动物营养学报２０１８，３０（４）：１４２３⁃１４３０ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ
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ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１８．０４．０２５
马衍旋１㊀王文杰２㊀穆淑琴２㊀席静宁１，２㊀李㊀宁２㊀
郑㊀梓２㊀闫㊀峻２，３∗㊀孙㊀超１∗
（１．西北农林科技大学动物科技学院，杨凌７１２１００；２．天津市农业科学院，天津市畜牧兽医研究所，
天津３００３８１；３．天津大学化工学院，天津３０００７２）
摘㊀要：本试验旨在研究共培养体系中猪骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响㊂试验分离培养了猪骨骼肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞，２种细胞分离培养鉴定后，接种于Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ细
胞小室共培养板进行共培养，待细胞密度达到９０％以上分别进行诱导分化㊂骨骼肌卫星细胞诱导分化８ｄ后，检测肌内前体脂肪细胞分化水平㊁分化标志基因的表达以及脂质代谢关键酶的表达㊂结果显示：与肌内前体脂肪细胞单独培养相比，共培养体系内肌内前体脂肪细胞的脂滴数量和脂滴面积极显著减少（Ｐ＜０．０１），肌内前体脂肪细胞增殖分化转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ和ＣＣＡＡＴ增强子结合蛋白的基因和蛋白表达水平极显著下降（Ｐ＜０．０１），肌内前体脂肪细胞的乙酰辅酶Ａ羧化酶㊁脂肪酸合成酶的基因和蛋白表达水平极显著下降（Ｐ＜０．０１）㊂由此可见，共培养体系中猪骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质沉积具有抑制作用㊂
关键词：猪骨骼肌卫星细胞；肌内前体脂肪细胞；共培养；脂质沉积
中图分类号：Ｑ９５４．６⁃３３＋２㊀㊀㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀㊀㊀文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１８）０４⁃１４２３⁃０８收稿日期：２０１７－１１－２０
基金项目：国家自然基金青年基金项目（３１４０２０９７）；中国博士后科学基金（２０１４Ｍ５６１１９１）；天津市生猪产业技术体系创新团队资助（ＩＴ⁃ＴＰＲＳ２０１７００５）
作者简介：马衍旋（１９９１ ），男，山东菏泽人，硕士研究生，研究方向为畜禽健康养殖㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｍａｙｘ１６＠１６３．ｃｏｍ∗通信作者：闫㊀峻，副研究员，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｙｊｊｓｘｚ＠１６３．ｃｏｍ；孙㊀超，教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｓｕｎｃｈａｏ２７７５＠１６３．ｃｏｍ
㊀㊀脊椎动物的肌肉细胞与脂肪细胞已经被确认来自共同的中胚层细胞，并且通过自分泌和旁分泌在调节动物的生长发育中有紧密的联系［１－２］㊂
研究脂肪与肌肉间的相互作用有助于探究细胞因子㊁营养因素和激素调节脂肪沉积与肌肉发育的作用机制㊂另外，脂肪与肌肉间的相互作用还可能将在人类新陈代谢的疾病机制和动物的肉质性状方面有广泛的应用㊂为了探讨脂肪与肌肉组织在机体发育过程中的相互影响，许多研究者间接建立细胞培养体系㊂Ｄｏｄｓｏｎ等［３］首次建立了３Ｔ３⁃Ｌ１前脂肪细胞与不同分化程度的羊肌肉细胞体外共培养体系㊂由于共培养体系比单独培养细胞能够更好地模拟动物体内的生理环境，因而受到学者们的广泛关注㊂近年来，为了探讨脂肪和肌肉组织在体内发育过程中的相互作用㊂研究者们分别建立了绵羊㊁人㊁老鼠㊁天鹅和牛的脂肪与肌肉细胞的共培养体系［４－８］㊂本试验通过分离培养猪骨骼肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞，进行体外间接共培养，研究２种细胞的增殖和分化特性，探讨在间接共培养体系中猪肌肉细胞分化对脂肪细胞分化以及脂肪细胞内脂质沉积的调控作用，为进一步揭示脂肪与肌肉组织之间的相互作用提供理论依据㊂
㊀
动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３０卷
１㊀材料与方法
１．１㊀试验材料
㊀㊀主要材料包括：０．２５％胰酶消化液㊁０．０２％乙二胺四乙酸（ＥＤＴＡ）（１ʒ１使用，Ｓｉｇｍａ公司，美国）㊁台盼蓝㊁０．２％胶原酶㊁细胞冻存液㊁ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基（Ｇｉｂｃｏ公司，美国）㊁胎牛血清（Ｇｉｂｃｏ公司，美国）㊁胰蛋白酶㊁磷酸缓冲盐溶液（ＰＢＳ）（北京索莱宝科技有限公司）㊁胰岛素㊁地塞米松㊁特级马血清（Ｇｉｂｃｏ公司，美国）㊁青链霉素混合液（１００ˑ，北京索莱宝科技有限公司）㊁３－异丁基－１－甲基黄嘌呤（ＩＢＭＸ）（Ｓｉｇｍａ公司，美国）㊁油红Ｏ㊁ＴａｃｏＴＭＤＮＡ／ＲＮＡ取试剂盒（瑞基海洋生物科技股份有限公司）㊁ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭⅡ１ｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡＳｙｎｔｈｅｓｉｓＫｉｔ（ＴａＫａＲａ公司，日本）㊁Ａｌｌ⁃ｉｎ⁃ＯｎｅＴＭｑＰＣＲＭｉｘ（ＧｅｎｅＣｏｐｏｅｉａ公司，美国）㊁ＴＧＸＳｔａｉｎ⁃ＦｒｅｅＴＭＦａｓｔＣａｓｔＴＭＡｃｒｙｌａｍｉｄｅＫｉｔ（１２％，Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ公司，美国）㊂
㊀㊀主要仪器包括：无菌培养皿㊁二氧化碳细胞培养箱㊁倒置荧光显微镜㊁Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ细胞小室共培养板㊁ＳＷ－ＣＪ－１Ｄ型超净工作台高速离心机㊁ＤＴ５－２型低速离心机㊁实时定量ＰＣＲ仪㊂
１．２㊀试验设计
㊀㊀３日龄健康大白仔猪购自天津市武清农康生猪养殖有限公司，用于原代猪骨骼肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞分离㊂供试细胞分为２个组，即对照组（单独培养肌内前体脂肪细胞组）和试验组（间接共培养骨骼肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞组），每组４个重复㊂
１．３㊀试验方法
１．３．１㊀猪骨骼肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞分离培养
㊀㊀无菌条件下，分离３日龄仔猪皮下背最长肌，去除背最长肌结缔组织和血管，剪成１ ２ｍｍ３大小的组织块，０．２％Ⅱ型胶原酶消化液３７ħ水浴消化２ｈ，２００目网筛过滤，１５００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃上清液㊂用ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液漂洗沉淀，经４００目网筛过滤，１５００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，弃上清液，再用含１０％胎牛血清和１％青链霉素的ＤＭＥＭ／Ｆ１２完全培养基重悬细胞，接种到１０ｃｍ无菌细胞培养皿，置于３７ħ㊁５％ＣＯ２培养箱培养，利用差速贴壁法纯化细胞，细胞培养２ｈ后，弃培养液，用ＰＢＳ清洗贴壁细胞２次，得到纯化的肌内前体脂肪细胞［９］㊂骨骼肌卫星细胞的分离培养参照Ｙａｎｇ等［１０］和Ｙａｎ等［１１］的试验方法㊂２种细胞分别接种到１０ｃｍ的无菌培养皿中，置于３７ħ㊁５％ＣＯ２的培养箱培养，培养液每２ｄ更换１次，细胞数量用血球计数板计数㊂
１．３．２㊀猪骨骼肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞鉴定
㊀㊀骨骼肌卫星细胞鉴定：在培养皿中放入无菌盖玻片进行细胞爬片，当细胞密度达到７０％ ８０％时，分化培养基（２％马血清＋１％双抗＋ＤＭＥＭ／Ｆ１２）培养３ｄ㊂弃掉分化培养基，ＰＢＳ清洗３次，丙酮室温固定２０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗３次，Ｔｒｉｔｏｎ⁃Ｘ１００（１ʒ１０００）处理１５ｍｉｎ，ＰＢＳ洗３次，牛血清白蛋白（ＢＳＡ）封闭２ｈ，加入Ｄｅｓｍｉｎ抗体（１ʒ５０）于４ħ过夜，ＰＢＳ洗３次，加入荧光标记的二抗（１ʒ２０００）于暗室中孵育１ｈ，ＰＢＳ洗３次，最后１μｇ／ｍＬ的４，６－二脒基－２－苯基吲哚（ＤＡＰＩ）染核１０ｍｉｎ（避光），ＰＢＳ洗３次，封片后荧光显微镜下观察㊂
㊀㊀肌内前体脂肪细胞细胞鉴定：培养皿中的细胞达到完全汇合，接触抑制２ｄ，用含有１０μｇ／ｍＬ胰岛素的完全培养液诱导分化培养２ｄ，更换完全培养液继续培养４ｄ，油红Ｏ染，在显微镜下观察细胞形态［１２］㊂
１．３．３㊀猪骨骼肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞共培养
㊀㊀２种原代细胞培养密度达到８０％ ９０％时，０．２５％胰蛋白酶３７ħ消化，ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液重悬细胞，记数后接种于Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ细胞小室共培养板进行共培养㊂肌内前体脂肪细胞以２．０ˑ１０４个／ｃｍ２的密度接种于上室，骨骼肌卫星细胞以１．０ˑ１０５个／ｃｍ２的密度接种于下室，使用含有４％胎牛血清的完全培养液培养㊂待骨骼肌卫星细胞密度达到８０％时，更换含有
２％马血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液诱导分化，４８ｈ换液１次㊂待肌内前体脂肪细胞接触抑制２ｄ后，更换含有１０μｇ／ｍＬ胰岛素的完全培养液诱导分化培养２ｄ，更换完全培养液继续培养，直至出现肉眼可见明显脂滴㊂１．３．４㊀实时定量ＰＣＲ
㊀㊀参照ＴａＫａＲａ公司ＲＮＡ试剂盒方法提取出总的ＲＮＡ㊂第１条链ｃＤＮＡ反转录试剂盒购自Ｆｅｒ⁃ｍｅｎｔａｓ公司（美国）㊂各基因及引物序列如下：过氧化物酶体增殖物激活受体γ（ＰＰＡＲγ）（５ᶄ－ＡＣ⁃
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４期马衍旋等：共培养体系中猪骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响
ＣＡＣＴＣＧＣＡＴＴＣＣＴＴＴＧＡＣ－３ᶄ，５ᶄ－ＣＣＡＣＡＧＡＣＴＣＧＧＣＡＣＴＣＡＡＴ－３ᶄ）㊁ＣＣＡＡＴ增强子结合蛋白α（Ｃ／ＥＢＰα）（５ᶄ－ＡＴＧＧＡＧＣＡＡＧＣＣＡＡＣＴＴＣ⁃
ＴＡＣ－３ᶄ，５ᶄ－ＧＣＣＡＧＧＡＡＣＴＣＧＴＣＧＴＴＧＡＡ－３ᶄ）㊁乙酰辅酶Ａ羧化酶（ＡＣＣ）（５ᶄ－ＣＴＣＣＴＡ⁃ＡＣＴＧＣＴＧＡＧＣＴＧＴＣＴＣＴＣＴ－３ᶄ，５ᶄ－ＡＧＴＣＴＴＴＣＴＣＴＴＣＡＡＴＴＣＴＴＧＣＣＴ－３ᶄ）㊁脂肪酸合成酶（ＦＡＳ）（５ᶄ－ＡＡＧＧＡＧＧＡＧＴ
ＣＡＡＣＧＧＧ－３ᶄ，５ᶄ－ＧＡＴＧＧＴＧＡＧＧＡＧＴＣＧＧＡＴ－３ᶄ）㊁脂蛋白脂酶（ＬＰＬ）（５ᶄ－ＣＧＡＡＧＴＡＴＴＧＧＣＡＴＣＣＡ⁃ＧＡＡＡＣ－３ᶄ，５ᶄ－ＴＴＧＡＴＣＴＣＡＴＡＧＣＣＣＡＡＧＴＴ⁃ＧＴＴ－３ᶄ）㊁β－肌动蛋白（β⁃ａｃｔｉｎ）（５ᶄ－ＡＣＣＡＣＡＧＣＣＧＡＧＡＧＡＧＡＡＡＴ３ᶄ，５ᶄＧＡＣＣＴＧＡＣＣＡＴ⁃ＣＡＧ－ＧＧＡＧＴＴ－３ᶄ）㊂ＰＣＲ扩增引物均由上海生物工程技术服务有限公司合成㊂ＰＣＲ扩增的条件是９５ħ５ｍｉｎ，９４ħ６０ｓ，５５ ６０ħ４０ｓ，７２ħ４０ｓ（３０个循环），７２ħ１０ｍｉｎ和４ħ反应结束，进行熔解曲线的绘制㊂利用２－ΔΔＣｔ法进行相对实时定量分析㊂
１．３．５㊀免疫印迹试验（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ）
㊀㊀将培养的细胞在冰上用裂解缓冲液溶解，并在４ħ㊁１００００ˑｇ离心１０ｍｉｎ取上清液测定蛋白浓度㊂提取的总蛋白通过１０％十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ⁃ＰＧＥＡ）进行分离，将蛋白转移至聚偏二氟乙烯（ＰＶＤＦ）硝酸纤维膜上㊂并在膜上与一抗β⁃ａｃｔｉｎ㊁Ｃ／ＥＢＰα㊁ＰＰＡＲγ㊁ＦＡＳ㊁ＡＣＣ（Ａｂｃｏｍ公司，英国）进行孵育，５％的脱脂奶粉封闭１ｈ㊂将膜与耦联二抗３７ħ孵育１ｈ，使用化学发光液ＣｈｅｍｉＤｏｃＸＲＳ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司，美国）和Ｂｉｏ⁃Ｒａｄ凝胶成像系统进行检测分析，分析灰度值，进行相对定量分析㊂
１．４㊀数据统计及分析
㊀㊀采用ＳＰＳＳ１７．０软件进行统计分析数据，利用单因素方差（ｏｎｅ⁃ｗａｙＡＮＯＶＡ）分析显著性差异，Ｐ＜０．０５为差异显著，Ｐ＜０．０１为差异极显著㊂试验数据以平均值ʃ标准差（ｍｅａｎʃＳＤ）表示㊂
２㊀结果与分析
２．１㊀细胞形态及鉴定
２．１．１㊀骨骼肌卫星细胞形态及鉴定
㊀㊀倒置显微镜下观察原代肌卫星细胞，细胞贴壁后逐渐形成梭形或纺锤形（图１－Ａ）；细胞相互融合后按一定方向呈有序排列（图１－Ｂ）；细胞分化２ｄ后形成多核的肌管，核位于中央，肌管呈长条形，平行排列（图１－Ｃ）㊂采用猪骨骼肌卫星细胞的特异标记Ｄｅｓｍｉｎ进行免疫荧光鉴定（图１－Ｄ），结果发现Ｄｅｓｍｉｎ在细胞质中的表达呈阳性，证实所培养的细胞为猪骨骼肌卫星细胞（图１－Ｅ㊁图１－Ｆ
）㊂
㊀㊀Ａ㊁Ｂ㊁Ｃ：猪骨骼肌卫星细胞培养；Ｄ：Ｄｅｓｍｉｎ在细胞质中免疫荧光染；Ｅ：ＤＡＰＩ染；Ｆ：Ｄ与Ｅ叠加㊂
㊀㊀Ａ，ＢａｎｄＣ：ｐｏｒｃｉｎｅｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｓａｔｅｌｌｉｔｅｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ；Ｄ：Ｄｅｓｍｉｎｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｓｔａｉｎｉｎｇｉｎｃｙｔｏｐｌａｓｍ；Ｅ：ＤＡＰＩｓｔａｉｎｉｎｇ；Ｆ：ｔｈｅｍｅｒｇｅｏｆＡａｎｄＢ．
图１㊀猪骨骼肌卫星细胞培养及鉴定
Ｆｉｇ．１㊀Ｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｏｒｃｉｎｅｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｓａｔｅｌｌｉｔｅｃｅｌｌｓ（１００ˑ）
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㊀
动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３０卷
２．１．２㊀肌内前体脂肪细胞形态及鉴定
㊀㊀肌内前体脂肪细胞贴壁生长，细胞接触抑制２ｄ后（图２－Ａ），改用诱导液Ⅰ诱导分化４８ｈ，细胞逐渐变圆（图２－Ｂ），再用诱导液Ⅱ诱导分化４８ｈ，然后换含有１０％胎牛血清的完全培养基继
续培养４ｄ，在倒置显微镜下观察，含有大量有脂滴样的圆形细胞时用油红Ｏ染鉴定，结果显示细胞内出现了大量脂滴（图２－Ｃ）㊂以上结果表明所培养的细胞为肌内前体脂肪细胞
㊂
图２㊀猪肌内前体脂肪细胞形态及鉴定
Ｆｉｇ．２㊀Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ（１００ˑ）
２．２㊀骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响
㊀㊀肌内前体脂肪细胞诱导分化第８天，细胞内出现大量脂滴，经油红Ｏ染后，对照组细胞中脂滴数
量多，脂滴面积大（图３－Ａ）；试验组细胞中脂滴数量较少，细胞着明显变浅㊁发暗（图３－Ｂ）㊂
定量分析结果表明，共培养组的脂滴数量和脂滴面积都极显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）（图３－Ｃ㊁图
３－Ｄ）㊂以上结果表明，骨骼肌卫星细胞与肌内前体脂肪细胞共培养下对肌内前体脂肪细胞分化和脂质沉积具有抑制作用
㊂
王文杰
㊀㊀Ａ：对照组；Ｂ：共培养组；Ｃ：脂滴数量；Ｄ：脂滴面积㊂Ｃｏｎｔｒｏｌ：对照组ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；ｃｏ⁃ｃｕｌｔｕｒｅ：共培养组ｃｏ⁃ｃｕｌｔｕｒｅｇｒｏｕｐ；数据柱标∗∗表示差异极显著（Ｐ＜０．０１），下图同㊂
㊀㊀Ａ：ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；Ｂ：ｃｏ⁃ｃｕｌｔｕｒｅｇｒｏｕｐ；Ｃ：ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔｓｎｕｍｂｅｒ；Ｄ：ｌｉｐｉｄｄｒｏｐｌｅｔａｒｅａ．Ｖａｌｕｅｃｏｌｕｍｎｓｗｉｔｈ∗∗ｍｅａｎｓｉｇ⁃ｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０１），ｔｈｅｓａｍｅａｓｂｅｌｏｗ．
图３㊀骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响
Ｆｉｇ．３㊀Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｓａｔｅｌｌｉｔｅｃｅｌｌｓｏｎｌｉｐｉｄｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ（１００ˑ）
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４期马衍旋等：共培养体系中猪骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质沉积的影响２．３㊀骨骼肌卫
星细胞对肌内前体脂肪细胞增殖分化转录因子表达的影响
㊀㊀为了验证骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞增殖分化的影响，检测了肌内前体脂肪细胞增殖分化转录因子Ｃ／ＥＢＰα㊁ＰＰＡＲγ的基因和蛋白
的表达水平㊂如图４所示，共培养组肌内前体脂肪细胞ＰＰＡＲγ㊁Ｃ／ＥＢＰα的基因和蛋白的表达水平极显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）㊂以上结果表明，骨骼肌卫星细胞抑制肌内前体脂肪细胞分化标志基因的表达
㊂
㊀㊀Ａ：肌内前体脂肪细胞增殖分化标志基因表达水平；Ｂ：肌内前体脂肪细胞增殖分化相关蛋白表达水平㊂ＰＰＡＲγ：过氧化物酶体增殖物激活受体γ；Ｃ／ＥＢＰα：ＣＣＡＡＴ增强子结合蛋白α；Ｂａｔａ⁃ａｃｔｉｎ：β－肌动蛋白㊂
㊀㊀Ａ：ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｍａｒｋｅｒｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ；Ｂ：ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌ．ＰＰＡＲγ：ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｓ⁃ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒγ；Ｃ／ＥＢＰα：ＣＣＡＡＴｅｎｈａｎｃｅｒｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎα；Ｂａｔａ⁃ａｃｔｉｎ：β⁃ａｃｔｉｎ．
图４㊀骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞增殖分化转录因子表达的影响
Ｆｉｇ．４㊀Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｋｅｌｅｔａｌｍｕｓｃｌｅｓａｔｅｌｌｉｔｅｃｅｌｌｓｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ
ｆａｃｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒｐｒｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ
２．４㊀骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质代谢关键酶表达的影响
㊀㊀为了进一步研究猪骨骼肌卫星细胞对肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响，检测了猪肌内前体脂肪细胞脂质代谢关键酶ＦＡＳ㊁ＡＣＣ和ＬＰＬ的基因和蛋白表达水平㊂如图５所示，共培养组肌内前体脂肪细胞ＦＡＳ㊁ＡＣＣ的基因和蛋白的表达水平极显著低于对照组（Ｐ＜０．０１），ＬＰＬ的基因和蛋白的表达水平极显著高于对照组（Ｐ＜０．０１）㊂以上结果表明，骨骼肌卫星细胞抑制肌内前体脂肪细胞脂质代谢㊂
３㊀讨㊀论
㊀㊀近年来，有使用肌细胞和脂肪细胞共培养的方法来研究细胞的生长特性和分泌功能㊂体外共
培养的骨骼肌卫星细胞和肌内前体脂肪细胞对研究肌肉组织与脂肪组织的相互作用具有重要意义㊂Ａｉｌｈａｕｄ等［１３］报道，在胚胎发育过程中肌细胞与前体脂肪细胞联系密切㊂Ｈａｕｓｍａｎ等［６］首次尝试直接将肌内前体脂肪细胞和骨骼肌卫星细胞混合培养㊂虽然这种培养方法接近体内生长环境，但获得的脂肪细胞较少并且混合其他类型的细胞㊂因此，混合培养的细胞不能用于试验的定性和定量分析㊂Ｄｏｄｓｏｎ等［３－４］研究表明，共培养的３Ｔ３⁃Ｌ１脂肪细胞和肌肉细胞可以促进脂肪细胞的存活㊁生长和增殖，抑制其分化㊂Ｙａｎ等［１１］研究了猪前体脂肪细胞和肌卫星细胞体外直接共培养，检测２种细胞增殖分化特征，结果表明共培养体系可以促进脂肪细胞的生长和增殖，同时
抑制脂肪细胞分化㊂
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