(19)中华人民共和国国家知识产权局
郑恺和angelababy
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号 CN 102876700 A
(43)申请公布日 2013.01.16
(21)申请号 CN201210375051.3
(22)申请日 2012.09.27
(71)申请人 西北农林科技大学
    地址 712100 陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号
(72)发明人 昝林森 杨宁 成功 王洪宝
(74)专利代理机构 西安恒泰知识产权代理事务所
    代理人 李郑建
(51)Int.CI
      C12N15/65
      C12N15/63
      C12N5/10
      A01K67/027
                                                                  权利要求说明书 说明书 幅图
(54)发明名称
      PiggyBac转座子介导的肌肉特异表达A-FABP通用载体构建
(57)摘要
      本发明公开了一种PiggyBac转座子介导的肌肉特异表达A-FABP通用载体的构建方法。全基因合成一段包括PiggyBac转座子转座必需的PB5’端与PB3’端的DNA序列，并且在PB5’末端和PB3’末端中间引入多克隆位点。以pSP72商业化质粒为基础完成PiggyBac骨架载体构建。再将LoxP锚定的新霉素抗性基因、绿荧光蛋白基因（LoxP-NEO-LoxP-EGFP）以及牛α-actin启动子和牛A-FABP基因克隆到PiggyBac骨架载体多克隆位点中，最终构建完成PiggyBac-NEO-EGFP-actin-AFABP通用型表达载体。通过分离并转染牛成纤维细胞，表明通过上述方法构建的通用型表达载体可在成纤维细胞中实现高效转座，在很大程度上提高了目的基因的整合效率。可用于制备提高肉中多不饱和脂肪酸、增加瘦肉率等多种用途，具有很高的通用性。
法律状态
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
权 利 要 求 说 明 书
1.一种PiggyBac转座子介导的肌肉特异表达A-FABP通用载体的构建            方法，其特征在于，通过全基因合成PiggyBac转座子载体转座所发生转座            必需的PB5'碱基序列和PB3'碱基序列，并在两序列中间引入多克隆位点            FseI、MluI、PacI、NotI、HindIII、BamHI、BstBI和AscI；在商业化质粒pSP72            基础上完成PiggyBac转座子骨架载体构建；再将LoxP锚定的新霉素抗性基            因（Neomycine/NEO）和绿荧光蛋白基因（EGFP）以及α-肌动蛋白启动            子（α-actin promoter）和牛A-FABP基因克隆到多克隆位点FseI、MluI、PacI、            NotI、HindIII、BamHI、BstBI和AscI中，最终构建完成            PiggyBac-NEO-EGFP-actin-AFABP通用型表达载体。           
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PB5’端和PB3’端碱基            序列为：           
PB5’端碱基序列：           
CCCTAGAAAGATAGTCTGCGTAAAATTGACGCATGCATTCTTGAA           
ATATTGCTCTCTCTTTCTAAATAGCGCGAATCCGTCGCTGTGCATTTAGG           
ACATCTCAGTCGCCGCTTGGAGCTCCCGTGAGGCGTGCTTGTCAATGC           
GGTAAGTGTCACTGATTTTGAACTATAACGACCGCGTGAGTCAAAATG           
ACGCATGATTATCTTTTACGTGACTTTTAAGATTTAACTCATACGATAATT           
ATATTGTTATTTCATGTTCTACTTACGTGATAACTTATTATATATATATTTTC           
TTGTTATAGATATCGTGACTAATATATAATAAAATGGGTAGTTCTTTAGAC           
GATGAGCATATCCTCTCTGCTCTTCTGCAAAGCGATGACGAGCTTGTTG           
GTGAGGATTCTGACAGTGAAATATCAGATCACGTAAGTGAAGATGACG           
TCCAGAGCGATACAGAAGAAGCGTTTATAGATGAGGTACATGAAGTGC           
AGCCAACGTCAAGCGGTAGTGAAATATTAGACGAACAAAATGTTATTG           
AACAACCAGGTTCTTCATTGGCTTCTAACAGAATCTTGACCTTGCCACA           
GAGGACTATTAGAGGTAAGAATAAACATTGTTGGTCAACTTCAAAGTC           
CACGAGGCGTAGCCGAGTCTCTGCACTGAACATTGTCAGAT；           
PB3’端碱基序列：           
CCCTAGAAAGATAATCATATTGTGACGTACGTTAAAGATAATCATG           
CGTAAAATTGACGCATGTGTTTTATCGGTCTGTATATCGAGGTTTATTTAT           
TAATTTGAATAGATATTAAGTTTTATTATATTTACACTTACATACTAATAAT           
AAATTCAACAAACAATTTATTTATGTTTATTTATTTATTAAAAAAAAACA           
AAAACTCAAAATTTCTTCTATAAAGTAACAAAACTTTTAAACATTCTCT           
CTTTTACAAAAATAAACTTATTTTGTACTTTAAAAACAGTCATGTTGTAT           
TATAAAATAAGTAATTAGCTTAACTTATACATAATAGAAACAAATTATAC           
TTATTAGTCAGTCAGAAACAACTTTGGCACATATCAATATTATGCTCTCG           
ACAAATAACTTTTTTGCATTTTTTGCACGATGCATTTGCCTTTCGCCTTA           
TTTTAGAGGGGCAGTAAGTACAGTAAGTACGTTTTTTCATTACTGGCTC           
TTCAGTACTGTCATCTGATGTACCAGGCACTTCATTTGGCAAAATATTAG