一、实验步骤
1、分组编号
取普通琼脂平板50个,用事先准备好的记号笔分别在其底部标记1、2、3、4、5、6、7、8、9、10……48、49、50将50个平板分为5组,1-5为第一组(放在1号房间),6-10为第二组(放在2号房间),以此类推,46-50为第十组(放在10号房间)。
2、平皿沉降
选择10间屋子作为有代表性的采样点,将屋子编号1-10。将每组的普通琼脂平板分别放置室内四角及室内中央,每组的琼脂平板均放在离地面0.8-1.5m高的同样的洁净桌子或椅子上,同时打开10组的平皿盖(将皿盖置于平板底下,不可仰放,以防污染),使每个平板的培养基均暴露于空气中,10min后(视空气的清洁程度而定),盖好每个平皿盖(盖平皿盖的顺序与打开的顺序一致),分别记录每组的采样时间。
3、温箱培养
将十组的培养皿置于37℃的温箱培养24小时。
4、菌落计数
分别记录十组平皿每组的菌落总数。用事先准备好的钢笔于平板底点数每块平板上的菌落数,并将每组5个部位所得菌落数相加除以5求平均数。凡二个或几个菌落边缘有相互重叠者,均分别计算为二个或几个。
5、结果计算
将实验结果代入下面的公式计算每立方米空气中的平均菌落数。
菌落数/m3=100÷A÷t/5×1000/10×N=(50000×N) ÷(A×t)
t—平皿暴露于空气中的时间(分钟)
N—培养后,每组平皿上的菌落总数
A—所用平皿的面积(cm2
小结:
所需实验用品:
普通琼脂平板50个、1套记号笔和标签、37℃的温箱、钢笔、计算器、50张同样的0.8-1.5m高的桌子或椅子。
二、实验用品的配置
1普通琼脂平板的制备
1)营养琼脂培养基
(1) 灭菌纸放于电子天平上(精度0.0001g)除零,用灭菌药匙在灭菌纸上称量50g牛肉浸膏。将称取好的牛肉浸膏倒入1个1L的烧杯。同样方法称取蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g倒入上烧杯,先用洗瓶加少量蒸馏水,用灭菌玻璃棒搅拌使其溶解,再加入蒸馏水稀释至刻度。
(2) pH校正仪测定pH值,若不在7.2-7.4之间,则边用灭菌玻璃棒搅拌边用用碱式滴定管或酸式滴定管取1mol/L的NaOH溶液(2.2.1)或1mol/L的盐酸溶液(2.2.2)滴定调节培养基的pH,用pH校正仪使pH值达到7.2-7.4。
(3) 然后将烧杯中的培养基倒入灭菌锥形瓶,1 000 ml培养基,可分装25n号房时间~30瓶。培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口。置于15磅高压蒸汽灭菌锅灭菌30分钟。取出后自然冷却凝固。
2)普通琼脂平板
将高压灭菌过的琼脂培养基在酒精灯和铁架台上加热融化后倒入50个无菌的平皿中,使之在平皿中形成一个至少3-5mm厚的琼脂层(直径90mm平皿约需15-20ml)。平放,略开盖。待培养基凝固后倒置存入4℃冰箱中,备用。
2溶液的配制
1)氢氧化钠溶液(1mol/L)
将灭菌纸放于电子天平上(精度0.0001g)除零,用灭菌药匙在灭菌纸上称量4g氢氧化钠。倒入一个50ml灭菌烧杯,用洗瓶加少量蒸馏水并用灭菌玻璃棒搅拌溶解。将溶解后的试样倒入100ml的容量瓶,洗烧杯三次,将洗烧杯液体倒入容量瓶,加蒸馏水至刻度,颠倒5次左右摇匀,用记号笔和标签标注配置标注名称。
2)盐酸溶液(1mol/L)
用10ml量筒取质量分数为37.5%的浓盐酸(密度=1.19g/ml)8.2ml,倒入100ml容量瓶中,加水至刻度。颠倒5次左右摇匀,用记号笔和标签标注配置标注名称。
小结:
所需实验用品:
牛肉浸膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、氢氧化钠、质量分数为37.5%的浓盐酸。
1架电子天平(精度0.0001g),碱式滴定管、酸式滴定管各1支,pH校正仪,1个高压灭菌锅,1台冰箱。
3根灭菌玻璃棒,2100ml灭菌容量瓶,25-30100ml50ml的灭菌锥形瓶,1只酒精灯,110ml灭菌量筒,11L灭菌烧杯,150ml灭菌烧杯。
若干灭菌纸,5把灭菌药匙,1个洗瓶,1盒火柴,1个三角架,50个无菌平皿,金属小框或玻璃板,线,1套记号笔和标签。
三、实验材料
1、原料
牛肉浸膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、氢氧化钠、质量分数为37.5%的浓盐酸。
2、仪器
1架电子天平(精度0.0001g),碱式滴定管、酸式滴定管各1支,pH校正仪,1个高压灭菌锅,1台冰箱,137℃的温箱,1个计算器。
3、玻璃用具
3根灭菌玻璃棒,2100ml灭菌容量瓶,25-30100ml50ml的灭菌锥形瓶,1只酒精灯,110ml灭菌量筒,11L灭菌烧杯,150ml灭菌烧杯。
4、其他用品
1套记号笔和标签,1支钢笔,50张同样的0.8-1.5m高的桌子或椅子,若干灭菌纸,5把灭菌药匙,1个洗瓶,1盒火柴,1个三角架,50个无菌平皿,金属小框或玻璃板,线
四、实验计划
购置实验所需各种试剂,准备实验所需的所有器材,
做好各试剂仪器高温灭菌工作,配置氢氧化钠和盐酸溶液。
制作普通琼脂平板   
  空气细菌测定
温箱培养24小时
菌落计数
   
结果分析与报告书写