ＤＯＩ：
１０．１３６０２／ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｃｌｓ．２０２０．１１．０３
过敏原特异性ＩｇＥ抗体定量检测试剂的性能验证
作者简介：杜文胜，１９７９年生，男，副主任技师，硕士，主要从事临床免疫检验工作。
通信作者：黄俊琼，主任技师，博士，教授，
Ｅ ｍａｉｌ：５４３３６９６９２＠ｑｑ．ｃｏｍ。杜文胜１
，朱杰华１
，潘丽２
，黎兵１
宽带账号和密码怎么查，何应中１
，
陈莉１
，黄俊琼１
（１．遵义医科大学附属医院医学检验科，贵州遵义
５６３００３；２．玉溪市人民医院检验科，
云南玉溪６５３１００）摘要：目的 对某品牌过敏原ＩｇＥ抗体定量检测试剂进行性能验证。方法 参考美国临床和实验室标准协会（
ｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｌａ ｂｏｒａｔｏｒｙｓｔａｎｄａｒｄｓｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣＬＳＩ）及中华人民共和国医药行业标准ＹＹ／Ｔ１５８１ ２０１８的相关文件，对符博克ＴＭ
过敏原ＩｇＥ抗体定量检测试剂进行准确度、检出限、线性、重复性、批间差、特异性验证，并与ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ系统检测结果进行一致性评价。结果
该试剂批内变异系数（ＣＶ）＜１０％，批间ＣＶ＜２０％，与ＷＨＯ１１／２３４标准品的相对偏差＜１５％，回收率为８５％～１１５％，检出限≤
０．３５ＩＵ／ｍＬ，稀释线性相关系数＞０．９９，对总ＩｇＥ浓度＞６０ＩＵ／ｍＬ的样本、ＩｇＡ浓度＞７００μｇ／ｍＬ的样本、ＩｇＭ浓度＞５００μｇ／ｍＬ的样本、ＩｇＧ浓度＞７０００μｇ／ｍＬ的样本的测定浓度均不高于检出限（０．３５ＩＵ／ｍＬ）。与ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ系统进行方法学比对，屋尘螨、粉尘螨、屋尘、艾蒿、鸡蛋、牛奶６个项目Ｋａｐｐａ值均＞０．７５。结论 该过敏原特异性ＩｇＥ抗体的定量检测试剂具有良好的准确度、检出限、线性、重复性、批间差、特异性，与ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ系统具有较高的一致性，具备临床推广价值。
关键词：过敏原；ＩｇＥ抗体；定量检测；性能验证中图分类号：
Ｒ４４６．６；Ｒ５６ 文献标志码：ＡＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｏｒａｌｌｅｒｇｅｎｓｐｅｃｉｆｉｃＩｇＥａｎｔｉｂｏｄｙｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓ
ＤＵＷｅｎｓｈｅｎｇ１，ＺＨＵＪｉｅｈｕａ１，ＰＡＮＬｉ２，
ＬＩＢｉｎｇ１，ＨＥＹｉｎｇｚｈｏｎｇ１，ＣＨＥＮＬｉ１，ＨＵＡＮＧＪｕｎｑｉｏｎｇ１（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃａｌＬａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＺｕｎｙｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓ
ｉｔｙ，Ｚｕｎｙｉ５６３００３，Ｇｕｉｚｈｏｕ；２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＹｕｘｉＰｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓ ｐｉｔａｌ，Ｙｕｘｉ６５３１００，Ｙｕｎｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴｏｖｅｒｉｆｙｔｈｅｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆａｂｒａｎｄｏｆａｌｌｅｒｇｅｎＩｇＥａｎｔｉｂｏｄｙｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｃ
ｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｒｅｌｅｖａｎｔｄｏｃｕｍｅｎｔｓｏｆＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｔａｎｄａｒｄｓＩｎｓｔｉｔｕｔｅ（
ＣＬＳＩ）ａｎｄｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｉｎｄｕｓｔｒｙｓｔａｎｄａｒｄｓｏｆｔｈｅＰｅｏｐｌｅ′ｓＲｅｐｕｂｌｉｃｏｆＣｈｉｎａＹＹ／Ｔ１５８１ ２０１８，ｔｈｅａｃｃｕｒａｃｙ，ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔ，ｌｉｎｅａｒｉｔｙ，ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ｉｎｔｅｒ ａｓｓａｙｖａｒｉａｔｉｏｎａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｔｙｏｆＨＯＢＴＭ
ａｌｌｅｒｇｅｎＩｇＥａｎｔｉｂｏｄｙｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓｗｅｒｅｖｅｒｉｆｉｅｄ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｃｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅＩｍｍｕｎｏＣＡＰｓｙｓ
ｔｅｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅｉｎｔｒａ ａｓｓａｙｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｏｆｖａｒｉａｔｉｏｎ（ＣＶ），ｉｎｔｅｒ ａｓｓａｙＣＶ，ｒｅｃｏｖｅｒｙ，ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｌｉｍｉｔａｎｄｌｉｎｅａｒｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｏｆｔｈｅｒｅａｇｅｎｔｓｗｅｒｅ＜１０％，＜２０％，
８５％－１１５％，≤０．３５ＩＵ／ｍＬａｎｄ＞０．９９，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｄｅｖｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｒｅａｇｅｎｔｓａｎｄＷＨＯ１１／２３４ｓｔａｎｄａｒｄｍａｔｅｉｒａｌｓｗａｓｂｅｌｏｗ１５％．ＷｈｅｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｗｉｔｈｔｏｔａｌＩｇＥ＞６０
ＩＵ／ｍＬ，ＩｇＡ＞７００μｇ／ｍＬ，ＩｇＭ＞５００μｇ／ｍＬｏｒＩｇＧ＞７０００μｇ／ｍＬｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｒｅａｇｅｎｔｓ，
ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆａｌｌｅｒｇｅｎ
ｓｐｅｃｉｆｉｃＩｇＥａｎｔｉｂｏｄｙｗｅｒｅｎｏｔｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔ
（０．３５ＩＵ／ｍＬ）．ＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅＩｍｍｕｎｏＣＡＰｓｙｓｔｅｍ，ｔ
ｈｅＫａｐｐａ
ｖａｌｕｅｓｏｆ６ｉｔｅｍｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓｐｔｅｒｏｎｙｓｓｉｎｕｓ，ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓｆａｒｉｎａｅ，ｈｏｕｓｅｄｕｓｔ，ｍｕｇｗｏｒｔ，ｅｇｇａｎｄｍｉｌｋ，ｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎ０．７５．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＨＯＢＴＭ
ａｌｌｅｒｇｅｎｓｐｅｃｉｆｉｃＩｇＥａｎｔｉｂｏｄｙｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔｓｈａｖｅｇｏｏｄａｃｃｕｒａｃｙ，ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔ，ｌｉｎｅａｒｉｔｙ，ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ，ｉｎｔｅｒ ａｓｓａｙｖａｒｉａｔｉｏｎａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ａｎｄｈａｖｅｈｉｇｈｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｙｗｉｔｈｔｈｅＩｍｍｕｎｏＣＡＰｓｙｓｔｅｍ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ
ｔｈａｔｔｈｅｙｈａｖｅｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｖａｌｕｅ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ａｌｌｅｒｇｅｎ；ＩｇＥａｎｔｉｂｏｄｙ；ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；
ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
临床常见的过敏性疾病以Ⅰ型变态反应为主，
即由ＩｇＥ抗体所介导，
多表现为过敏性鼻炎、特异性皮炎、过敏性哮喘等症状，发病率逐年上升［１ ２
］。过敏原ＩｇＥ抗体检测对于反映病情、协助诊断、预测疾病的发生和预后具有重要作用，已被纳入多项过敏
性疾病的临床诊疗指南［３ ７
］，
其试剂的性能直接影响过敏性疾病的临床诊疗，定量检测数据有助于减少实验室偏差［８
］。国内临床检验领域尚缺乏过敏原试剂定量检测试剂性能验证的统一标准。本研究对一种国产过敏原特异性ＩｇＥ抗体定量检测试剂盒进
行性能验证，参考美国临床和实验室标准协会（ｃｌｉｎ ｉｃａｌａｎｄｌａｂｏｒａｔｏｒｙｓｔａｎｄａｒｄｓｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣＬＳＩ）２０１６年
文件（Ｉ／ＬＡ２０，３ｒｄｅｄ．Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１６）
［９］及中华人民共和国医药行业标准ＹＹ／Ｔ１５８１ ２０１８［１０
］进行，验证指标覆盖试剂说明书描述的性能指标。同时，对６个重点项目（屋尘螨、粉尘螨、屋尘、艾蒿、鸡蛋、牛奶）与ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ系统的定性与定量一致性进行比较，数据汇总如下。
１ 材料与方法
１．１ 临床样本 验证试验样本取自遵义医科大学附属医院２０１９年１月１日至２０２０年１月１日门诊
患者的临床常规检测剩余血清，所有样本排除溶血、脂血，并免除知情同意。其中，特异性验证样本４份，分别为总ＩｇＥ浓度＞６０ＩＵ／ｍＬ且特异性ＩｇＥ为阴性的样本、ＩｇＡ浓度＞７００μｇ／ｍＬ的样本、ＩｇＭ浓度＞５００μｇ／ｍＬ的样本、ＩｇＧ浓度＞７０００μｇ／ｍＬ的样本；一致性比较样本６３９份，均用江苏浩欧博公司试剂检测过敏原ＩｇＥ抗体，过敏原为屋尘螨１５０例（阳性９９例，阴性５１例），粉尘螨１５０例（阳性９８例，阴性５２例），屋尘７５例（阳性３５例，阴性４０例），艾蒿６５例（阳性３６例，阴性２９例），鸡蛋１０５例（阳性７７例，阴性３２例），牛奶共９４例（阳性６１例，阴性３３例）。根据过敏原诊断试剂国际分级标准进行特
异性ＩｇＥ分级：０．３５Ｕ／ｍＬ≤１级＜０．７Ｕ／ｍＬ，０．７Ｕ／ｍＬ≤２级＜３．５Ｕ／ｍＬ，３．５Ｕ／ｍＬ≤３级＜１７．５Ｕ／ｍＬ，１７．５Ｕ／ｍＬ≤４级＜５０Ｕ／ｍＬ，５０Ｕ／ｍＬ≤５级＜１００Ｕ／ｍＬ为５级，≥１００Ｕ／ｍＬ为６级。
１．２ 仪器与试剂 ＵＲＡＮＵＳＡＥ ９５型全自动酶免仪（深圳爱康公司），Ｐｈａｄｉａ２５０全自动体外荧光免
疫分析系统（瑞典ＰｈａｄｉａＡＢ公司）；待验证试剂：符博克ＴＭ过敏原特异性ＩｇＥ抗体定量检测试剂（免疫捕获法，过敏原共２１项：总ＩｇＥ、屋尘螨、粉尘螨、艾蒿、普通豚草、蟑螂、猫上皮、狗上皮、屋尘、交链孢霉、柳树、花生、鸡蛋、牛奶、鳕鱼、小麦面粉、虾、大豆、蟹、牛肉、羊肉，江苏浩欧博公司）；比对试剂：ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ特异性ＩｇＥ定量检测试剂（瑞典ＰｈａｄｉａＡＢ公司）；参考物质：血清ＩｇＥ的第３代国际标准品
ＷＨＯ１１／２３４（英国国家生物标准和控制研究所，相对偏差试验用）。
１．３ 方法
１．３．１ 精密度 （１）重复性：在ＵＲＡＮＵＳＡＥ ９５型全自动酶免仪上，对２０个过敏原特异性ＩｇＥ抗体项
目检测值介于０．３５～０．７ＩＵ／ｍＬ（１级）和３．５～１７．５
ＩＵ／ｍＬ（３级）２个浓度的样本各重复检测１０次。计算平均值（珋ｘ）和标准差（ｓ），根据下面公式得出变异
中国四大发明图片系数（ＣＶ）。公式：ＣＶ＝ｓ
珋ｘ×１００％。（２）批间不精密
度：选择６个过敏原（屋尘螨、粉尘螨、屋尘、艾蒿、牛奶、鸡蛋）特异性抗体项目，在ＵＲＡＮＵＳＡＥ ９５型全自动酶免仪上，用３个批次的试剂盒（批号
２０１９０９０９、２０１９１０１２、２０１９１１１３）分别检测低浓度样本（浓度范围０．５１～０．７１ＩＵ／ｍＬ）和中浓度样本（浓度范围７．２２～１７．３６ＩＵ／ｍＬ），各重复检测１０次，计算３０次的珋ｘ和ｓ，得出ＣＶ。
１．３．２ 准确度 （１）相对偏差试验：用待验证总ＩｇＥ检测试剂，对国际溯源ＩｇＥ标准品ＷＨＯ１１／２３４在
试剂线性范围内的高（５００ＩＵ／ｍＬ）、中（５０ＩＵ／ｍＬ）、低（５ＩＵ／ｍＬ）３个浓度
的定制品重复检测３次，测试结果记为（Ｘｉ），按以下公式分别计算３次测定的相对偏差（Ｂｉ）。公式：Ｂｉ＝Ｘｉ－Ｔ
Ｔ
×１００％，Ｔ为标定浓度。（２）添加回收试验：将试剂检测定值为高浓度水平（３～５级，浓度１７．５～１００ＩＵ／ｍＬ）的待测物（Ａ）加入到低浓度水平（０～２级，０～３．５ＩＵ／ｍＬ）血清Ｂ中，所加待测物Ａ与血清Ｂ之间的体积比为１∶１９，计算回收率。公式：Ｒ＝Ｃ×（Ｖ０＋Ｖ）－Ｃ０×Ｖ０
Ｖ×Ｃ
ｓ
×１００％，其中Ｒ为回收率，Ｖ为样品Ａ液的体积，Ｖ０为样品Ｂ液的体积，Ｃ为样品Ｂ液加入Ａ液后的检测浓度，
Ｃ
０为样品Ｂ
液的浓度，Ｃｓ为样品Ａ液的浓度。
１．３．３ 检出限 （１）行标推荐做法：选择６个过敏原（屋尘螨、粉尘螨、屋尘、艾蒿、牛奶、鸡蛋）特异性
抗体项目进行检测。对５份浓度近似试剂说明书中声称的检出限０．３５ＩＵ／ｍＬ（浓度值介于０．３０～０．３５
ＩＵ／ｍＬ，吸光度范围０．０５０～０．０８５）的样本进行检测，每份样本检测５次，共计２５次，对检测值进行统计。
（２）ＣＬＳＩ（Ｉ／ＬＡ２０，３ｒｄｅｄ．Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１６）推荐做法：选择６个过敏原（屋尘螨、粉尘螨、屋尘、艾蒿、牛奶、鸡蛋）特异性抗体项目进行检测。先计算空白检出限（ＬＯＢ）：使用样本稀释液测定２０次，计算珋ｘ和ｓ，ＬＯＢ＝珋ｘ＋１．６４５ｓ。再计算检出限（ＬＯＤ）：使用阴性临床样本（＜０．３５ＩＵ／ｍＬ）测定２０次，计算珋ｘ和ｓ，ＬＯＤ＝ＬＯＢ＋１．６４５ｓ。
１．３．４ 线性 选择６个过敏原（屋尘螨、粉尘螨、屋尘、艾蒿、牛奶、鸡蛋）特异性抗体项目进行检测。
用体检血清样本（６项检测结果均为阴性）稀释接近试剂说明书中声称的线性区间上限的高浓度样本（８０～１００ＩＵ／ｍＬ以内），混合成５个稀释浓度（Ｘｉ），用待验证试剂分别检测以上样本，每个稀释浓度检测３次，分别求出每个稀释浓度检测结果的均值（Ｙｉ）。以稀释浓度（Ｘｉ）为自变量，检测结果均值（Ｙｉ）为因变量，绘制散点图，以最小二乘法进行线性拟合，求出线性回归方程，计算相关系数（ｒ）。
１．３．５ 特异性 用ＵＲＡＮＵＳＡＥ ９５型全自动酶免仪操作，对２０个项目用总ＩｇＥ浓度＞６０ＩＵ／ｍＬ且特
异性ＩｇＥ为阴性的样本、ＩｇＡ浓度＞７００μｇ／ｍＬ的样
本、ＩｇＭ浓度＞５００μｇ／ｍＬ的样本、ＩｇＧ浓度＞７０００μｇ／ｍＬ的样本进行检测，
对测定结果进行统计。１．３．６ 一致性比较 重点考察待验证试剂与Ｉｍｍｕ ｎｏＣＡＰ试剂在屋尘螨（
Ｄ１）、粉尘螨（Ｄ２）、屋尘（Ｈ１）、艾蒿（Ｗ６）、牛奶（Ｆ２）、鸡蛋（Ｆ２５２）６个项目中的一致性，其余项目因阳性样本过少不构成统计学意义而未纳入比对研究。所有一致性比较样本全部送贵阳金域医学检验所有限公司用Ｐｈａｄｉａ２５０全自动体外荧光免疫分析系统进行平行检
测，按其试剂盒说明书进行操作。计算２种方法检测结果的定性一致性（阴阳性符合率、总符合率、Ｋａｐｐａ系数）和定量相关性。２ 结果２．１
精密度
２．１．１ 重复性 ２０种过敏原特异性ＩｇＥ抗体２个浓度的ＣＶ均＜１０％，低于试剂说明书要求的不精密
王传君演过的电视剧度（＜１５％），符合行业标准要求中重复性的ＣＶ仪器操作应≤１０％的要求。见表１。表１ ２０种过敏原项目的精密度过敏原低浓度珋ｘｓＣＶ（％）高浓度珋
ｘｓＣＶ（％）屋尘螨０．６６０．０６８．３３６．７３０．２３３．４２粉尘螨０．７００．０６８．７１１１．８９０．８７７．３２
艾蒿
０．５４０．０５９．４４１６．３４１．１１６．７９普通豚草０．６４０．０６９．３８１５．４６０．８７５．６３
蟑螂
０．５９０．０６９．３２１２．３４０．９４７．６２猫上皮０．６１０．０４６．８９８．８８０．５６６．３１狗上皮０．６４０．０４６．４１６．４９０．６４９．８６
屋尘
０．６６０．０４６．６７６．９４０．５８８．３６交链孢霉０．５５０．０５９．２７８．６４０．６９７．９９
柳树
０．５４０．０５８．８９１６．４９０．７９４．７９花生
０．４９０．０５１０．００１６．３３１．２２７．４７鸡蛋
０．５８０．０３５．８６１５．２９１．０６６．９３牛奶
０．５６０．０４６．９６１４．６７１．３６９．２７鳕鱼
０．６３０．０５７．４６１６．３２０．５４３．３１小麦面粉０．６２０．０５７．４２１７．２００．５９３．４３虾０．６８０．０５７．５０１７．４３１．６６９．５２
大豆
０．７００．０７９．５７１６．５４１．２４７．５０蟹
０．６４０．０６１０．００６．７７０．３９５．７６牛肉０．５７０．０６９．６５７．８３０．６７８．５６羊肉０．５９０．０５９．１５９．３３０．３３３．５４ 注：ＣＶ，变异系数；ｓ，测量值的标准差；珋
ｘ，测量值的平均值。２．１．２
批间不精密度 ６个重点项目（屋尘螨、粉尘螨、屋尘、艾蒿、牛奶、鸡蛋）使用３个批号试剂盒（２０１９０９０９、２０１９１０１２、２０１９１１１３）
进行检测，批间ＣＶ均＜２０％。其中低浓度样本（浓度值介于０．５１～０．７１ＩＵ／ｍＬ）６个项目的ＣＶ依次为１３．８２％、１３．１０％、
１３．３３％、９．６１％、１５．２７％、１９．６４％；高浓度样本（浓度值介于７．２２～１７．３６ＩＵ／ｍＬ）６个项目的ＣＶ依次为
１７．４０％、６．８６％、９．５６％、１３．１９％、１１．１０％、１２．４３％。均符合行业标准要求（≤２０％）
。２．２ 准确度２．２．１ 准确度———相对偏差试验 对定值浓度为５ＩＵ／ｍＬ、５０ＩＵ／ｍＬ、５００ＩＵ／ｍＬ的ＷＨＯ１１／２３４低、中、高３个浓度的样本用待验证试剂进行总ＩｇＥ项目检测，重复３次，每次的Ｂｉ均在±１５％以内，符合要求，见表２。表２ ＷＨＯＩｇＥ参考物质相对偏差试验结果次数低浓度Ｔ
ＸｉＢｉ（％）中浓度ＴＸｉＢｉ（％）高浓度ＴＸｉＢｉ（％）
第１次５．００４．４５－１１．００５０．００４８．６７－２．６７５００．００５４７．２１９．４４第２次５．００４．８１－３．８０５０．００５２．２９４．５８５００．００５６６．１２１３．２２第３次５．００４．５４－９．２０５０．００５１．１３２．２６５００．００５１３．９７２．７９总偏差５．００４．５７－８．００５０．００５０．７０１．４０５００．００５４２．４３８．４９
注：Ｂｉ，相对偏差；Ｘｉ，测定浓度（单位ＩＵ／ｍＬ）；Ｔ，标定浓度（单
位ＩＵ／ｍＬ）
。２．２．２ 准确度———添加回收试验 对２０个过敏原项目进行添加回收试验，回收率均在８５％～１１５％之间，符合行业标准要求，见表３。
表３
２０
种过敏原项目添加回收试验结果
过敏原Ｃｓ
（
ＩＵ／ｍＬ）Ｃ０
（ＩＵ／ｍＬ）Ｃ（ＩＵ／ｍＬ）Ｒ（％）屋尘螨
６２．３８０．４８３．４６９５．８粉尘螨
８４．３５０．５１４．４５９４．１艾蒿
９８．５００．３３５．９５１１４．４普通豚草
３１．２８０．０３３．１０９８．２蟑螂
９６．０９０．４３５．４３１０４．６猫上皮
９１．２８０．３２４．４８９１．５狗上皮
８９．３３０．６６５．４４１０７．８屋尘
７１．５４０．５６４．３３１０４．２交链孢霉
９７．５３０．６３５．０５９１．３柳树
８１．３７０．２８４．２０９６．７花生
９０．６２０．８３４．９７９２．２鸡蛋９５．８００．７２５．７７１０６．２
牛奶
９７．９００．３９５．４６１０４．０鳕鱼
９９．５４０．４５５．７８１０７．７小麦面粉
２６．８３０．２７２．５９８７．５虾
７０．７２０．５７４．３３１０７．２大豆
６４．０００．８６３．８３９４．３蟹
４８．６２０．７０２．８９９１．３牛肉２３．９６０．１３２．３３９２．３
羊肉
３１．７８０．１５２．９８８９．５ 注：Ｒ，回收率；Ｃ，样品Ｂ液加入Ａ液后的检测浓度；Ｃ０
，样品Ｂ液的浓度；Ｃｓ
，
样品Ａ液的浓度。２．３ 检出限２．３．１ 检出限—
——行标方法 对６个项目各２５次检测结果进行统计。对屋尘螨、粉尘螨、屋尘３个项目，
２５次中分别都有２次检测值超过参考区间下限
（０．３５ＩＵ／ｍＬ），未能符合行标要求；而艾蒿、鸡蛋、牛奶２５次中均没有高于参考区间下限（０．３５ＩＵ／ｍＬ）的检测结果，符合行标要求，故该性能指标部分通过。
２．３．２ 检出限———ＣＬＳＩ方法 ６种过敏原的ＬＯＢ均在０．１０ＩＵ／ｍＬ以内，ＬＯＤ均在０．２０ＩＵ／ｍＬ以内，
不高于说明书声明的０．３５ＩＵ／ｍＬ，符合要求，见表４。
表４ ６种过敏原项目的检出限结果（ＣＬＳＩ方法）韩寒简介
过敏原空白检出限（ＬＯＢ）最低检出限（ＬＯＤ）
屋尘螨０．０９２０．１８２
粉尘螨０．０８４０．１７８
屋尘０．０８７０．１６３
艾蒿０．０７５０．１５６
牛奶０．０９３０．１９７
鸡蛋０．０９７０．１７４
２．４ 线性 ６种过敏原项目均有较好的线性关系，相关系数均＞０．９９０，符合要求，见表５。
表５ ６种过敏原特异性ＩｇＥ抗体的线性关系
过敏原相关系数（ｒ）线性方程
屋尘螨０．９９８３Ｙ＝１．００２５Ｘ－１．５６９６
粉尘螨０．９９４５Ｙ＝０．９９１６Ｘ－２．０９４１
屋尘０．９９５０Ｙ＝０．９９１１Ｘ－２．２１５１
艾蒿０．９９８１Ｙ＝０．９９５４Ｘ＋１．２２６９
牛奶０．９９５６Ｙ＝１．０００５Ｘ－２．８４７０
鸡蛋０．９９５９Ｙ＝０．９９４３Ｘ＋１．９４６１２．５ 特异性 对２０个项目使用总ＩｇＥ＞６０ＩＵ／ｍＬ、ＩｇＡ＞７００μｇ／ｍＬ、ＩｇＭ＞５００μｇ／ｍＬ、ＩｇＧ＞７０００
μｇ／ｍＬ多种干扰物质样本进行检测，测定结果均不高于检出限（０．３５ＩＵ／ｍＬ），符合行业标准要求。
２．６ 一致性比较 ６个过敏原项目与ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ方法学比对的阴阳性符合率、Ｋａｐｐａ值见表６，Ｋａｐｐａ
值均＞０．７５，说明２种方法学具有较好的一致性。
表６ ６种过敏原项目的一致性比较结果
过敏原阴性符合率（％）阳性符合率（％）总符合率（％）Ｋａｐｐａ值量值相关系数（ｒ）相关性方程屋尘螨９０．００（ｎ＝５０）９４．００（ｎ＝１００）９２．６７（ｎ＝１５０）０．８３６０．９５８Ｙ＝０．９３５２Ｘ＋０．８７５３粉尘螨９２．１６（ｎ＝５１）９４．９５（ｎ＝９９）９４．００（ｎ＝１５０）０．８６７０．９７４Ｙ＝０．９７９５Ｘ＋０．７３８７屋尘９２．８６（ｎ＝４２）９６．９７（ｎ＝３３）９４．６７（ｎ＝７５）０．８９２０．９５３Ｙ＝０．９９０３Ｘ＋０．２７５４艾蒿８７．５０（ｎ＝３２）９６．９７（ｎ＝３３）９２．３０（ｎ＝６５）０．８４６０．８２１Ｙ＝１．０１８３Ｘ＋０．９３２７鸡蛋７８．１２（ｎ＝３２）９５．８９（ｎ＝７３）９０．４８（ｎ＝１０５）０．７６７０．８３０Ｙ＝０．７４０３Ｘ＋０．５３０４牛奶９２．８６（ｎ＝２８）８９．３９（ｎ＝６６）９０．９４（ｎ＝９４）０．
７８２０．９１８Ｙ＝０．９０８Ｘ＋０．０６０
３ 讨论
过敏原特异性ＩｇＥ的临床检测分为定性和定量
２种，目前国内使用的试剂仍以定性为主，远落后于国外。近年来定量检测正逐渐成为一种趋势［８］。
本研究对该定量试剂的准确度进行检测，使用ＷＨＯ
ＩｇＥ标准品对总ＩｇＥ项目进行检测，低、中、高３个浓度的偏差均在１５％以内，其中中浓度的偏差最小，
在５％以内，低浓度和高浓度偏差稍大，有个别超过
１０％，可能与该系统采用的方法学有关。酶联免疫捕获法是ＥＬＩＳＡ的改进，使用的仍然是聚苯乙烯固
相载体和四甲基联苯胺底物［１１］，由于线性范围受限，标准曲线在低端和高端受到压缩，当吸光
度值稍有波动时，就会对标准曲线拟合换算后浓度产生较大影响，因此低端和高端波动稍大。在准确度的添加回收实验结果中，２０项过敏原的回收率均在
８５％～１１５％之间，满足标准，说明回收率较高，准确度验证通过。
本研究验证的“检出限、线性、批间差、一致性比较”项目由于需要较大样本体积和高值过敏原阳性样本，本院仅收集获得６个常见项目的阳性样本可以满足需求，因此未能全部验证。在检出限实验中，２０１８年行标与２０１６年美国ＣＬＳＩ操作方法有较大的不同，因此２种验证方法均进行验证。行标要求使用的５份浓度近似检出限（０．３５ＩＵ／ｍＬ）的低值样本，均通过阳性血清样本稀释获得，屋尘螨、粉尘螨、屋尘３个项目分别都有１个样本的２次检测数值超过参考区间下限（０．３５ＩＵ／ｍＬ），未能符合行标要求，可能原因是这些样本稀释后得到的浓度过于接近临界值，因而稍有波动就会高于检出限。而使用ＣＬＳＩ推荐方法验证后，ＬＯＢ均＜０．１０ＩＵ／ｍＬ，ＬＯＤ均＜０．３５ＩＵ／ｍＬ，满足说明书标准和行业标准。由于行业标准中“浓度近似检出限样本”的概念过于模糊，样本配制的主观影响因素大，因此ＣＬＳＩ方案更适合用于检出限的性能验证。另外，该系统的重复性＜１０％、批间差＜２０％、线性ｒ＞０．９９，均符合相关标准，验证通过。
在一致性比较中，对该系统和ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ系统进行了６个项目的比对验证。ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ系统被欧洲过敏反应与临床免疫学会视为体外诊断过敏性疾病的“参考方法”［１２］，该法在国
际上应用最为广泛，可实现全自动逐项定量检测单种过敏原，敏感性、特异性均较佳。但由于每检测一项过敏原约需
耗费１～２μｇ的过敏原原料，导致成本和收费高昂、使用客户有限［１３］。６个项目Ｋａｐｐａ系数均＞０．７５，说明２种方法学在定性结果上一致性较好，符合国家ＩＳＯ１５１８９标准；屋尘螨、粉尘螨、屋尘、艾蒿项目
Ｋａｐｐａ值均＞０．８０，说明定性结果几乎完全一致，而牛奶和鸡蛋项目的Ｋａｐｐａ系数＜０．８０，则在定性结果
上差异稍大。从量值结果来看，屋尘螨、粉尘螨、屋尘、牛奶４个项目量值相关系数ｒ均＞０．９，说明量值具有很高的相关性，而鸡蛋和艾蒿项目ｒ＜０．９，量值相关性稍差。过敏原原材料是决定过敏原检测结果的重要因素［１４］，原料成分复杂，每种过敏原的致敏组分均不止一种，不同生物物种亚型不同，也使得原材料产生差异［１５］。有些过敏原若使用天然过敏原提取物，可能会缺少过敏原组分或仅存在少量过敏组分而产生假阴性结果，试剂会通过向过敏原提取物内掺加少量过敏组分来解决此问题［１３］。该国产检测试剂大多数原料来源于国内及自主研发，而
ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ系统的试剂原料主要来自瑞典，不同地域的物种来源可能存在差异，这或许是艾蒿项目量
值一致性稍差的原因；另一方面，鸡蛋项目一致性稍差的原因是该试剂检测的是全蛋（包括蛋清和蛋黄），而ＩｍｍｕｎｏＣＡＰ系统检测的是蛋白（仅蛋清），因此阴性符合率较低，不排除是蛋黄致敏的可能。鸡蛋分为鸡蛋黄和鸡蛋白，蛋黄中过敏原种类相对较少，最主要为α 卵黄蛋白（Ｇａｌｄ５），而鸡蛋白含有２０多种过敏原，致敏能力最强的是卵粘蛋白（ＯＶＭ，Ｇａｌｄ１），蛋白是鸡蛋过敏的主要致敏物质［１６］。牛奶过敏原也含有多种致敏组分，主要致敏组分是酪蛋白（αｓ１ 、αｓ２ 、β 和κ 酪蛋白）和乳清蛋白（α 乳白蛋白和β 乳球蛋白）［１５］，不同厂家的原材料中各种致敏组分配比不同也影响最终的检测结果及定量数值，这是２种方法学牛奶项目也存在差异的原因。
本研究不足之处在于，未能获得全部过敏原的阳性样本，部分性能验证项目仅针对６种过敏原进行验证。但与先前类似文章相比［１６］，本研究验证维度更全面，所依据的方法标准更新，对检出限的验证首次采用２种方式进行。免疫捕获法应用于过敏原检测的优势在于所有微孔板包被物相同，可实现不同过敏原项目灵活组合，满足过敏原套餐自由定制需求和医保改革的大趋势，有一定的临床推广价值。４ 参考文献
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（收稿日期：２０２０ ０７ １６）
（本文编辑：刘）
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