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王文杰·
大 医 生
D O C T O R
2020年第22期
作者简介：陈海涛，本科，主治医师，研究方向：临床病理组织学诊断。
通信作者：柴琳琳，硕士研究生，助理研究员，研究方向：肿瘤遗传学方向，E-mail：****************。
陈海涛 兰建云 胥传海 刘 水 徐林成 柴琳琳
[南通大学第四附属医院（盐城市第一人民医院），江苏盐城 224006]
摘要：目的 分析定量检测配对盒家族基因1（pairedboxed gene1，PAX1）甲基化对宫颈癌前病变的诊断价值。方法 选取2017年1月至2019年12月南通大学第四附属医院收治的125例高危亚型人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染者为研究对象，按照患者病理组织诊断的病变级别进行分组，分别为正常宫颈组29例、低级别病变组33例、高级别病变组35例与癌变组28例。所有患者均完成PAX1甲基化定量检测，观察并分析PAX1甲基化检测结果。结果 正常宫颈组PAX1甲基化水平为（1.75±0.19）%，低级别病变组为（2.71±1.31）%，高级别病变组为（3.56±1.49）%，癌变组为（4.75±1.57）%，组间比较有统计学意义（P ＜0.05）。ROC 曲线显示PAX1甲基化定量检测诊断宫颈癌前病变的AUC 为0.76，最佳阈值为4.12%，灵敏度为89.42%，特异度为79.53%。结论 定量检测PAX1甲基化可辅助诊断宫颈癌前病变。关键词：PAX1甲基化；定量检测；宫颈癌；癌前病变
Application of Quantitative Detection PAX1 Methylation in Diagnosis of Precancerous Lesions of Uterine Cervix
CHEN Haitao LAN Jianyun XU Chuanhai LIU Shui XU Lincheng CHAI Linlin
[Fourth Affiliated Hospital of Nantong University（Yancheng First People's Hospital），Yancheng，Jiangsu 224006，China]
Abstract：Objective To analyze the diagnostic value of pairedboxed gene1（PAX1）meth
ylation in precancerous lesions of Uterine Cervix. Methods A total of 125 patients with high-risk subtype human papilloma virus（HPV）infection，who were admitted to Fourth Affiliated Hospital of Nantong University from January 2017 to December 2019，were enrolled and divided according to the pathological diagnosed lesion grade of the patients，which were 29 in the normal cervix group，33 in the low-grade lesion group，35 in the high-grade lesion group and 28 in the cancerous lesion group，respectively.Quantitative PAX1 methylation testing was completed in all patients，and PAX1 methylation testing results were observed and analyzed. Results The PAX1 methylation level in the normal cervical group was（1.75±0.19）%，the low-grade lesion group was（2.71±1.31）%，the high-grade lesion group was （3.56±1.49）%，and the cancer group was（4.75±1.57）%（P ＜0.05）. The ROC curve showed that the AUC of the quantitative detection of PAX1 methylation for the diagnosis of cervical precancerous lesions was 0.76，the optimal threshold was 4.12%，the sensitivity was 89.42%，and the specificity was 79.53%. Conclusion Quantitative detection PAX1 methylation can assist in the diagnosis of precancerous lesions of uterine cervix.Keywords：PAX1 methylation；quantitative detection；cervical cancer；precancerous lesions
近些年，临床诊疗技术方法发展愈加丰富，人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）捕获杂交法、细胞学筛查的广泛应用，帮助不少宫颈癌前病变以及部分早期浸润宫颈癌患者在早期得到诊断并加以，使得宫颈癌的病死率在一定程度上有所减低[1]。根据流行病学调查研究显示[2]，感染HPV 的患者并非所有都进展为宫颈癌。研究表明[3]，宫颈癌的发生及进展需要其他协同因子参与作用，而具体是哪些协同因子参与宫颈癌的进展，则需要通过分子水平的检测鉴定。研究表明[4]，抑癌基因的异常甲基化对抑癌基因的表达形成有调控功能，并且发现配对盒家族基因1（pairedboxed gene1，PAX1）的甲基化率异常升高和宫颈癌前病变进展、宫颈鳞癌的发生存在紧密联系。为了
解PAX1甲基化的定量检测对宫颈癌前病变的诊断价值，本研究以2017年1月至2019年12月125例患者为研究对象进行检测分析，结果如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取南通大学第四附属医院（盐城市第一人民医院）2017年1月至2019年12月收治的125例高危亚型HPV
感染患者为研究对象，根据患者病理组织诊断的病变级别进行分组，正常宫颈组（无病变）29例，年龄
21～56岁，平均年龄（35.22±6.92）岁，低级别病变组（CIN 为Ⅰ级）33例，年龄22～59岁，平均年龄（38.26±6.49）岁，高级别病变组（CIN 为Ⅱ-Ⅲ级）35例，年龄22～57岁，平均
年龄
（37.58±7.15）岁，癌变组28例，年龄21～58岁，平
□经验交流/Exchange of Experience
均年龄（38.16±7.22）岁。四组患者年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经南通大学第四附属医院（盐城市第一人民医院）医学伦理委员会批准。
纳入标准：确诊为高危亚型HPV感染者；具备正常交流沟通能力；依从性高，签署研究知情同意书。排除标准：存在其他恶性肿瘤史者；存在免疫系统疾病史者；妊娠期妇女。
1.2 方法
宫颈标本的采集：使患者保持截石位，消毒铺巾，从肉眼可见宫颈病变部位收集细胞并将其制成宫颈刮片，同时利用阴道镜在病变部位钳取一定量的宫颈组织，并对该组织进行病理活检，检查HPV，另外利用宫颈刮片进行PAX1基因的甲基化检测。以病理学检查结果为标准，对上述所有检测结果进行分析。
宫颈DNA处理：遵从试剂盒说明书操作规程，抽提患者DNA、根据要求使用亚硫酸氢盐处理DNA，对目标基因进行体外转录。
PAX1基因上游引物：5'-GTGGAGACTGT GTCGGGAGGG-3'；PAX1基因下游引物：5'-AAATACCCRAGACTAAACGC-3'；PAX1基因外侧下游引物：5'-ACCCAGCTCATCCACACTCCC-3'；PAX1基因外侧上游引物：5'-AAGTTGATTT AGGGTTTGGGGT-3'。选择生物素标记下游引物5'末端。
焦磷酸DNA测序：选择焦磷酸测序仪，首先根据甲基化分析的要求制备单链DNA模板，目的基因PAX1所用的引物序列为5'-GGAGGT AGGTTTTGGAG-3'，随后进行焦磷酸测序，测序结果显示PAX1基因包含9个胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤岛（Cp Gisland）。得到PAX1基因测序结果后每组样本的基因甲基化水平表示为单个基因全部检测位点的甲基化率平均值。以试剂盒提供的通用为DNA为内参，利用焦磷酸测序技术定量测试PAX1基因的9个不同位点甲基化指数并进行分析。参照内参中各位点甲基化水平，标本检测结果中的个位点甲基化水平和内参之间的比值即为该位点甲基化发生率。
1.3 统计学分析
数据统计通过SPSS 23.0运算分析，计量资料表示为（x±s），四组间比较行F检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 PAX1基因甲基化水平
正常宫颈组PAX1基因甲基化水平为（1.75±0.19）%，低级别病变组PAX1基因甲基化水平为（2.71±1.31）%，高级别病变组PAX1基因甲基化水平为（3.56±1.49）%，癌变组PAX1基因甲基化水平为（4.75±1.57）%，四组PAX1基因甲基化水平组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。
表1 各组PAX1基因甲基化水平对比（x±s，%）
组别n甲基化水平正常宫颈组29 1.75±0.19
低级别病变组33 2.71±1.31
高级别病变组35 3.51±1.49癌变组28 4.75±1.57
F16.359
P0.000
2.2 PAX1甲基化定量检测的诊断效能
根据四组PAX1甲基化水平绘制ROC曲线，显示曲线下面积（AUC）为0.76，根据PAX1甲基化水平诊断
宫颈癌癌前病变的阈值为4.12%，该阈值下的灵敏度为89.42%，特异度为79.53%，见图
1。
图1 PAX1甲基化定量检测ROC曲线
3 讨论
临床研究表明[5]，宫颈癌的发展由宫颈癌前病变进展至宫颈癌短则需要几年，而长则需要几十年，宫颈癌早期症状一般不典型，当症状明显时疾病的恶性程度也已显著增高，病变已经进入中晚期，丧失了最佳时机。由此，宫颈癌的早期诊断对于患者以及延长生存时间尤其重要。要做好宫颈癌前病变的诊断，预防宫颈癌前病变向宫颈癌的转变，使患者可获得更好预后。
研究发现[6]，宫颈癌变期间存在多种基因的表观的变化，其中以表观遗传学中DNA甲基化最为典型，具体表现为肿瘤抑制基因的启动子区域出现异常改变，使基因及调控因子沉默失活，从而调控肿瘤发生与发展。临床研究表明[7]，宫颈癌患者的病变组织与细胞相对于正常的组织与细胞中能够大量检测到DNA甲基化。因此推断基因甲基化的检测指标能够作为宫颈脱落细胞、宫颈组织活检中的宫颈癌的早期诊断。有研究表明[8]，原癌基因的异常表达可从不同方面对肿瘤发生、发展产生影响，包括能够引起细胞过度增殖和分裂，抑癌基因的异常甲基化表现常常能够影响抑癌基因的表达，从而调控下游基因表达与功能实现。研究显示[9]，PAX1基因甲基化阳性率直接反映宫颈癌病理分级，甚至与宫颈癌是否发生淋巴转移相关。一些
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研究认为可将PAX1 基因视为早期诊断宫颈癌的分子标志物[10]。
本研究显示，正常宫颈组PAX1基因甲基化水平为（1.75±0.19）%，低级别病变组为（2.71±1.31）%，高级别病变组为（3.56±1.49）%，癌变组为（4.75±1.57）%，从正常宫颈、低级别病变、高级别病变、癌变组织中的PAX1基因甲基化水平逐渐升高，组间比较差异有统计学意义（P ＜0.05）。本文确定了针对宫颈癌高危人进行PAX1甲基化定量检测能够帮助发挥良好的早期筛查作用，有助于通过分子水平的检测早期发现癌前病变。本研究还进行ROC 曲线绘制，显示AUC 为0.76，最佳阈值下的灵敏度为89.42%，特异度为79.53%，以上结果表明PAX1甲基化能够对宫颈癌前病变有诊断价值。本研究通过测定PAX1基因甲基化水平从而鉴别宫颈癌及各类癌前病变人，统计结果显示ROC 曲线中AUC 结果为0.76，表示PAX1有着较高诊断价值。研究显示检测PAX1甲基化能使宫颈脱落细胞、活检组织检测的准确度提高，同时能替代接近一半的宫颈组织活检、阴道镜检查，应用价值明显。有学者提出可将PAX1
基因甲基化水平检测作为早期诊断宫颈癌的辅助方法，其研究结果显示PAX1 基因甲基化水平鉴别正常组织、宫颈上皮内瘤样病变（CIN）2的灵敏度为0.66，特异度为0.92，其ROC 曲线下面积为0.923；鉴别正常组织和CIN3的敏感度为0.77，特异度为0.92，其ROC 曲线下面积为0.931，证实诊断价值明显
[11]
。
综上所述，定量检测PAX1甲基化可辅助诊断宫颈癌前病变，并且经检测发现甲基化水平和宫颈癌前病变分期存在相关性，临床可用于指导方案确定。
参考文献
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作者简介：王太山，本科，主治医师，研究方向：神经疾病诊疗。
互动体感游戏对脑卒中患者运动和平衡功能康复的影响
王太山
（扬州友好医院，江苏扬州 225261）
摘要：目的 分析脑卒中患者开展互动体感游戏对其运动和平衡功能康复的影响。方法 选取2018年3月至2020年3月扬州友好医院收治的90例脑卒中患者作为研究对象。按照随机数字表法分为干预组和对
照组，各45例。对照组给予常规康复训练，干预组在对照组基础上加用体感互动游戏干预。评价两组患者下肢运动功能、平衡功能及日常生活能力。结果 干预前两组运动评定量表（Fugl-Meyer）评分、平衡量表（BBS）评分、日常生活能力（Barthel）指数评分对比均差异无统计学意义（P ＞0.05），干预后各项评分指数均显著提高（均P ＜0.05），且与对照组比较，干预组提高更明显（P ＜0.05）。结论 伴下肢运动及平衡障碍的脑卒中患者康复时应以体感互动游戏可提升患者康复训练的效果。关键词：互动体感游戏；脑卒中；运动功能；平衡功能
The Influence of Interactive Somatosensory Games on the Rehabilitation of Motor and Balance Function in Stroke Patients
WANG Taishan
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