杜云锋2杜向红1*，张伟2刘伟2，陈宁2（2河南省人民医院，河南郑州450025；2.河南中医药大学分析测试中心，河南郑州455245）
摘要：目的优化抗毒合剂的制备工艺，为其提供稳定可靠的生产参数。方法以绿原酸含量及浸膏得率为考察指标，采用正交设计对水提工艺的提取时间、加水量、提取次数进行优选；以绿原酸含量为指标，考察浓缩及醇沉工艺；再考察矫味剂、抑菌剂、pH值等对成型工艺的影响。结果抗毒合剂最佳制备工艺为加入12倍处方量水，提取煎煮2次,1次3h，浓缩液相对密度为215，乙醇醇沉体积浓度为62%，蔗糖、苯甲酸钠用量及pH值分别为15%、2.2%、5〜6。结论优选的抗毒合剂制备工艺稳定可行，重复性好，为抗毒合剂的开发提供了参考。
关键词：抗毒合剂；制备工艺；绿原酸；正交试验
中图分类号：R94文献标识码：A文章编号：10062765（222。）-12-0025-04
Study on Prcparcticn Prccess of Anti Toxin Mixture
DU Yun-fang5,DU Xicng-Song1*,ZHANG Wei5,LIU Wei2,CHEN Ning2(5.The People's Hospital of Henan Prcvi n ce,Zhe n gzhou455005,Chi na；2.He n an Un iversity of Treditio n al Chin e se Medici n
e,Zhe n gzhou 450046,China)
ABSTRACT：OBJECTIVE To optimize the pepdetioo of Anti Toxin Mixtue.METHODS With thc cooteui of chloeoeuic aciC ant yieU of de6x^100ss evalgatioo indices,watce idition,extractioo time ant extractioo times ss inOgeucina factorn,the dqaeons extractioo process wss optimizep by01100X0X30test.With the conteut of cOlorooeutc AciO ss evalgatiou innices,thc copccutratiop process ant alcoPol deposition process were investigateU.Ant thc
of tasfe masPina ayeuf,pH valge ant aaeuf amopnfs on the foaiina process were stugieU ss w U J RESULTS Optimum Uchnolopy of pronacina Anfi Toxin mixtue wss ss OP ows:txtecteU20x1；with5times the amonnf of watee foe3h eact time,the relative deusity of the conceutrafe wss1.15,the conceutration of ethanol precipitation wss66%,the0x001foaiina process wss oPtaineU at spcrosp,soPium beuzoate dmoniVo ant pH valge of15%,2.2%ant5-0,respectivety.CONCLUSION The optimizeU pecessina Uchnolopy of Anti Toxin mixtge pepdation is stdCle,ant epenacmle,it can proviOe a refereuco Oa developmeut of Anti Toxin mixtge Pepdation.
KEYWORDS:Anft Toxin Mixture；Preparatiov process;Chlorooeuic aciO;Extractioo tecanoloyy
抗毒合剂处方来源于河南省人民医院儿科著名专家罗致桓主任临床经验方，该方由金银花、连翘、粉
葛、大青叶、板蓝根、柴胡组成，具有清热解毒，凉血消肿之功效；临床上主要用于上呼吸道感染及感冒发热、扁桃体炎、腮腺炎等⑴。原方汤剂在本院使用十几年，临床疗效显著，但具有提取麻烦、体积大、口感不佳、不易接受等缺点。中药合剂由汤剂改良而来，既保持了汤剂原有的优点与疗效，又有固定的工艺方法，可成批生产，应用方便，故拟将本方制成合剂〔〕。经查阅相关文献t3-4]，金银花、连翘为方中君药，有机酸类（异绿原酸、
作者简介：杜云锋，男（1983-）。学历：硕士。职称：主管药师。研究方向：医院制剂及质量控制研究。
通讯作者：杜向红，女（1954-）。学历：本科。职称：主任药师。研究方向：中药研究。
基金项目：河南省科技厅重点科技攻关项目（122122512069）绿原酸、咖啡酸等）及连翘酯苷、连翘苷、芦丁等为其主要活性成分，具有极强的抗病毒、抗生理性氧化、抗菌等多种活性，粉葛中主要成分为葛根素，他们都具有良好的水溶性。故本试验采用水提醇沉法⑺5〕，通过正交设计，以绿原酸含量和浸膏率的综合评分为评价指标，优化水提工艺，并对其浓缩工艺和成型工艺进行考察，为该制剂的临床使用、批次生产提供科学依据。
1材料
1.3仪器AgPentl269高效液相谱仪（四元梯度泵、DAD 检测器，美国安捷伦科技有限公司），BS014S型电子天平（北京赛多利斯天平公司）,METTLER AE224十万分之一天平、FA2244A万分之一天平（上海精科天美科学仪器有限公司），HH-0型水浴锅（巩义市英峪予华仪器厂），KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）J-IO-B型石英自动双重纯水蒸馏器（江苏大地仪器厂），DHGB453A型电热恒
-5-
温鼓风干燥箱（上海医用恒温设备厂），PZ-D-5比重计（上海平轩科技仪器有限公司），PHS-3C酸度计（上海精密仪器仪表有限公司）。
1.2试药绿原酸对照品（批号：4753B04^1，中国食品药品检定研究院）；乙腈为谱纯；娃哈哈纯净水；其他试剂为分析纯。所用饮片均购于禹州药材市场，并经河南中医药大学董诚明教授鉴定，均符合2015版《中华人民共和国药典》一部各药材项下规定标准。
2方法与结果
2.3水提工艺优选以绿原酸含量和浸膏率的综合评分作为评价指标，对影响提取效果的加水量、提取时间和提取次数进行优选，采用L。"4）正交表进行试验。因素水平（见表
2。
表5因素水平表
水平-
提取时间（h）力口水量（倍）提取次数（次）2252
22202
55225
2.21样品制备：按处方比例，分别称取连翘、金银花各12 e，大青叶22e，板蓝根15y，柴胡、粉葛各5y，平行称取饮片9份，按正交试验表-进行提取、滤液浓缩、醇沉，过滤，回收乙醇，并将药液浓缩至相对密度为5.19（84t），备用。
读书演讲稿六年级2.5.2浸膏率的测定：精密吸取“2.5.5”项下的5。mL浓缩液3份，分别置3个干燥至恒重的蒸发皿中，水浴浓缩至干后444t干燥5h，于干燥器内冷却至室温，迅速精密称定，计算出干浸膏率。
2.5.3绿原酸含量测定
2. 5.
3.5谱条件:Agilent XDB-C[2谱柱（I—x
4.6mm,5 ^m）；流动相为乙腈0.5%磷酸水溶液（13：87）；柱温：25t；波长：327nm；进样量J O.O|±L；流速：1mL-mOT5。按绿原酸计算理论塔板数应不低于5000。
2.5.
3.2供试品溶液的制备：精密吸取“2.21”项下浓缩液1mL，至5。mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度,0.45吧1微孔滤膜滤过，摇匀，即得。
2.1.
3.3对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，置于容量瓶中，加50%甲醇溶液，定容，制成绿原酸为80隧-mL-5溶液，即得。
2.2
3.4线性关系考察：精密吸取对照品溶液适量，分别配成浓度为A、。、。、。、。隧•mL"的绿原酸对
照品溶液，精密吸取各对照品溶液2。^L进样，测定峰面积，以对照品进样量（X，m U）为横坐标，峰面积积分值（丫）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程:Y=&6093X-0.4325,r=09999，结果表明绿原酸在4~80MU•mL"浓度范围内呈良好的线性关系。
2. 1.
3.5精密度试验：精密吸取对照品溶液，按“2.1.3.1”项下谱条件进样，记录绿原酸峰面积并计算RSD值。结果RSD为025%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.5.
3.6稳定性试验：精密吸取供试品溶液，分别于0h,2 h,4h,6h,8h,12h,24h进样，测定绿原酸峰面积，计算RSD •6•值。结果RSD为1.54%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2.5.
3.5重复性试验：取同一供试品溶液，按“2.23.2”项下制备方法平行制备6份，并按“2.23.1”项下谱条件进样，记录绿原酸峰面积并计算RSD值。RSD为281%，表明该方法重复性良好。
2.2
3.3加样回收率试验：精密吸取已知含量的同一批样品1mL，用50%甲醇定容至104mL，共6份，分别精密加入一定量的绿原酸对照品，制备样品溶液，精密吸取14^L，注入液相谱仪，按“2.23.1”项下谱条件测定。结果（见表2）。表2加样回收率试验结果（a=6）
名称
页码怎么取消取样量
（mL）
样品
含量
（my）
加入量测得量
（my）（my）
回收率
（%）
平均
回收率
（%）
RSD
(%)绿原酸2 2.95552355 1.919899.51
2 2.95552355 1.932696.22
2 2.9555235523522495.4295.151311
2 2.95552355 1.933996366
22355622355 1.927596.3
2235562235513914699311
2.2
3.5样品中绿原酸含量测定：精密吸取供试品溶液各14^L，按“2.23.1”项下的谱条件，测定。结果（见表3）。
2.24试验结果采用综合评分法，正交试验结果（见表3），方差分析结果（见表4）。
表5试验设计与结果
序号A B C D
绿原酸得膏率综合评
量(%)(%)分（%）11115 2.506612.721252.89 21222 2.344422.25586.96 315550.739519.161166396 421250.692215.149269.34
52255236166153466264.05 625120.002512.263555.99
651520.840612.976586.34 552150.465622.911265.12
955250.978915.868094361 K1216.5520.5616225212.05
K156.56214.5525121226.51
K24432122666222.55210.06
极差（R）551.8656651126.256.71
注：绿原酸含量评分=（绿原酸含量/最大绿原酸含量x76%）x 120%；得膏率评分=（得膏率/最大得膏率x35%）x120%；综合评分=绿原酸含量评分+得膏率评分
表4方差分析
方差
来源
派出所周末上班吗离均差平方和自由度方差F值P值A551.862265.9493216<0.05 B56.65222.3303952
C1126.152SH.09203209<0.01 D56.76222.86
注:F91(2,2)=942,F^155(2,2)=19.50
方差分析结果表明，提取时间和提取次数有显著差异，加水量因素无显著差异，综合考虑节约成本及生产效率等各方面因素，最终确定最佳提取工艺为A3B3C0，即每次加水2倍量，提取煎煮2次，次3i
0.4J优选工艺验证试验与结果：按处方比例，称取连翘、金银花各10h，大青叶22a，板蓝根14a，粉葛、柴胡各6g，平行3份，加水12倍量，回流提取2次,1次3h，合并提取液，浓缩，加95%乙醇至含醇量66%，醇沉22h，回收乙醇，定容至50mL，即为供试品溶液。取供试品溶液1mL加59%甲醇定容至50mL容量瓶中,0.45|±m微孔滤膜滤过，取10.0|±L进样。利用回归方程计算出绿原酸的含量。验证试验结果表明，该工艺条件合理，稳定可行。结果(见表5)
表5验证试验结果(n=3)
序号绿原酸量
(%)
浸膏量
(%)
综合评分
(%)
平均分
(%)
17512415.467192.629459
20.996914.579990.63
34010414.45929422
2.2浓缩工艺的考察按处方比例，取连翘、金银花各19a，大青叶20a，板蓝根14a，粉葛、柴胡各6a，加水1倍量，提取2次,1次3h，过滤，合并滤液，将滤液平分成3份，分别浓缩至相对密度约为714、715、724(84结果表明，当提取液浓缩至约420(1mL含生药材0.J a,80t)时，浓缩液出现挂壁现象，且流动性差，无法准确测定相对密度，故确定提取液的浓缩限度为44-1.15(84t)。结果(见表6)
表6相对密度与浓缩状态
相对密度浓缩状态
1110较粘稠
1119粘稠
1120粘稠并挂壁
2.3醇沉浓度的考察取相对密度约为4IO、.15的浓缩液各3份，醇沉，制成含醇量分别为体积分数SO%,。％、70%，搅拌，静置22h，过滤，回收乙醇，加水定容至25mL，即得储备液。
0.J.J供试品制备：精密吸取上述6种储备液1mL，至59 mL量瓶中，加59%甲醇至刻度，摇匀,045pn滤膜滤过，即得供试品溶液。
2.3,2含量测定：精密吸取“2.
3.1”项下的供试品溶液12 pL，按“2.43,1”项下谱条件测定绿原酸含量，即得。结果显示，以绿原酸含量为指标进行考察，当相对密度约为415 (80t)，含醇量达到66%时，绿原酸含量较高，为最佳醇沉工艺。结果(见表5)
2.3.3验证试验与结果：按最佳提取工艺提取，并按上述方法醇沉，采用“2.43.1”项下谱条件进行验证，绿原酸含量分别为438mg•mL-1、432mg•mL一1、435mg•mL-1o验证结果与最佳醇沉试验结果相近，表明该醇沉工艺方法稳定可行。表5醇沉浓度考察结果
相对密度醇沉浓度(％)绿原酸含量(ma•mL"1) 111090419
601124
501119
1119901122
601141
501126
2.4成型工艺的考察
2.4.1矫味剂用量考察：抗毒合剂提取物具有一定的苦、涩味，患者服用时难易接受，需添加一定量的矫味剂，以增加患者依从性。为此本制剂选用具有《中华人民共和国药典》标准的蔗糖为矫味剂。以口感为指标，取抗毒合剂样品50mL，平分成5份，按表8的剂量加入蔗糖，搅拌至溶解，静置，观察溶液状态，并尝其口感，结果表明加入量为制成量的15%时，口感得到明显改善，故确定蔗糖用量为制成量的15%。
表6蔗糖用量考察
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蔗糖量
(a)
药液中蔗糖
浓度(%)
pH值口感药液状态100419苦、涩澄清
20199416苦澄清3110419较苦澄清
411919416微甜澄清
9220415微甜澄清
0.4.2抑菌剂种类及用量的考察：为了保证临床制剂的质量，防止微生物的繁殖，应添加适量的抑菌剂。故对常用的几种抑菌剂进行筛选。结果表明，以苯甲酸钠和山梨酸作为抑菌剂效果优于苯甲酸，故采用00%的苯甲酸钠作为抑菌剂，且制剂符合制剂通则中合剂使用限度和抑菌效力的规定。结果(见表9)。
表9不同抑菌剂的比较结果
抑菌剂种类苯甲酸钠苯甲酸山梨酸
抑菌剂用量(％)012012012外观性状
久置后红棕
澄清液体
久置后浑浊
久置后红棕
澄清液体0.4.3pH值的考察:p H值直接影响制剂的外观形状及有效成分的稳定性，为了保证制剂的质量及稳定性，故对pH值进行考察，经测定本品的pH值约为4.3，分别用0.1moi•L-1 HC1和01mol•L-NaOH溶液调节其pH值为4.0、4.5、5.0、5.5、6.O、.0，静置22h及常温放置3个月，观察溶液的澄清度。结果表明,pH值范围宜在5,0~6.0o结果(见表10)。
表19不同pH值的比较结果
pH值24h后澄清度3个月后澄清度
410浑浊浑浊，有沉淀
419澄清较浑浊，少量沉淀
910澄清澄清
919澄清澄清
610澄清澄清
510较浑浊浑浊，有沉淀
-5•
2.3中试试验与结果
0.9.1试验方法：按12倍处方量取连翘1200g、金银花1200
a、大青叶2000a、板蓝根1304g、粉葛800a、柴胡800g，均依照上文已优选的最佳制备工艺制备抗
毒合剂样品，分别测定样品中绿原酸的含量及浸膏得率，并观察其澄明度，结果显示绿原酸平均含量为4 467mg•mL"，浸膏得率平均14.9931%，平均综合得分为9479%，合剂澄清，均符合质量标准要求且制剂工艺稳定可行。那英为什么退出中国好声音
2.5.2检查：参照2215版《中华人民共和国药典》附录I J 合剂项下规定，对中试样品进行检查，结果均符合相关规定。结果表明，该工艺稳定可行。
3讨论
抗毒合剂为复方制剂，临床上主要用于上呼吸道感染及感冒发热、扁桃体炎、腮腺炎等。李丽芳等⑺曾应用抗毒合剂上呼吸道感染患儿100例研究，结果表明，抗毒合剂在上呼吸道感染中疗效显著，有效率达94%，不仅对多数病毒感染有效，同时对细菌感染或合并细菌感染的病例均有效的药物，从而减少了临床上抗生素的滥用。但中药复方制剂种类繁多，成分复杂，制备方法科学与否直接影响其临床疗效，探索研究该汤剂的制备工艺，是保证抗毒合剂质量的重要方法。
方中金银花主要成分有异绿原酸、绿原酸、金银花皂苷、木犀草苷等，具有广谱抗菌、解热抗炎、抗病毒、降脂、利胆保肝等作用⑻。连翘含有的连翘苷、芦丁、连翘酯苷等成分；具有极强的抗病毒、抗菌、抗氧化等多种活性⑼。大青叶含有喹唑酮类、吲哚类、芥子苷类化合物等；具有抗内毒素、抗病原微生物、增强免疫功能、抗炎等作用〔回。与功能主治及现代药理作用相关的化学成分都具有良
好的水溶性，宜采用水提法。经查阅文献及多次试验显示111■10］，金银花中绿原酸含量测定方法成熟，可满足提取工艺考察的需求，而浸膏得率能侧面反映其他药材的提取效率，故本研究以绿原酸含量和浸膏得率的综合评分作为评价指标。
合剂通常选用蜂蜜、蔗糖或甜菊苷等作为矫味剂。矫味剂的类型及用量直接影响矫味作用及成品相对密度。蜂蜜由于产地不同使其质量存在较大差异，而甜菊苷会在体内引起生理作用，从矫味效果及经济性考虑，故采用蔗糖为矫味剂。
实验结果表明，抗毒合剂最佳制备工艺为：金银花、柴胡、大青叶、板蓝根、柴胡、粉葛加入14倍处方量水，提取煎煮0次，次3h，浓缩液相对密度为415，乙醇醇沉体积浓度为60%，蔗糖、苯甲酸钠用量及pH值分别为15%、0.0%、~6。经中试验证该工艺合理，稳定可行，可用于抗毒合剂的制备
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〔12〕刘刚，王海涛，赵淼，等.HPLC法测定双黄连口服液中绿原酸和黄苓苷的含量〔〕•解放军药学学报,2097,3(5)：299V04〔3〕李智勇，王洛临，长建军，等•中风复元合剂的制备工艺研究〔〕•广西中医药,016,1(5)：65V9.
正交试验法优选杜仲健骨丸的制备工艺研究
许慧春，杨真真，周晓兰(福建中医药大学附属泉州市正骨医院中药制剂室，福建泉州322000)
摘要：目的优选并确立杜仲健骨丸的最佳制备工艺。方法以杜仲健骨丸的溶散时限、水分为考察指标，采用L9(34)正交试验法对丸剂制备过程中的药/蜜比例(A)、烘干温度(B)、烘干时间(C)3个因素进行优选研究。结果杜仲健骨丸的最佳制备工艺：选择药/蜜比例为0.3进行制软材，制成的丸剂烘干32h，温度75t。结论该制备工艺科学合理，重现性好，为制备杜仲健骨丸的最佳工艺。
关键词：制备工艺；正交试验；优选；溶散时限
如何淘宝网开店中图分类号：R94文献标识码：A文章编号：1006-5755(2020)V2V006V3
作者简介；许慧春，女(1963-)。毕业于福建中医药大学。职称：主管中药师。从事专业：中药制剂
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