实验室常见的灭菌消毒⽅法⼤全
⼀、消毒和灭菌的区别
1、消毒(disinfection in hospital):杀灭或消除医院环境中媒介物上污染的病原微⽣物的过程.
2、灭菌(sterilization):杀灭或去除外环境中媒介物携带的⼀切微⽣物的过程.包括致病微⽣物和⾮致病微⽣物,也包括细菌芽胞和真菌孢⼦.灭菌是个绝对的概念,灭菌后物品必须是完全⽆菌的.即灭菌保证⽔平为106.
⼆、⾼温灭菌法
⾼温灭菌法是利⽤⾼温使微⽣物的蛋⽩质及酶发⽣凝固或变性⽽死亡,是应⽤最⼴泛且有效的灭菌⽅法。主要⽤于器械、容器、试剂等灭菌。
(⼀)⾼压蒸⽓灭菌法
图为实验室常⽤的⾼压灭菌锅(右图来⾃《微⽣物实验》⼀书)
⽤⾼温加⾼压灭菌,不仅可杀死⼀般的细菌,对细菌芽胞也有杀灭效果,是最可靠、应⽤最普遍的物理灭菌法。主要⽤于能耐⾼温的物品,如⾦属器械、玻璃、橡胶、耐⾼温塑料制品及试剂的灭菌。⾼压蒸⽓灭菌器的类型和样式较多,如:①下排⽓式压⼒蒸⽓灭菌器是普遍应⽤的灭菌设备,压⼒升⾄102.9kPa,温度达121~126℃,维持20~30分钟,可达到灭菌⽬的。②脉动真空压⼒蒸⽓灭菌器已成为⽬前最先进的灭菌设备。灭菌条件要求:蒸⽓压⼒205.8kPa,温度达132℃以上并维持10分钟,即可杀死包括具有顽强抵抗⼒的细菌芽胞在内的⼀切微⽣物。
湿热灭菌是⽬前实验室使⽤最为⼴泛,灭菌效果最佳的⽅法。⽬前湿热灭菌的仪器技术上也⾮常成熟,安全系数较⾼。
⾼压蒸⽓灭菌的注意事项:
包裹的物品不宜太⼤,⼀般应⼩于30cm×30cm×50cm,⼤于该尺⼨需要酌情延长灭菌时间;
1.⾼压锅内的包裹不要排得太密,以免妨碍蒸⽓透⼊,影响灭菌效果;
2.对塑料制品不宜放置过于拥挤,以免发⽣形变;
3.压⼒、温度和时间达到要求时,指⽰带上和化学指⽰剂即应出现已灭菌的⾊泽或状态;
qq空白头像4.锐性器械,如⼑、剪不宜⽤此法灭菌,以免变钝;
5.瓶装液体灭菌时,如有塑料瓶盖要适当旋松瓶盖,并⽤⽜⽪纸或纱布包扎瓶⼝;如有橡⽪塞时,应插⼊针头排⽓,切记要保持瓶内外的连通,防⽌⾼温膨胀爆裂;
记要保持瓶内外的连通,防⽌⾼温膨胀爆裂;
最便宜的宝马6.注明灭菌⽇期和物品保存时限,⼀般可保留1~2周;
7.应有专⼈负责,每次灭菌前,应检查安全阀的性能,以防压⼒过⾼发⽣爆炸,保证安全使⽤。
(⼆)⼲热灭菌法
灭菌条件为:160℃维持2⼩时;170℃维持1⼩时;180℃维持30分钟;⾼温下可达灭菌要求。适⽤于易被湿热损坏和在⼲燥条件下使⽤更⽅便的物品(如⾦属、玻璃、陶瓷及凡⼠林纱布条等)灭菌。由于其对烤箱要严格要求(国内产的烘箱质量都有点悬),且⼤功率、⾼温下危险系数较⼤,⼀般不建议使⽤!特殊情况下,如需要灭活器械、容器中对于温度超级稳定的RNase时,才考虑使⽤(其实也可以DEPC预处理器械、容器、溶剂等,然后湿热灭菌!)。
⼲热灭菌法的注意事项:
1.对灭菌对象的理化性质有⼀定了解,明确对象在⾼温下的稳定性;
2.对设备的情况、参数有清醒认识,了解设备的温度设计上限;
3.专项供电,确保接⼊电路⾜够负荷;
4.灭菌过程中,相关⼈员要实时在岗监管,不得离岗,如遇特发情况及时切断电源!
三、过滤除菌法
读书故事过滤除菌法(Sterilization byfiltration)是⽤物理阻留的⽅法将液体或空⽓的细菌除去,以达到⽆菌⽬的。常⽤于对热不稳定液体试剂的灭菌。⼀般来说孔径为0.22µm的微滤膜即可有效地去除微⽣物达到
除菌的⽬的,但该孔径下⽆法去除体积极⼩的⽀原体或病毒颗粒。因此如果需要去除这些物体,就需要使⽤孔径更⼩的纳滤膜(孔径可达20 -50nm )。
由于滤膜孔径的⼤⼩和过滤的流速呈反⽐,因此我们通常在⼩孔径滤膜之前使⽤⼤孔径的滤膜进⾏预过滤,从⽽防⽌微孔被过早的堵塞,保证过滤通畅进⾏,进⽽获得更⾼的得率。
在过滤除菌过程中要求过滤装置和滤膜⾃⾝必须⽆菌。因此我们可以选择购买已经⽆菌预处理的⼀次性使⽤装置(如Millipore的⼀次性针头滤器),也可以选择⾃⾏⽆菌处理,⽬前市售的滤膜通常可以采⽤⾼压灭菌法除菌。
Millipore的⼀次性针头滤器),也可以选择⾃⾏⽆菌处理,⽬前市售的滤膜通常可以采⽤⾼压灭菌法除菌。
注意事项:
在正式过滤前,必须进⾏过滤系统的密闭性和滤膜的完整性测试。过滤过程要在等级A的洁净室内进⾏(通常可在超净台完成)。
四、紫外线灭菌
紫外线的定义是波长在10纳⽶到400纳⽶之间的电磁辐射。不过在实际应⽤中,使⽤的波长⼀般在100纳⽶以上。波长在315到409纳⽶之间的UVA通常可以把⽪肤晒⿊,波长280到315纳⽶的UVB可以灼伤⽪肤并增加⽪肤癌风险,波长在200到280纳⽶的UVC可以有效地杀灭细菌和病毒,⽽波长在100到200纳⽶之间的紫外线会被空⽓中的氧⽓吸收,所以只能在真空中或者⾄少是完全⽆氧的环境⾥⼯作,也就不适合⽤于现实杀菌了。传统的紫外杀菌选⽤254纳⽶的波长。谦虚的成语
当紫外线被细菌或者病毒吸收之后,就会破坏DNA,从⽽使它们失去增殖能⼒。就杀菌结果⽽⾔,跟加热或者⽤化学物质处理是⼀样的。
紫外杀菌的能⼒除了跟波长有关,还取决于灭菌物被辐射到的能量。在选定的254纳⽶波长下,杀菌效果跟能量强度呈现⼀个拉伸过的S型。也就是说,在低能量下,杀菌效果很差,这是因为细菌或者病毒跟⼈体⼀样,对于DNA损伤有⼀定的修复能⼒。在照射能量低的时候,损伤的DNA被及时修复,细菌和病毒就能够继续增殖下去。当能量⾼到⼀定程度,DNA修复系统实在忙不过来了,DNA损伤急剧增加,宏观上表现出来就是细菌或病毒被“杀死”了。超过这个能量强度,每增加⼀点,灭菌能⼒都会⼤⼤增加。但是增加到⼀定程度,就进⼊第⼆个平台——再继续增⾼能量,杀菌效果增加得也很少。这个灭菌效果上的“尾巴”可能是源于⼀部分微⽣物对于紫外线攻击很顽强,也可能源于有⼀部分被处理样品⽆法被照射到。
因为这个“尾巴”的存在,紫外杀菌难以实现加热或者化学杀菌剂那么彻底的杀灭。通常把降低4个对数值作为“灭菌标准”,也就是还有万分之⼀的细菌活下来。⽽鲜⽜奶的巴⽒杀菌——在72摄⽒度下处理15秒——则通常是降低5个对数值,即最多只有⼗万分之⼀的细菌存活。如果降低的对数值是12个以上,⼏乎就没有细菌能够幸存了。
不同的微⽣物对紫外线的敏感性不同,有的在较低能量强度下就会被⼤量杀灭,⽽有的则需要更⾼能量才⾏。以降低4个对数值为标准,研究中检测过的细菌有的只需要每平⽅⽶⼏⼗焦⽿的能量,有的则需要每平⽅⽶300焦⽿以上。我们并不知道现实的⾷物中存在哪些细菌,⼜各有多少,所以总是把最顽强的那个作为⽬标,顺便把其他的灭了。因此,紫外杀菌所⽤的能量强度需要在每平⽅⽶400焦
⽿以上。
各种灭菌技术的灭菌效果都会受到灭菌物理化性质的影响。⽐如加热或者⾼压灭菌,温度、酸碱度和压⼒都会有很⼤影响。⽽在紫外灭菌中,这些因素就不那么重要。紫外杀菌的关键是紫外线能够达到细菌,所以穿透性是关键。诸如灭菌物的组成、固体含量、颜⾊等因素都会影响紫外线的吸收,从⽽影响它穿透的厚度,也就对杀菌效果有很⼤的影响。如果灭菌物均⼀、透明,紫外线的穿透性好,灭菌效果就会好;反之,如果灭菌物浑浊,那么紫外线就会被散射,能量在穿透中降低,灭菌效果就会⽐较差。
总的来说,紫外线的穿透能⼒⽐较差,通常也就能穿透两三厘⽶的厚度。但如果⽤在某些物质短时间灭菌,效果还是很好的。
注意事项:
1.选择紫外灯时,应该仔细核对型号、适⽤范围和注意事项。不要进⼊开启紫外消毒灯的室内。千万不要对着消毒灯验钞或者观察荧光,任何时候都不应该直视紫外灯管。紫外灯应该尽可能只在封闭空间内⼩范围使⽤,并避免不必要的暴露
2.在使⽤过程中,应保持紫外线灯表⾯的清洁,⼀般每两周⽤酒精棉球擦拭⼀次,发现灯管表⾯有灰尘、油污时,应随时擦拭。
3.⽤紫外线消毒物品表⾯时,应使照射表⾯受到紫外线的直接照射,且应达到⾜够的照射剂量
五、化学消毒灭菌
(1)浸泡法选⽤杀菌谱⼴、腐蚀性弱、⽔溶性消毒剂,将物品浸没于消毒剂内,在标准的浓度和时间内,达到消毒灭菌⽬的。
(2)擦拭法选⽤易溶于⽔、穿透性强的消毒剂,擦拭物品表⾯,在标准的浓度和时间⾥达到消毒灭菌⽬的。
(3)薰蒸法加热或加⼊氧化剂,使消毒剂呈⽓体,在标准的浓度和时间⾥达到消毒灭菌⽬的。
适⽤于室内物品及空⽓消毒或精密贵重仪器和不能蒸、煮、浸泡的物品(⾎压计、听诊器以及传染病⼈⽤过的票证等),均可⽤此法消毒。
(4)喷雾法借助普通喷雾器或⽓溶胶喷雾器,使消毒剂产⽣微粒⽓雾弥散在空间,进⾏空⽓和物品表⾯的消毒。
(5)环氧⼄烷⽓体密闭消毒法将环氧⼄烷⽓体置于密闭容器内,在标准的浓度、湿度和时间内达到消毒灭菌⽬的。
梦见蛇 周公解梦
环氧⼄烷是⼴谱⽓体杀菌剂,能杀灭细菌繁殖体及芽胞,以及真菌和病毒等。穿透⼒强,对⼤多数物品⽆损害,消毒后可迅速挥发,特别适⽤于不耐⾼热和温热的物品,如精密器械、电⼦仪器、光学仪器、⼼肺机、起博器、书籍⽂件等,均⽆损害和腐蚀等副作⽤。本品沸点为10.8℃,只能灌装于耐压⾦属罐或特制安瓿瓶中。
注意事项
1.易燃易爆品存放在阴凉、通风、⽆⽕源、⽆电开关处。⽤时轻取轻放,勿猛烈碰撞。
2.消毒时,应注意环境的相对湿度和温度。钢瓶需加温时,热⽔不可超过70℃。
3.对⽪肤、眼及粘膜刺激性强的液体,如有接触,⽴即⽤⽔冲洗。
祝老师端午节快乐的句子4.在有毒⽓体消毒的操作过程中,如有头昏头痛等中毒症状时,应⽴即离开现场,⾄通风良好处休息。
六、⽕焰灭菌
是指⽤⽕焰直接烧灼的灭菌⽅法。该⽅法灭菌迅速、可靠、简便,适合于耐⽕焰材料(如⾦属、玻璃及瓷器等)物品与⽤具的灭菌,不适合药品的灭菌。
最常见的⽕焰灭菌,酒精灯。
注意事项:
1、酒精灯的灯芯要平整.
2、添加酒精时,不超过酒精灯容积的2/3;酒精不少于1/4.
3、绝对禁⽌向燃着的酒精灯⾥添加酒精,以免失⽕.
4、绝对禁⽌⽤酒精灯引燃另⼀只酒精灯.
5、⽤完酒精灯,必须⽤灯帽盖灭,不可⽤嘴去吹.
6、不要碰倒酒精灯,万⼀洒出的酒精在桌上燃烧起来,应⽴即⽤湿布扑盖.(Ps:中学⽼师有讲过...)