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樊琼
（锦州市动物疫病预防控制中心 辽宁锦州 121000）
摘要：新城疫是养禽生产中的常见病、多发病，对鸡的影响比较大，传统上我们一般通过临床表现和剖检变化对其做出诊断，近年来随着科技的不断发展，实时荧光定量PCR技术也为大家所熟知和掌握，本文就一例采用实时荧光定量PCR 技术诊断新城疫的过程进行介绍。关键词：新城疫；PCR；诊断
日趋扩大，饲养管理一旦不当，就会造成猪类疾病的发生与流行，不仅在一定程度上影响国内畜牧业健康可持续发展，而且某些人畜共患病也会损害人们的身体健康。
2）链球菌广泛存在于自然界中，当饲养管理不善、气温骤变、猪舍
通风不良等因素下可诱发本病的发生。日常应加强管理，猪舍空气要清新，控制饲养密度，保证日粮营养均衡，严格猪场消毒制度；同时，采用猪链球菌灭活疫苗进行免疫接种，不管猪只大小统一2mL/头，再使用猪链球菌灭活疫苗2mL/头
于免疫14d 后进行第二次免疫。
3）猪附红细胞体病的主要传染源是病猪和隐性感染猪，传播途径有蚊蝇等吸血昆虫叮咬或猪只互舔伤口等，临床上可用除虫菊酯类药物驱杀吸血昆虫，使用驱虫药定期驱杀猪体内外的寄生虫。■
新城疫（ ND）又称亚洲鸡瘟，主要侵害鸡、火鸡、野禽及观赏鸟类，由鸡新城疫病毒（ NDV）引起，死亡率高，对养鸡业危害严重。近日在锦州某一蛋鸡规模场，50日龄的鸡突然出现呼吸困难，采食量下降，个别出现运动失调等临床症状。对其中3只死亡鸡只进行了剖检，发现眼结膜出血；脾脏萎缩，是正常脾的1/2大小；卵泡变形、出血、菜花样变；腺胃乳头靠近腺胃肌胃相接处出血，肠道滤泡肿胀，肠道黏膜有密集出血斑；盲肠扁桃体萎缩出血；泄殖腔有轻度出血。采集3只病死鸡的组织病料，对同未发病的2只鸡采集了喉、肛拭子，用于新城疫病原学检测。
1 材料与方法
1.1 病料
无菌采集新鲜脏器（喉头、
气管、心、肝、脾、肺、肾、小肠）各2g 并加入5mL PBS（磷酸缓冲溶液）于研磨器中充分研磨，离心取上清液转入无菌离心管中保存备用。喉、肛拭子可以直接用于实验。1.2 主要仪器
II 级生物安全柜（1300系列A2型，Thermo Scientific）；荧光定量PCR 仪（IQ5，美国伯乐）；台式冷冻高速离心机（Sorvall Stratos，Thermo）。1.3 实验方法
按照离心柱式提取法提取核酸，严格按照凯杰生物工程（深圳）有限公司新城疫病毒荧光RT-PCR 检测试剂盒的说明书进行操作。加入制备的RNA 溶液10uL，反应体系25uL。
2 结果
具体结果见图1。从图1中可以看出，病死鸡的3份样品均为阳性，2份健康鸡全为阴性。说明病死鸡患有新城疫。
3 小结
3.1 实时荧光定量PCR技术的应用现状
随着动物疫病检测技术的不断发展，原有的检测手段已不能满足现代疫病诊断的需要，PCR 技术也渐渐脱掉了那层“神秘的面纱”，尤其是近几年来基层兽医队伍不断地发展、壮大，从业人员业务素质也在逐年提高，原来的“高精尖”的诊断技术逐步走进了日常的检测工作中。PCR 技术具有高度的灵敏性、特异性和精确性，而且快速、高效、灵活、易于操作，尤其是实
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实践案例
52 中国动物保健 | 2018.08
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时荧光定量PCR 技术与常规PCR 相比具有特异性更强、自动化程度更高等优点，目前已得到广泛应用。3.2 实时荧光定量PCR的结果判定
参照凯杰生物工程（深圳）有限公司新城疫病毒荧光RT-PCR 检测试剂盒的说明书对检测结果进行判定。
3.2.1 质控标准 阴性对照CT 值应等于none；阳性对照CT 值应小于等于28.0。温华
3.2.2 结果判断 读取数据时基准线调至与阴性对照重合，阴性CT 值为none，阳性CT 值为16.89，实验结果有效。图1中3、4、5样本对应的CT 值分别为17.62、
18.53、19.17，判定为阳性；7、8样本对应的CT 值均为none，判定为阴性。■
图1 RT-PCR 结果
注：1 基准线；2 标准阳性血清；3、4、5 病死鸡样品；6 标准阴性血清；7、8 喉、肛拭子样品。
马链球菌兽疫亚种感染导致母马慢性子宫内膜炎的病因分析
曹雷，温华梅，孙鹏
（山东畜牧兽医职业学院 山东潍坊 261061）
摘要：本文分析了两起由马链球菌兽疫亚种感染导致母马慢性子宫内膜炎的病例。基于马链球菌兽疫亚种感染的特点，通过血常规和生化检验等多项指标的检测，出马健康存在的深层次问题，为防控马术俱乐部繁殖母马出现类似病例提供参考。
关键词：马；子宫内膜炎；链球菌；体健康
运动马饲养管理的要求很高，马术俱乐部养殖的运动马也非常的名贵，如有患病马匹出现，需要彻底分析所养马的健康情况，出体可能存在的问题，预防控制类似疾病再次发生。本文通过对两起母马子宫内膜炎病例原发性原因的
查，对所养殖的马匹可能存在的问题进行了深入的分析。
1 发病表现
2017年4月15日，某马术俱乐部马场存栏约60匹繁殖母马，2匹母马（一匹6岁，标号1；一匹7岁，
标号2）外阴有大量类似“淘米水”样带有泡沫的分泌物。询问饲养员，这种情况已经出现过3次，因在发情季节误认为是发情。该马场环境、设施条件优良，巡视马匹整体状况良好，调查饲养管理各方面措施未发现异常。
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