新冠病毒核酸检测SOP
新冠病毒核酸检测SOP
本文旨在规范本中心感染的肺炎的检测方法。
适用范围：
本检测细则适用于体外定性检测感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要进行感染诊断或鉴别诊断者的口咽拭子、鼻咽拭子和痰液样本检测。
职责：
手机查询核酸检测报告1.检测人员：负责按照本检测细则对被检样品进行检测；
2.复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核；
3.科室负责人：负责对科室综合管理和检测报告的签发。
检测依据：
本检测细则依据《感染的肺炎实验室检测技术指南》。
操作程序：
1.实验前准备
1.1检测人员进入污染区前，必须穿好一次性防护服、一次性帽子、N95口罩、双层手套、一次性靴套、护目镜、防护面屏不得将与实验无关物品带入实验室。
1.2调节室温至20-25°C,湿度20-80%。
1.3检测试剂在室温平衡半小时，并检查试剂是否在有效期内。
1.4检查仪器是否正常，做好检测前准备工作。
1.5开启实验室污染区生物安全柜。
2.实验方法
2.1试剂准备（试剂准备区）
从试剂盒中取出核酸扩增反应液、酶混合液、ORFlab/N反应液，室温融化，充分振荡混匀后瞬间离心。
计算试剂使用份数N（N=样本数+1管阳性对照+1管阴性对照），根据下表配置反应体系，力口入一适当体积离心管中，充分振荡混匀后瞬间离心，按20U1.分装至PCR反应管中，并转移至样本处理区。
加入体积（ML）/人份 ORFlab/N反应液 总体积20
2.2样本处理（样本处理区）
2.2.1核酸提取：待测样本、阳性对照及阴性对照按照核酸提取试剂盒说明书进行操作。
2.2.2加样：在上述准备好的PCR反应管中分别加入待测样本核酸、阳性、阴性对照各5u1.终体积为25u1./管，盖紧管盖，瞬时离心。
2.3PCR扩增检测（核酸扩增区）
2.3.1将PCR反应管置荧光定量PCR仪扩增检测。
2.3.2插上仪器电源线，打开仪器背部的电源开关，仪器开机初始化。等待至指示灯停止闪动，变成稳定绿，进入下一步操作。
2.3.3打开电脑桌面qsoft4.1软件，进入qsoft4.1用户界面，表明仪器与电脑连接成功,进入下一步操作。
2.3.4新建程序：单击菜单栏中标页目一、创建新的程序。或者调入已保存的PCR程序模板文件，运行程序。
1.创建新程序时，点击“创建项目”，设置PCR基本参数、文件名、反应体系和操作者等。
2.设置实验程序时，按照试剂盒说明书中的循环参数设定进行温度循环设置。注意，在步骤3中，应该设置荧光检测时的温度为55°C。在勾选基因通道时，需要填写检测信号（管1）。点击保存，保存我们所创建的新程序。
3.在界面左下角点击“Home”，进入实验向导。更改文件名、操作者，勾选模块。基因通道默认为我们所设置的，如需要可勾选全通道扫描。
4.进行孔板编辑，设置样品孔定义，根据样品数设置孔板。点击右下侧的样本项目，进行样本类型的更改，设置阴阳对照。
5.反应条件全部设好后，打开仪器蓝滑盖，放入样品，盖上盖子，点击“实验运行”，再点击“开始”，即可开始运行程序。运行程序前，会要求设置好结果文件保存路径。运行结束后，结果文件会自动保存在指定的文件夹中。
6.进行结果分析参数设定。根据分析后扩增曲线图调节起止值。建议起始设在3~15，终止设在5-20.同时调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线。点击分析，在报告界面查看结果。
7.根据临床样本检测结果，利用R0C曲线法确定ORFlab、N参考值均为Ct值等于38.
8.进行检验结果的解释。以下要求需在同一实验中同时满足，否则本次实验无效序。HEX/VIC通道，ROX通道内参—CW30.
9.实验结束后，打开仪器蓝滑盖，取出八联管丢弃，并依次关闭PCR仪电源和电脑电源。
10.仪器维护：仪器的表面应每周用软抹布加少量清水擦洗1次，清洁后将仪器擦干。若有试剂泄漏在仪器表面，应用软抹布加75%酒精擦拭干净。在清洁仪器前必须关闭电源，并拔掉电源线。
6.4 避免将液体倒入仪器内部或模块中。
6.5 不要使用强腐蚀性或有机溶剂清洗仪器。
6.6 定期用吹气球轻轻吹拭反应孔，避免沾染灰尘或杂质影响PCR扩增和荧光检查。
6.7 若试剂泄漏至反应孔内，应使用无尘纸或无尘布加75%酒精擦拭。
6.8 仪器闲置时应盖上机罩。
7 操作注意事项
7.1 操作按照《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》进行，严格分区使用仪器、设备、耗材和工作服，避免污染。不同批号试剂盒组份不可互换使用，使用前应室温融化、充分振荡混匀并离心。
7.2 分装反应液时避免产生气泡，上机前检查反应管是否盖紧。
7.3 实验结束后及时清理台面并消毒，使用10%次氯酸钠、75%酒精和紫外灯等措施。
7.4 待测样本视为具有传染性，操作符合《病原微生物实验室生物安全通用准则》；医疗废弃物处理符合《医疗废弃物管理条例》。
7.5 咽拭子检测结果阴性不能排除病毒感染，建议根据临床症状采集下呼吸道样本进行复测。
7.6 严格按照说明书操作试剂，避免因保存运输或操作不规范等因素导致性能变化。采集样本量不足等原因可能导致假阴性结果，应结合临床信息综合判断。
7.7 待检标本、试剂盒和废弃物有潜在传染性，应严格消毒隔离。
7.8 操作后立即去除手套并洗手，避免污染环境。
7.9 避免标本溅出，污染环境。
7.10 每次实验后必须进行一次性严格消毒。
7.11 不要使用过期试剂。
7.12 流感检测试剂必须保存在2°C~8°C环境中。
7.13 经常校正移液器。
8 支持性文件
8.1 《感染的肺炎实验室检测技术指南》
9 质量记录
9.1 检验原始记录。
9.2 检验报告。
新冠病毒核酸检测服务方案
当前，新冠肺炎疫情持续蔓延，我国部分地区出现聚集性疫情和零星散发病例。春节期间返乡人员增多、人员流动增加，疫情传播风险加大，因此核酸检测需求也将随之提高。
为扩大核酸检测服务供给，满足检测需求，提出以下要求：
1.加强核酸检测服务的组织管理
各地应按照《进一步推进新冠病毒核酸检测能力建设工作方案》的要求，加强辖区内检测资源的统筹调度，以提高日常核酸检测能力。同时，通过科学布局检测资源和调动机动检测力量等方式，为众提供及时优质高效的核酸检测服务。各省级卫生健康行政部门应通过等方式，向社会公布辖区内所有核酸检测机构的名单、工作时间、采样地点、和预约方式等。要求各核酸检测机构在规定时间内出具检测结果，并将检测结果与本地健康码相关联，以便众查询使用。
2.不断优化核酸检测服务
核酸检测机构应全面推行预约服务，为众提供电话、手机APP、小程序、现场等不同的采样预约方式，实现分时段、错峰采样，以尽量减少众现场等待时间。同时，鼓励提供单样检测和混样检测服务，供众自行选择，并在醒目位置公示核酸检测价格。原则上，来自低风险地区的众可进行10:1混样检测，中风险地区可进行5:1混样检测，高风险
地区及重点人须进行单样检测。核酸检测机构还应设置专门窗口或区域，为“愿检尽检”、返乡人员等单纯进行核酸检测的众提供采样服务，众无需挂号且免收门诊诊察费。要充分借助信息化手段，提供网上支付、推送检测报告等服务，让信息多跑路、众少跑腿。
3.扩大农村地区检测服务供给
各地应落实《冬春季农村地区新冠肺炎疫情防控工作方案》的要求，及时开展样本采集和核酸检测，实行“乡采样、县检测”。乡镇卫生院负责核酸检测样本采集和送检，不具备条件的由县级卫生健康行政部门安排机构收集样本和送检，县医院、疾控中心或第三方实验室负责检测。有条件的地方可配备移动检测车，采取下乡巡回检测的方式，进一步扩大核酸检测服务供给。
4.强化核酸检测质量控制
各地应加强核酸检测全流程的质量控制，按照相关技术规范标准，做好采样、保存、运输、处理、检测、结果反馈等工作。对从事核酸采样检测的医务人员持续开展技术培训，
考核合格后方可上岗。落实分析前、分析中、分析后三个阶段的质量管理制度。各省级临床检验中心应持续组织开展室间质评，加大质评频次，及时反馈通报质评结果。室间质评结果不合格的，应立即暂停新冠病毒核酸检测服务；经整改验收合格后，方可重新开展。
5.加强采样检测的安全管理
在采样检测过程中，各地应加强安全管理，确保医务人员和众的安全。要做好防护用品的配备和消毒工作，确保采样器具和消毒液的质量和有效期。对于采样器具的回收和处理，应按照相关规定进行分类处理，避免交叉感染的风险。同时，要加强对采样检测场所的管理和消毒，保持环境的清洁和卫生。