蛋白质的测定方法（凯氏定氮法）
一、 原理
有机物与硫酸共热，其中的氮转变为硫酸铵，然后测定氮量，然后乘以6.25，即可得到有机物中粗蛋白含量。
二、 试剂
1. 浓硫酸（98%、18mol/l）
3. 40%氢氧化钠溶液
4. 0.1N标准氢氧化钠溶液：
（2） 标定：取配制的氢氧化钠溶液15ml、酚酞指示剂2-3滴，用0.1N的草酸溶液标定，至
溶液变为无时，记下耗用草酸溶液的量，换算成氢氧化钠的实际浓度，记录。
5．混合指示剂（亚甲基蓝+甲基红）：由2倍体积0.1%甲基红无水乙醇溶液与1倍体积0.1%社保可以跨省转吗亚甲基蓝水溶液混合而成。（此指示剂碱性时呈绿，中性时呈灰，酸性时呈红）。
6. 混合催化剂：称取硫酸钾100克、硫酸铜10克、硒粉1克均匀混合后研细待用。
7. 酚酞指示剂：溶酚酞1.000华为手表太空人表盘克于100ml95%乙醇中。
三、 操作规程：
Ⅱ.消化
（2） 将凯氏烧瓶放入通风橱中的消化炉，将炉温调至450℃开始消化，开始10分钟左右注意经常摇动凯氏烧瓶以防止样品经碳化变黑后产生的大量炮沫溅出。注意不能让泡沫及黑物质上升到烧瓶颈部）。消化时间一般为5小时，消化完全后样品消化液呈淡蓝绿。
（3） 冷却消化液，将样品消化液无损地转入50ml容量瓶（注意要用蒸馏水把凯氏烧瓶冲洗干净3-4次，洗涤液也转入容量瓶），定容至50ml、摇匀，待测。
Ⅲ.蒸馏（凯氏蒸馏）
（2） 准备收集瓶：于一50ml锥形瓶中加入0.1N标准稀硫酸溶液10ml、混合指示剂3-4滴。将此锥形瓶置于冷凝管下端一定要没入硫酸液面以下。
去美国留学怎么办（3） 将收集残液端止水夹打开，准确量取样品待测液15ml由小玻杯加入反应室中，并用蒸馏水洗涤小玻杯2次。
（4） 插上小玻塞，从小玻杯中加入40%氢氧化纳溶液8-10ml左右，酚酞指示剂两滴，轻
轻旋转着，向上提起棒状玻塞使碱液慢慢流入反应室，在碱液未完全流入时，将玻塞盖紧再向小玻杯中加入少量的蒸馏水，再轻提玻塞，使一半蒸馏水流入反应室，另一半留在小玻杯中作水封。注意严格防止反应室中的气体外泄。
（5） 关闭蒸馏烧瓶夹子，加热通入蒸汽，同时关闭残液收集处橡皮管夹子开始蒸馏。蒸馏5-6分钟后，移动锥形瓶，使硫酸液面离开冷凝管口约1cm，并用少许蒸馏水冲洗冷凝管口外面，继续蒸馏1分钟，然后移去锥形瓶。用表面皿覆盖口以待测定。
（6） 排除废液洗涤。打开蒸馏烧瓶夹子，关闭通气橡皮管夹子切断蒸汽。此时因反应室外壳中空气较反应室中冷却得快，故产生负压，废液即从反应室进入反应室外壳，打开夹子，废液经橡皮管流出。
（7） 洗涤装置。从小玻杯中加蒸馏水入反应室，用洗耳球从橡皮管吸收废液，反复冲洗几次，将碱液洗净（用酚酞指示剂检查），然后关闭夹子，全套装置空蒸数分钟。
Ⅳ.滴定
（1） 蒸馏样品滴定 用0.1N标准氢氧化钠溶液滴定锥形瓶中剩余的酸（加混合指示剂2-3
滴），当溶液由紫经灰转变为淡绿时即为终点，记下耗用0.1N标准氢氧化钠溶液的毫升数。
（2） 空白处理：
A. 取0.2-0.3ml蒸馏水代替样品加入凯氏烧瓶，与取样一样进行消化、凯氏蒸馏等步骤。做为空白样。
B. 取空白样的收集液，用0.1N标准氢氧化钠滴定，记下耗用0.1N标准氢氧化钠溶液的毫升数。
C. 一般一批样品（一批样品）只需做一个空白即可。
四.结果计算
公式如下：
每100克样品中所含氮的克数：N%=(A-B)N NaOH*0.014*D/V*100/W
蛋白质含量（%）=样品中总含氮量（N%）*6.25
A：滴定空白耗用的0.1N标准氢氧化钠溶液的毫升数
B：滴定样品耗用的0.1N标准氢氧化钠溶液的毫升数
C：NaOH的当量浓度
D：样品消化后定容毫升数
龙梅子V：所取样品用以蒸馏的毫升数
W张国荣 毛舜筠：样品重（克）
附：蛋白质测定记录表
样品含氮（蛋白质）测定记录卡
实验号： 样本编号：
纸重 | 纸+样品重 | 样品净重 | NaOH浓度 | 蛋白质含量（%） | ||||||||
滴定 | 第一次 | 第二次 | 第三次 | 平均净耗量 | ||||||||
起点 | 终点 | 净耗量 | 起点 | 终点 | 净耗量 | 起点 | 终点 | 净耗量 | ||||
空白 | ||||||||||||
样品 | 押韵的网名 | |||||||||||
测定日期： 测定者： 空白——样品
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