Western blot
试剂配制
1．30％丙稀酰胺储存液
丙稀酰胺29g
N，N’-亚甲双丙稀酰胺1g
双蒸水定容到100ml，
经高压蒸汽灭菌的滤纸过滤避光，4℃保存于棕瓶中2．1.5 M Tris-HCl (MW=121.1)pH 8.8
Tris碱90.75g
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双蒸水400ml
用浓HCl调pH至8.8，加双蒸水定容至500ml。4℃冰箱保存
3．1.0 M Tris  pH6.8
Tris碱12g
双蒸水60ml
用浓HCl调pH至6.8，
加双蒸水定容至100ml。4℃冰箱保存
4．10％SDS(w/v）
SDS                10g
卓依婷死了吗溶于加水至100ml，室温放置
5．10％过硫酸胺（10%APS）
过硫酸胺1g
溶于10ml双蒸水中。可在密闭的管子里4℃保存一周6．10×Tris-甘氨酸电泳缓冲液
Tris                  30.3g
甘氨酸144g
SDS                  10g
定容至1000ml室温放置。
临用时稀释成1×电泳缓冲液
7．1%溴酚蓝（w/v）
溴酚蓝Tris-base  MilliQ 水100 mg
60 mg
定容至10 ml
8．TEMED原液，4℃冰箱保存
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9．2×sample buffer(2×样品缓冲液)
1.0 M Tris  pH6.8
2.5ml
SDS                0.8g
DTT                0.3085g无名之辈结局
甘油3ml
溴酚蓝0.004g
加双蒸水至10ml，分装—20℃保存
10. 4×SDS加样缓冲液10ml
1M Tris-HCl(ph:6.8)          2.5ml
SDS                    0.8g
溴酚蓝0.004g
甘油4ml
Takara
5x buffer                总5ml
1M Tris-HCl(ph:6.8)          1.25ml
SDS                    0.5g
溴酚蓝BPB              25mg
甘油  2.5ml
500ul每管分装，使用前将25ul的2-ME加到没管中
王牌对王牌还珠格格剧组哪一期11．转膜缓冲液
Tris 碱  5.8g
甘氨酸  2.9g
SDS            0.37g
甲醇200ml
加双蒸水至1000ml，临用前配制，4℃冷却
12．1×TBST
Tris 碱  3.0285 g
氯化钠8.766g
Tween-20        500ul
加双蒸水至1000ml，现配现用。（4℃最多保存一周）
13．n%封闭液(一般5%)
脱脂奶粉n克溶于100ml 1×TBST，4℃冰箱保存
附表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）溶液成分510152025304050 6%
水  2.6  5.37.910.613.215.921.226.5 30%丙烯酰胺溶液123456810
1.5 mol/L Tris (pH8.8)  1.3
2.5
3.85  6.37.51012.5
10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0040.0080.0120.0160.020.0240.0320.04 8%
水  2.3  4.6  6.99.311.513.918.523.2 30%丙烯酰胺溶液  1.3  2.74  5.3  6.7810.713.3
1.5 mol/L Tris (pH8.8)  1.3
2.5
3.85  6.37.51012.5
10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0030.0060.0090.0120.0150.0180.0240.03 10%
水  1.94  5.97.99.911.915.919.8 30%丙烯酰胺溶液  1.7  3.35  6.78.31013.316.7
1.5 mol/L Tris (pH8.8)  1.3
2.5
3.85  6.37.51012.5
10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02 12%银杏树基地
水  1.6  3.3  4.9  6.68.29.913.216.5 30%丙烯酰胺溶液246810121620
1.5 mol/L Tris (pH8.8)  1.3
2.5
3.85  6.37.51012.5
10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02 15%
水  1.1  2.3  3.4  4.6  5.7  6.99.211.5 30%丙烯酰胺溶液  2.557.51012.5152025
1.5 mol/L Tris (pH8.8)  1.3
2.5
3.85  6.37.51012.5
10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.010.0120.0160.02
附表2 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳5%积层胶（浓缩胶）所用溶
液
不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）溶液成分123456810 5%      　水0.68  1.4  2.1  2.7  3.4  4.1  5.5  6.8 30%丙烯酰胺溶液0.170.330.50.670.831  1.3  1.7
1.5 mol/L Tris (pH8.8)0.130.250.380.50.630.750  1.25
10% SDS0.010.020.030.040.050.060.080.1 10%过硫酸氨0.010.020.030.040.050.060.080.1 TEMED
0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01