2012年3月
山东中医药大学学报
第36卷第2期
实热证是邪热亢盛、内外俱实的病证。因热邪入侵，里热炽盛，或痰瘀、宿食阻滞所致。症见壮热烦躁、面红目赤、渴喜冷饮、胸痛痰黄、腹痛拒按、大便秘结、小便短赤、舌红苔黄、脉洪数、滑实等。热证时机体代谢功能旺盛，神经、内分泌、代谢等呈功能亢奋状态［1］。乳酸（LA ）、丙酮酸（PA ）、乳酸脱氢酶（LDH ）、琥珀酸脱氢酶（SDH ）是机体三羧酸循环的代谢产物。本实验采用黄连氯仿、乙酸乙酯提取物作用于实热证模型大鼠，测定大鼠LA 、PA 的含量，LDH 、SDH 的活性，探讨黄连氯仿、乙酸乙酯提取物对实热证的作用。1实验材料
1．1药材制备黄连产于四川石柱，经山东中医药大学李峰教授鉴定。味苦，性寒。归心、胃、肝、胆、大肠经，功效清热燥湿、清热泻火、泻火解毒。乙酸乙酯、氯仿提取物（用乙酸乙酯、氯仿对黄连水煎液进行萃取）。按生药2．25g /kg 大鼠体质量的给药量进
行萃取。
实热证模型复制药品制备：精密称取2，4-二硝基苯酚125mg ，加入40mL 生理盐水，滴加5mol /L 的NaO
H 溶液，不断搅拌，待粉末全部溶解，滴加生理盐水定容至50mL ［2］。
1．2仪器及试剂全自动高速冷冻离心机，型号：GL -20A ，湖南离心机厂；WFZ800-D3B 型紫外可见分光光度计，北京瑞利分析仪器公司。考马斯亮兰蛋白测定试剂盒（Lot NO ：20101110），南京建成生物工程研究所；乳酸含量测定试剂盒（Lot NO ：20101124），南京建成生物工程研究所；丙酮酸含量测定试剂盒（Lot NO ：20101125），琥珀酸脱氢酶测定试剂盒（Lot NO ：20101125），南京建成生物工程研究所；2，4-二硝基苯酚，上海华东师范大学化工厂。2实验方法
2．1动物及分组SPF 级Wistar 大鼠，雌雄各半，体质量（200±20）g ，32只，由鲁抗医药集团股份有限公司实验动物中心提供。按体质量平均分成4组，每组8只，雌雄各半，分为空白对照组、模型对照组、氯仿组、乙酸乙酯组。动物室环境为SPF 级，按
黄连氯仿、乙酸乙酯提取物
对实热证模型大鼠LA 、PA 、LDH 、SDH 的影响
刘春蕾1，韩冰冰2，王世军2，张少华2，司惠丽2
（1．山东中医药大学2009年级硕士研究生，山东济南250355；2．山东中医药大学，山东济南250355）［摘要］目的：研究黄连氯仿、乙酸乙酯提取物对实热证模型大鼠乳酸（LA ）、丙酮酸（PA ）
含量、乳酸脱氢酶（LDH ）、琥珀酸脱氢酶（SDH ）活性的影响。方法：采用2，4-二硝基苯酚复制大鼠实热证模型，给药黄连氯仿、乙酸乙酯提取物，分光光度法测定LA 、PA 含量、LDH 、SDH 活性。结果：与空白对照组比较，模型对照组肝组织LA 、PA 含量，LDH 、SDH 活性显著升高（P <0．01）；与模型对照组比较，氯仿组、乙酸乙酯组大鼠血浆LA 、PA 含量、LDH 活性显著降低（P <0．01）。结论：黄连氯仿、乙酸乙酯醇提取物对实热证模型大鼠有作用。
［关键词］黄连；实热证；乳酸；丙酮酸；乳酸脱氢酶；琥珀酸脱氢酶；大鼠［中图分类号］R285．5
［文献标识码］A
［文章编号］1007-659X （2012）02-0144-02
Effect of chloroform extract and acetate extract of rhizome coptidis on LD ，PA ，LDH and SDH of excess -heat syndrome rats LIU Chun -lei 1，HAN Bing -bing 2，WANG Shi -jun 2，ZHANG Shao -hua 2，SI Hui -li 2（1．2009Master Graduate Student of Shandong University of TCM ；2．Shandong University of TCM ）
［Abstract ］Objective ：To study the effects of chloroform extract and acetate extract of rhizome coptidis on the con-tent of lactic acid （LD ），pyruvic acid （PA ）and lactate dehydrogenase （LDH ）
and succinate dehydrogenase （SDH ）in the liver tissue．Methods ：2，4-dinitrophenol was used to establish excess -heat syndrome models．The models were treated by chloroform extract and acetate extract of rhizome coptidis．Using spectrophotometric to determine the con-tent of LD and PA contents and the activities of LDH and SDH．Results ：Compared with the control group ，the con-tents of LD and PA and the activities of LDH and SDH of model control group significantly increased （P ＜0．01）．Compared with model group ，the contents of LD and PA and the activities of LDH of chloroform extract and acetate extract of rhizome coptidis significantly decreased （P ＜0．01）．Conclusion ：Chloroform extract and acetate extract of rhizome coptidis had therapeutic effect on excess -heat syndrome rats．
［Key words ］rhizoma coptidis ；excess－heat syndrome ；lactic acid ；pyruvic acid ；lactate dehydrogenase ；succinate de-hydrogenase ；rat
［收稿日期］2011-05-27
［基金项目］国家重点基础研究发展计划（973计划）课题（编号：2007CB512601）
第36卷第2期
山东中医药大学学报
Vol．36，No．22012年3月JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY OF TCM Mar .2012144
2012年3月第36卷第2期
昼夜节律自然照明，于独立送回风净化笼中饲养，室温22～26℃，相对湿度40%～70%RH，予Co60辐照饲料和酸化纯净水饲喂。
2．2模型及各组大鼠适用性饲养3d，除空白对照组外各组大鼠于背部皮下注射模型复制药（25mg/kg大鼠体质量），1次给药，实热证模型大鼠复制成功［2］。模型复制后0．5h各组按体质量灌胃（10mL/kg）1次给药，空白对照组、模型对照组给生理盐水，氯仿组给黄连氯仿提取物，乙酸乙酯组给黄连乙酸乙酯提取物。
2．3指标检测模型复制后6h，4%水合氯醛对大鼠进行麻醉（1mL/100g），下腔静脉取血5mL，肝素抗凝，低温冷冻离心机，4℃，3000r/min离心15min，取上清液，-20℃储存；取肝脏，用普通匀浆法进行匀浆，与血液用同样的方法离心取上清液，-20℃储存。按照考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、LDH测定试剂盒、PA含量测定试剂盒、LDH试剂盒、SDH试剂盒说明书测定各指标。
2．4统计学处理用SPSS软件对各组数据进行单因素方差分析及组间差异性检验，各组统计资料均以x±s表示。
3结果
3．1各组大鼠血浆LA、PA含量比较见表1。3．2各组大鼠肝组织LA、PA含量比较见表2。3．3各组大鼠血浆LDH、SDH活性比较见表3。4讨论
PA是体内产生的三碳酮酸，是糖酵解途径的最终产物，在细胞浆中还原成乳酸供能，或进入线粒体内氧化生成乙酰辅酶A，进入三羧酸循环，被氧化成二氧化碳和水，完成葡萄糖的有氧氧化供能过程［3］。因此，PA是糖代谢中具有关键作用的中间产物。PA 可通过乙酰辅酶A和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，因此，PA在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用［4］。LDH属于氢转移酶，催化乳酸氧化成PA，该酶存在于动物组织中，在肝脏中活性最高，其次为心脏、骨骼肌、肾脏，在肿瘤组织及白血病细胞中也能检测到［5］。LDH 由酶蛋白和辅酶Ⅰ组成，两者单独存在时，无催化活性，必须同时存在组成全酶才起作用。LDH在各种组织细胞广泛存在。LDH在酵解循环所起的作用是催化LD和PA的可逆转变。氢离子的可逆传递需要辅酶二磷酸吡啶（NAD或NADH）参与。PA在有氧条件下能进一步代谢以生成乙酰辅酶A，后者可以进入三羧酸循环。在缺氧情况下，通过LDH和NADH 的作用，PA则转变成LA［6］。SDH是线粒体的一种标志酶，是连接氧化磷酸化与电子传递的枢纽之一，可为真核细胞线粒体和多种原核细胞需氧和产能的呼吸链提供电子，其活性一般可作为评价三羧酸循环运行程度的指标。
实热证模型复制后，模型对照组大鼠血浆中PA 含量、肝组织LDH活力显著高于空白对照组，说明实热证机体内物质代谢快，能量代谢旺盛。模型复制后0．5h，用苦寒的黄连氯仿、乙酸乙酯溶剂提取物后，大鼠血浆所含的PA、肝组织中LDH活力下降，证实热证机体与机体内部的能量代谢可能有联系。与模型对照组相比，氯仿组、乙酸乙酯组大鼠血浆LA、PA含量，LDH活性均有所降低（P<0．01），表明黄连氯仿、乙酸乙酯提取物对实热证有一定的作用，黄连氯仿、乙酸乙酯提取物所含有的黄连的主要化成分及其作用机制有待进一步研究。乙酸乙酯组血浆PA含量，LDH活力低于空白对照组，可能是由于娇枉过正，其机制也有待于进一步研究。
［参考文献］
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刘春蕾等：黄连氯仿、乙酸乙酯提取物对实热证模型大鼠LA、PA、LDH、SDH的影响
表1各组大鼠血浆LA、PA含量比较（x±s，n=8）
c/mmol·L-1
LA PA
空白对照组  3.21±0.840.35±0.10
模型对照组  4.72±0.60△0.45±0.11△
氯仿组  2.62±0.61**0.25±0.09**张少华
乙酸乙酯组  2.66±0.94**0.24±0.06**
与空白对照组比较△P<0.05，与模型对照组比较**P<0.01
表2各组大鼠肝组织LA、PA含量比较（x±s，n=8）
c/mmol·L-1
LA PA
空白对照组0.26±0.060.021±0.0093
模型对照组0.39±0.06△△0.038±0.017△△
氯仿组0.39±0.180.026±0.010*
乙酸乙酯组0.32±0.080.033±0.013
与空白对照组比较△△P<0.01，与模型对照组比较*P<0.05
表3各组大鼠血浆LDH、SDH活性比较（x±s，n=8）
ρ/U·gprot-1
LDH SDH
空白对照组26.14±3.990.49±0.24
模型对照组34.71±8.28△△0.78±0.20△△
氯仿组28.36±8.65**0.39±0.18
乙酸乙酯组25.28±3.48**0.32±0.08
与空白对照组比较△△P<0.01，与模型对照组比较
**P<0.01
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