人类免疫缺陷病毒HIV-RNA核酸定量检测
人类免疫缺陷病毒(I型)核酸定量检测系统标准操作程序1. 目的:规范超敏PCR仪器配置系统及人类免疫缺陷病毒(HIV-I RNA)的检测过程,确保检测结果的准确性和重复性。
2. 检测方法和原理
检测方法:TaqMan探针荧光定量PCR法。
检测原理:人类免疫缺陷病毒(I型)核算定量检测试剂盒(PCR-荧光法)采用核酸扩增技术,定量检测人血浆中HIV-I RNA。该方法包括三个主要步骤:(1)样品制备以分离HIV-I RNA;(2)靶RNA的逆转录形成互补DNA(cDNA);(3)靶(cDNA)的PCR扩增以及裂解的、靶特异性的、双标记寡核苷酸探针的检测。
3. 标本要求
标本类型:血浆(EDTA抗凝)。
标本的采集与处理
标本采集量:采集患者静脉血6 mL(EDTA抗凝真空采血管)。
标本处理:标本采集后应在2小时内送至实验室,实验室收到标本后在1小时内处理标本。签收:门诊、住院以及CDC标本签收条码,并做好相关登记工作。
编号:对标本进行唯一编号,内容如下:“年月日6位数字+标本号3位数字”,例如2018年1月1日收到一个HIV-RNA标本即编号为:“1”。
离心:800-1600g,20min离心标本。
标本保存:血浆在室温(25-30℃)最多存储1天;2-8℃最多存储6天;-20℃—-80℃可存储6周。将待检血浆以2管每管1200 uL量存储于戴螺旋盖的无菌聚丙烯管,在管壁编写如的编号。未检标本放置于专用样本盒中,冻存于-80 ℃冰箱。已检血浆置-80oC冰箱保存2个月,到期后按科室有关程序作废弃标本处理。
4.仪器和试剂
试剂:(配套封闭试剂)
试剂盒(包含核酸提取试剂、质控品及阳性定量参考品组分、PCR 检测试剂组分)保存于2-8℃环境下,有效期22个月。
试剂开瓶后,在室温条件下放置时间不应超过72小时;2-8℃条件下不超过30天。
手机查询核酸检测报告主要组成成份:
5.标准操作