i mv ic与硫化氢试验实验结果报告的结果
一、买验目的
了解IMVIC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。
吉他指法二、实验原理
IMVIC是I--吲哚(INDOL test)、M一甲基红(methyl red test)、V-伏普(VOGES -PROLAUERTEST)和C-柠檬酸盐(CITRA TE test)4个实验的缩写。这4个实验主要用来快速鉴别产气杆菌与大肠杆菌,多用于水的细菌检查。大肠杆菌虽非致病菌,但在饮用水时若超过一定指标,则表示水质受粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中,因此检查水是要将两者分开。硫化氢(H2S)实验也是检查肠道细菌的生化实验。
(一)吲哚试验(INDOL test)
吲哚试验是用来检测吲哚试验的产生,有些细菌分解培养基中的氨酸生成吲哚(靛基质),经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰吲哚而呈红。氨酸+H2O氨酸酶、吲哚+NH3+丙酮酸、哚+对二甲基氨基苯甲醛、玫瑰吲哚(红)。
吲只有部分细菌能产生氨酸酶,从而具有分解氨酸产生吲哚的能力,因此吲哚实验可以作为一个生化检测指标。大肠杆菌产氨酸酶实验结果为阳性(红),产气肠杆菌不产氨酸酶实验结果为阴性(无)。
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(二)M-甲基红试验(methyl red test)
用来检测由葡萄糖产生的有机酸,如甲酸、乙酸、乳酸等。细菌代谢糖产生酸使培养基变酸(pH下降),使甲基红指示剂变:橘黄(pH6.3L_红(pH4.2),尽管,所有肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸,但大肠杆菌和产气肠杆菌有区别:两者在培养早期产生有机酸,但大肠杆菌在培养后仍能维持酸性pH4,而产气肠杆菌则将有机酸转化为非酸性产物,使pH上升至6左右。因此,大肠杆菌为阳性(红),产气肠杆菌阴性(黄)。
(三)伏一普实验(VOGE SPROL AUES test)
测定细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物(如丙酮酸)的能力。丙酮酸进行缩合、脱羧生成乙酰甲基醇,此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用,生成红化合物,及伏-普反应阳性,不产生红化合物者为反应阴性。碱性条件、加入少量含胍基的化合物可使反应更明显。
刘德华 杨丽娟大肠杆菌不产丙酮酸实验结果为阴性(无),产气肠杆菌产丙酮酸实验结果为阳性(红)。
葡萄糖+丙酮酸-CO2缩合乙酰乳酸-CO2脱羧乙酰甲基甲醇+OH-2H胍基+二乙>红化合物
(四)柠檬酸盐试验(CITRA TE test)用来检测柠檬酸盐是否被利用,有些细菌以柠檬酸钠为碳源,培养基中的柠檬酸和磷酸铵被分解后,产生碱性化合物,使pH升高,当加入1%溴麝香草酚蓝指示剂时,培养基就会有绿转变为深蓝,溴麝香草酚蓝指示范围:pH<6黄,pH6-7绿,pH>7蓝。大肠杆菌不能利用柠檬酸盐实验结果为阴性(绿),产气肠杆菌能利用柠檬酸盐实验结果为阳性(蓝)。
(五)硫化氢实验
用来检测硫化氢的产生,也是用于肠道细菌检查的常用生化实验。含硫有机物(如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸)能被部分细菌分解产生H2S,H2S和培养基中的铅盐或铁盐反应,形成黑的硫化铅或硫化铁沉淀。大肠杆菌不能分解含硫有机物实验结果为阴性(无沉淀),产气肠杆菌能分解含硫有机物实验结果为阳性(黑沉淀)。
来龙去脉造句
三、实验器材:
1、菌种:大肠杆菌、产气肠杆菌斜面各一支。
2、培养基:蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、柠檬酸盐培养基、硝酸盐还原培养基、醋酸铅培养基
3、溶液和试剂:甲基红指示剂,40%KOH,5%-蔡酚溶液,乙醚,吲哚试剂。
4、仪器或其他用具:试管架,接种环等。
四、操作步骤
电子表格的使用(一)实验准备。唐嫣exo
1.葡萄糖蛋白胨水培养基配制:蛋白胨3g,葡萄糖3g,磷酸氢二钾1.2g,水600ml,溶解,调节Ph7.,0-7.2,分装于70支试管中,112C灭菌30min。
2.柠檬酸盐培养基配制:NH4H2PO40.2g,K2HPO40.2g,NACLLG,MgSO440mg,柠檬酸钠0.4g,琼脂4g,调节pH6.8,1%溴香草酚蓝乙醇液2ml,水200ml,溶解,分装于20支试管中,121C灭菌20min。(pH不宜偏高,以淡绿为宜)。
3.硝酸盐还原培养基配制:蛋白胨1.25g,氯化钠0.625g,硝酸钾0.25g,水125ml,溶解,调节pH7.4左右,分装于16支试管中,121C灭菌20min。
4.硫化氢试验养基配制:蛋白胨5g,氯化钠1.25g,柠檬酸铁铵125mg,硫代硫酸钠125mg,琼脂5g,水250ml。先将琼脂、蛋白胨融化,冷至60C时加入其他成分,调pH7.2左右,分装于35支试管中,112C灭菌20min。
(二)接种与培养
1.穿刺法分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支醋酸铅培养基(H2S),37"C培养48h。
2.分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支蛋白胨水培养基(I)、2支葡萄糖蛋白胨水培养基(M&V),37C培养2d。
3.划S曲线法分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支柠檬酸盐斜面培养基(C),37°C培养2d。
(三)结果观察
1.H2S实验:观察是否有黑硫化铅沉淀产生。
2.吲哚实验:2d后的培养物内加3~4滴乙醚,摇动数次,静至1~3min,待乙醚上升后,沿管壁徐徐滴加2滴吲哚试剂,在乙醚和培养物之间产生红环状物者为阳性反应。
3.甲基红实验:2d后的培养物内加2滴甲基红试剂,培养物变为红者为阳性,黄者为阴性(注意甲基红不要过量,以免出现假阳性)。
4.伏一普实验:2d后的培养物内加5-10滴40%KOH,然后加入等量的5%一萘酚溶液,用力振荡,红为阳性。
5.柠檬酸盐实验:观察2d后的培养物上有无细菌产生及其颜,蓝为阳性,绿为阴。