低分子量肝素钠的制备与临床应用

收稿日期："##$%#&%#’

作者简介：韦传宝（’($’%），男，博士，研究

向，分子生物学，)%*+,-：./,012+34+567,3+805*。

基金项目：安徽省教育厅自然科学研究项目（"##$9:;’<=）

低分子量肝素钠的制备与临床应用

韦传宝

（皖西学院化学与生命科学系，六安!">&#’"）

摘!要：低分子肝素有抗凝血、抗血栓、调血脂、抗肿瘤等作用，与普通肝素相比具有皮下注射吸收好、半衰期长、生物利用率高，与血浆、血小板亲和力小、出血副作用少等优点。对低分子肝素的制备、质量检测和临床应用的研究进展进行了综述。关键词：低分子肝素；制备方法；临床应用；研究进展中图分类号：?($"

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!!肝素（1/A+B,3）是一种由动物结缔组织的肥大细胞合

成的黏多糖，是一种天然抗凝血物质。低分子肝素（-5.*5-/02-+B ./,C1D 1/A+B,3，EFGH ）是一类平均分子量为<IJ 的肝素，临床应用的EFGH 是由普通肝素（亦称未分级肝素，23KB+0D,53+D/L 1/A+B,3，MNH ）经化学或酶解方法制备的钠盐或钙盐。

普通肝素临床应用存在一定的局限性：半衰期短，需持续静脉点滴；需监测凝血酶活性并凋整用量；受血小板OP 因子影响使疗效不稳定；导致骨质疏松和血小板减少等。’(&$年，:513753等发现当皮下注射低分子肝素时，在体内抗NQ+的作用要比普通肝素强的多，从此，低分子肝素的开发与研究越来越被重视，成为国内外肝素研究的热点。低分子量肝素保留了普通肝素抗血栓形成等功能，减轻或避免了普通肝素的不良作用，使用起来更方便。

目前国外已有十多种EFGH 产品相继问世，如辉瑞制药公司生产的“达肝素钠注射液”［’］

，利奥公司开发的“亭扎

肝素钠”等［"］

。中国自"#世纪(#年代开始低分子肝素产

品的研制，最早的低分子肝素钠制剂是’(@<；年大连生化制药厂开发的“抗栓灵含片”。以后相继有多个厂家研发、生产低分子肝素类药品，如杭州九源基因工程有限公司生产的低分子肝素钠注射液“吉派林”、广东天普生化医药股份有限公司生产的“低分子肝素钙”注射液、天津红日药业生

产的低分子肝素钙注射液“博璞青”［>］

、山东齐鲁制药厂研

制的“齐征”利低分子肝素钠凝胶等

［"］

。

’!低分子肝素钠的制备

制备低分子肝素钠的方法有多种，制备方法不同，产品的分子量和生物功能也有所不同。制备方法大体上可分为>类：即物理分离法、裂解法和合成法［;］。值得注意的是，这些方法多采用专利保护。’8’!物理分离法

主要有有机溶剂沉淀法、凝胶过滤法、亲和层析法、离

子交换层析法和超滤法，其中以亲和层析最为重要。物理分离法制备的低分子肝素大多用于结构测定及生物活性的研究，所用的材料一般是未分级肝素或未分级肝素经过裂解后的初级产物［;］

。

’8"!裂解法

分化学裂解法和酶裂解法，化学裂解法主要有亚硝酸控制解聚降解法、过氧化物降解法、!%消除降解法、自由基催化降解法、苯甲基化并碱降解法、高磺酸氧化降解法等。酶裂解法为肝素酶降解法。降解反应不同，产品的末端结构也不同，无论是采用何种降解方法都会改变肝素的结构，有的降解反应恰巧在肝素结合部位活性位点上，从

而影响了它的活性［;］

。

’8>!合成法

近年来国外采用遗传工程方法合成出了肝素的各种组分，利用不同糖基人工合成肝素片段取得了成功，尽管还未见应用于工业生产，但研究动向值得国内注意与借鉴。

"!质量检测

使用级别或出口级别不同，对低分子肝素钠质量的要求相差很大，检测方法和指标也有一定的差别。原料级产品只需进行常规检测，包括效价测定、蛋白质含量测定、光吸收的测定和热源物质测定。无蛋白级产品除了要进行常规检测外，还要进行AH 值和干燥失重等测定，其中对蛋白质的含量要求严格。精品外用级要求较高，注射级要求就更高更严，精品指标多达’<R "#项，特别是光吸收要求严格，主要根据美国药典、英国药典和中国药典中的相应标准进行检验。

"8’!效价测定!一般采用生物学方法检测，以美国9;

标准品为对照。美国药典规定使用绵羊血浆法［<］。我国

使用的方法是在绵羊血浆法基础上进行改良，以半凝固体积计算效价。即将肝素钠标准品和供试品加入柠檬酸羊血浆中，钙化一定时间后观察两者的凝固程度，如标准品

>第">卷第$期"##$年’"月!生物学杂志:SM?TUE SN =OSESVW !

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和供试品配成相同的浓度又得到相同的凝固程度，则说明两者效价相同，以此来对比测定未知样品的效价。中国国家药品标准［!］要求用生底物法测定"#$%&’(注射液的抗)*(效价以标示其抗血栓活性。

+,+-蛋白质含量测定-参照美国药典的三法［.］。当三滴入粗品肝素钠后，溶液呈现出不同程度的白浑浊或沉淀。根据蛋白浊度，参照+!/01和+2/01的光吸收，可以判断效价范围。

+,3-光吸收的测定-按中国药典的规定［4］，使用56(71(8 9:(";<,<:=967=1>/!/型全波长分光光度计进行。肝素钠在?2.@++/01波长处有特征吸收，在+3/@3//01波长处无光吸收。

3-临床应用

肝素是有六糖或八糖重复单位构成的线形链状分子，平均分子量?.AB，低分子肝素平均分子量.AB左右，约为母体肝素分子量的?C3，结构较为单一。不论是常规肝素或者低分子量肝素，它们抗血栓形成主要归于对凝血因子)*(的抑制。+/世纪2/年代研究证实，肝素催化DE!抑制)"(时需同时结合两者，故肝素分子链应长于?2个糖单位，而催化DE!抑制)*(和)*"(时，只要结合DE!，因此短的肝素链即可发挥

作用，"#$%就是基于该理论被开发出来［3］。"#$%的结构与生物活性与F)%有很大区别，能产生良好而持久的抗血栓等作用，临床安全性好（表?）。

表?-低分子肝素和普通肝素生化指标和药理物性比较

特性F)%"#$%

平均分子量?+@?.AB>@!,.AB

糖基数>/@./?3@++

抗)*(：抗)"(?G?+G?@>G?

灭活血小板上)*(能力弱强

被血小板因子>中和作用有无

在富血小板血浆中抑制)*"(生成能力弱强

对血小板功能的抑制作用强弱

与内皮组织及体内蛋白结合力强弱

剂量依赖性消除是否

低剂量的生物利用度+>H?//H

半衰期?+

对血管的渗透性及加重微血管出血明显不明显

--低分子肝素钠有注射用和外用两种剂型。前者为主要剂型，后者如低分子肝素钠凝胶［+］和低分子量肝素钠乳膏［2］。随着研究的深入，人们发现低分子肝素钠不但有抗凝、抗血栓形成和调节血脂的作用，还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等功能。本文重点讨论注射用低分子肝素钠的临床作用。

3,?-抗凝血作用-低分子肝素的抗凝作用一般认为主要通过两个方面：（?）对凝血酶的抑制作用；（+）对)*(的抑制作用。

3,+-抗血栓作用-凝血酶的激活是血栓形成的主要因素之一，"#$%有很强的抗)*(作用，能抑制凝血酶的激

活，还能抑制血小板聚集，减少暂时性血小板凝块转变成

永久性血小板血纤蛋白凝块的发生机率，能降低血液黏度，维持血液正常的流动，从而防止血栓的形成。由血栓形成导致的疾病很多，因此，低分子肝素钠对这类疾病较多。（?）不稳定型心绞痛的发生机制之一是血栓形成和血小板聚集的结果，低分子肝素钠对不稳定型心绞痛有疗效［I］。（+）脑卒中与血栓形成有关，低分子肝素较强的抗)*(和抗)JJ(作用，可以通过抗凝限制脑梗死的发展［?/］。（3）临床常用于防治肾病综合征的血栓和栓塞并发症［??］。（>）预防腹部手术后粘连。

3,3-抗肿瘤作用-近几年大量实验研究显示"#$%具有一定的抗肿瘤作用。57=KK等［?+］将LL.3?腺癌细胞注入大鼠腹腔内，研究"#$%对腹腔内肿瘤的作用，结果显示"#$%能显著抑制腹腔内肿瘤的生长和转移。顾爱琴等［?3］发现低分子肝素联合化疗非小细胞肺癌有较好的疗效。

3,>-抗炎作用-肝素是三磷酸肌醇（J5

）受体特异性拮

抗剂，可阻断J5

介导的肥大细胞（#L）脱颗粒而引起的超敏反应［?>］。

美国心脏病学会通过对近年来数个大型临床试验数据的总结分析，认为"#$%至少与F)%一样安全有效，而且使用方便［?.］。

>使用方法和注意事项

>,?-使用方法

低分子肝素钠的用量与产品、病症和个体差异有关。通常选用腹壁皮下注射，因为腹壁皮下血管、淋巴管丰富，容易吸收。（?）用于一般，每次?//F C AM，每日+次。（+）用于急性冠脉综合症，每次?+/F C AM，每日+次。最大剂量为?////F C?+小时，至少用药4天，必要时可延长。（3）用于预防伴有血栓栓塞并发症危险的大手术，在术前?@+小时给予+.//F，以后每日?次，剂量同前，一般持续.@?/天。（>）用于血透时预防血凝块形成，要根据不同情况使用不同的方法和剂量［?］。

>,+-常见的不良反应

常见的不良反应有：（?）出血；（+）低分子量肝素为酶诱导剂，少数患者使用后血清谷氨酸&丙酮酸氨基转移酶轻度增高，停药后可恢复；（3）出现全身或局部过敏反应；（>）极少情况下可引起血小板减少；（.）注射局部出现小疲斑。

>,3-不宜使用或慎用情况

下列情况不宜使用：（?）近期（+个月）发生的脑血管事件、颅脑外伤、肿瘤、手术；（+）!个月内发生的内脏大出血；（3）动性颅内病变（动脉瘤、肿瘤）；（>）未控制的高血压（收缩压&+!,!/A5(C舒张压&?>,!3A5(）；（.）出血性疾病及肝、肾严重病变；（!）近期（?/日）内大小外伤、手术、活检、

! 3第+3卷第!期

+//!年?+月

生物学杂志

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心肺复苏、不能加压的血管穿刺术；（!）感染性心内膜炎、心包炎、动脉瘤、视网膜出血；（"）妊娠。

国内肝素工业至今仍主要停留在肝素分离纯化、粗品或精制品出口上。近几年，国内在#$%&制剂的临床应用研究方面主要致力于评估其安全性和疗效，医学界对#$’%&给予很高的评价，随着国产#$%&临床研究的深入，无疑将对今后#$%&制剂在国内市场的推广产生巨大推动作用，国外制剂垄断国内市场的局面将有所改变。

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低分子量肝素钠的制备与临床应用

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