ＋ＤＨＭ组（ｎ＝２４）。十二周后，每组取８只海马组织，ＨＥ检测海马神经细胞形态，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测海马神经细胞凋亡蛋白Ｂａｘ、Ｂｃｌ ２水平，Ｅｌｉｓａ检测海马Ａβ、ｐ Ｔａｕ表达。其余分为ＮＤ组、ＮＤ＋ＡＭＹ组、Ｔ２ＤＭ＋ＤＨＭ组、Ｔ２ＤＭ＋ＤＨＭ＋ＡＭＹ组、Ｔ２ＤＭ组（ｎ＝８）。取海马组织，用上述方法测定大鼠海马神经细胞凋亡、Ａβ和ｐ Ｔａｕ变化。
１．３　ＨＥ检测大鼠海马组织　在４％多聚甲醛中固定海马组织、包埋并切片，ＨＥ染组织后显微镜观察病理变化。１．４　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ测定大鼠海马Ｂａｘ、Ｂｃｌ ２、ＪＮＫ和ｐ
ＪＮＫ蛋白表达　取大鼠海马组织蛋白，进行定量、电泳、转膜、孵育一抗、二抗，显影分析各组蛋白表达情况。
１．５　统计学处理　使用ＳＰＳＳ软件统计分析，用珋ｘ±ｓ表示结果，单因素方差的形式表示多组之间的差异，用ｔ检验的形式表示两组之间的差异。
２　结果
２．１　ＤＨＭ减少Ｔ２ＤＭ大鼠海马神经细胞凋亡、Ａβ和ｐ Ｔａｕ水平　与Ｔ２ＤＭ组相比，ＤＨＭ组海马神经元细胞凋亡明显减少。ＷＢ显示：ＤＨＭ减少Ｔ２ＤＭ组海马Ｂａｘ表达、提高Ｂｃｌ ２表达。Ｅｌｉｓａ表明：ＤＨＭ降低Ｔ２ＤＭ大鼠海马Ａβ和ｐ Ｔａｕ蛋白水平（Ｐ＜０ ０１）。
２．２　ＤＨＭ降低Ｔ２ＤＭ大鼠海马神经细胞凋亡、Ａβ和ｐ Ｔａｕ蛋白水平的机制：抑制ＪＮＫ信号　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示：与ＤＨＭ＋Ｔ２ＤＭ组相比，ＡＭＹ增加ＤＨＭ处理的Ｔ２ＤＭ大鼠海马神经细胞凋亡。ＥＬＩＳＡ表明：与ＮＤ组相比，ＤＨＭ可降低Ｔ２ＤＭ大鼠海马Ａβ和ｐ Ｔａｕ蛋白水平，ＡＭＹ升高ＤＨＭ处理的Ｔ２ＤＭ大鼠海马Ａβ和ｐ Ｔａｕ蛋白水平（Ｐ＜０ ０１）。
３　讨论
  研究表明抑制ＪＮＫ信号通路可以改善糖尿病大鼠认知功能、减少大鼠海马神经元凋亡［５］。我们前期研究发现，ＤＨＭ可以改善Ｔ２ＤＭ大鼠认知功能障碍［６］。本实验显示：ＤＨＭ能减少Ｔ２ＤＭ大鼠海马神经元细胞凋亡、Ａβ和ｐ Ｔａｕ蛋白表达，激活ＪＮＫ信号能够增加ＤＨＭ处理的Ｔ２ＤＭ大鼠海马神经细胞凋亡、Ａβ和ｐ Ｔａｕ蛋白表达。此研究证明，ＤＨＭ通过抑制ＪＮＫ信号减少Ｔ２ＤＭ大鼠海马神经细胞凋亡、Ａβ和ｐ Ｔａｕ蛋白表达。
参考文献：
［１］　ＶｅｒｔｅｓＲＰ．Ｍａｊｏｒｄｉｅｎｃｅｐｈａｌｉｃｉｎｐｕｔｓｔｏｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ：Ｓｕｐｒａ ｍａｍｍｉｌｌａｒｙｎｕｃｌｅｕｓａｎｄｎｕｃｌｅｕｓｒｅｕｎｉｅｎｓ．Ｃｉｒｃｕｉｔｒｙａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｒｏｇＢｒａｉｎＲｅｓ，２０１５，２１９：１２１－４４．
［２］　ＺｈａｎｇＹ，ＨｕａｎｇＮＱ，ＹａｎＦ，ｅｔａｌ．ＤｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓａｎｄＡｌｚｈｅｉ ｍｅｒ′ｓｄｉｓｅａｓｅ：ＧＳＫ ３βａｓａｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｉｎｋ［Ｊ］．ＢｅｈａｖＢｒａｉｎＲｅｓ，２０１８，３３９：５７－６５．
［３］　ＬｉｕＣＭ，ＹａｎｇＷ，ＭａＪＱ，ｅｔａｌ．Ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎｉｎｈｉｂｉｔｓｌｅａｄ Ｉｎ ｄｕｃｅｄｃｏｇｎｉｔｉｖｅｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓａｎｄｉｎｆｌ
ａｍｍａｔｉｏｎｂｙｔｈｅＡｄｅｎｏｓｉｎｅ５′ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｐａｔｈｗａｙｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］．ＪＡｇ ｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ，２０１８，６６（３０）：７９７５－８２．
［４］　郭　菲，张素钊，陈世雨，等．电针对血管性痴呆大鼠海马区ｃ Ｊｕｎ氨基末端激酶信号通路的影响［Ｊ］．针刺研究，２０２０，４５（１）：２１－６．
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［５］　ＪｉｎｇＧＣ，ＬｉｕＤ，ＬｉｕＹＱ，ｅｔａｌ．Ｎａｏ Ｆｕ ＣｏｎｇａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓｄｉａｂｅｔｉｃｃｏｇｎｉｔｉｖｅｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＪＮＫ／ＣＨＯＰ／Ｂｃｌ２ ｍｅｄｉａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｖｉｖｏａｎｄｉｎｖｉｔｒｏ［Ｊ］．ＣｈｉｎＪＮａｔＭｅｄ，２０２０，１８（９）：７０４－１３．
［６］　李梦伟，吕慧婕，王紫涵，等．ＤＨＭ抑制海马内质网应激改善Ｔ２ＤＭ大鼠认知功能障碍［Ｊ］．中国药理学通报，２０２２，３８（１）：９１
－７．
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