ＨＰＬＣ波长切换法同时测定氯芬黄敏片中３种有效成分的含量
胡　冰（莆田市食品药品检验检测中心，福建莆田３５１１００）
摘要：目的　建立ＨＰＬＣ法测定氯芬黄敏片中３种有效成分的含量。方法　采用高效液相谱仪，谱柱为Ｃ１８
柱（２５０ｍｍ×４ ６ｍｍ，５μｍ），体积流量１ ０ｍＬ·ｍｉｎ－１，应用梯度洗脱、切换波长检测的方法，对该制剂的３种有效成分进行定量分析。结果　马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素质量浓度分别在０ ０３２９～０ ２６３２ｍｇ·ｍＬ－１、０ ２２７３～１ ８１８５ｍｇ·ｍＬ－１、０ ００５０～０ ０３９７ｍｇ·ｍＬ－１范围内与峰面积呈良好的线性
关系，平均回收率分别为９９ ５３％、９９ ８３％、９９ ４４％。结论　本方法操作简便，结果准确，重现性好，可用于氯芬黄敏片的质量控制。
关键词：氯芬黄敏片；马来酸氯苯那敏；双氯芬酸钠；胆红素；ＨＰＬＣ法
中图分类号：Ｒ９２７　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６ ３７６５（２０２１） ０２ ００８３ ０３
作者简介：胡　冰，女（１９８４－）。职称：副主任药师。主要从事中成药分析和检验工作。
  氯芬黄敏片为复方感冒制剂，曾用名为感冒通片，价格低廉，疗效确切，临床使用较为普遍。其主要组分为马来酸氯苯
那敏、双氯芬酸钠、人工牛黄，原国家药品标准〔
１〕
中采用高效液相谱法测定马来酸氯苯那敏和双氯芬酸钠的含量，采用紫外 可见分光光度法测定人工牛黄中胆红素的含量。为更好控制该药品质量，提高检测效率，本实验以该药主要成分马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素为定量控制指标，建立ＨＰＬＣ波长切换测定方法，同时测定３个主要成分的含量，为该复方制剂提供更全面、高效的质量控制方法。１　仪器与试药
１ １　仪器　日本岛津ＬＣ ２０１０ＡＨＴ型高效液相谱仪（日本岛津制作所），ＵＶ ＶＩＳ检测器，ＬＣｓｏｌｕｔｉｏｎ谱工作站（日本岛津制作所）；ＵＶ ２４５０型紫外分光光度仪（日本岛津制作所）；谱柱：ＡｇｉｌｅｎｔＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢ Ｃ１８（２５０ｍｍ×４ ６ｍｍ，５μ
ｍ）；ＸＰ２０５型分析天平（梅特勒 托利多仪器〔上海〕有限公司）；ＥｌｍａｓｏｎｉｃＳ１５０实验室应用型超声波清洗器（德国Ｅｌｍａ公司）；ＯＭＮＩ实验室超纯水机（锐思捷科学仪器有
限公司）。１ ２　试药　马来酸氯苯那敏对照品（批号１０００４７ ２０１５０７，纯度９９ ７％，遮光，１０５℃干燥２ｈ）、双氯芬酸钠对照品（批号１００３３４ ２００３０２）、胆红素对照品（批号１０００７７ ２００８０５，纯度９８ ５％）均购自中国食品药品检定研究院；氯芬黄敏片（广州白云山明兴制药生产的３个批次产品，批号为１８０４０９、１８０８０９、１８０９４８）；乙腈、甲醇、三乙胺（美国Ｂａｋｅｒ公司）为谱纯；、庚烷磺酸钠、冰醋酸、磷酸二氢铵和磷酸（国药集团化学试剂有限公司）为分析纯，水为超纯水。２　实验方法与结果木门十大品牌排名
２ １　谱条件　流动相：用庚烷磺酸钠溶液（庚烷磺酸钠１５ ２ｍｇ，加三乙胺０ ８ｍＬ，加水８００ｍＬ，用冰醋酸调ｐＨ值至３ ３±０ １，加水至１０００ｍＬ）为流动相Ａ，甲醇为流动相Ｂ，乙腈为流动相Ｃ，按表１进行梯度洗脱；体积流量：１ ０ｍＬ·
ｍｉｎ－１；进样量２０μＬ。
２ ２　对照品溶液制备　本实验注意避光。取马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素对照品，精密称定，加混合溶液（流动相：：甲醇：乙腈比例为３∶９∶１１∶２），制成浓度为
１ ６４５１ｍｇ·ｍＬ－１
的马来酸氯苯那敏贮备液、１１ ３６５８ｍｇ·ｍＬ－１的双氯芬酸钠贮备液和浓度为０ ２４８２ｍｇ·ｍＬ－１的胆红
素贮备液，精密量取上述贮备液各２ｍＬ，加上述混合溶液定容至２５ｍＬ，制成每ｍＬ含马来酸氯苯那敏０ １３１６ｍｇ、双氯芬酸钠０ ９０９３ｍｇ、胆红素０ ０１９９ｍｇ的混合对照品溶液。
表１　梯度洗脱谱条件
时间
／ｍｉｎ流动相Ａ
／％流动相Ｂ
／％流动相Ｃ
／％波长
演员葛天／ｎｍ０～７４２４０１８２６２７～１２４２→２２４０１８→３８２７６１２～１８２２→２４０３８→５８２７６１８～２７２４０５８４４９２７～３２２→４２４０５８→１８２６２３２～３７
４２
４０
１８
２６２
２ ３　供试品溶液制备　取批号（１８０９４８）氯芬黄敏片２０片，除去包衣，研细，精密称定适量（约相当于双氯芬酸钠２２ ５ｍｇ
），置２５ｍＬ容量瓶中，加２ ２项下混合溶液定容，超声处理（３００Ｗ，５０ｋＨｚ）１５ｍｉｎ，放冷至室温，用上述混合溶液补至刻度线，用微孔滤膜滤过，即得。
２ ４　阴性对照溶液制备　依照“２ ３”项下方法制备不含样品的阴性对照溶液。
２ ５　专属性试验　分别取混合对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液２０μＬ，按上述谱条件测定，结果表明阴性对照溶液无干扰，在该谱条件下，３个成分分离度均大于２ ０，本方法有良好的专属性（见图１）。
２ ６　线性关系考察　精密吸取３种对照品贮备溶液各０ ５、１、２、３、４ｍＬ，分别置２５ｍＬ量瓶中，加２ ２项下混合溶液定容，超声使溶解，放冷至室温，用混合溶液补至刻度线，摇匀。按
上述谱条件，分别进样２０μＬ进行测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，结果（见表２）。
表２　马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素标准曲线目标成分
线性方程
相关系数
（ｒ）线性范围（ｍｇ·ｍＬ－１
）马来酸氯苯那敏Ｙ＝１ ６６×１０７Ｘ－２ ０５×１０３
０ ９９９９０ ０３２９～０ ２６３２双氯芬
酸钠Ｙ＝３ ７０×１０７Ｘ＋２ ７２×１０５
０ ９９９９０ ２２７３～１ ８１８５胆红素
Ｙ＝３ ４７×１０７Ｘ＋７ ７４×１０
３０ ９９９８０ ００５０～０ ０３９７
ＳｔｒａｉｔＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＶｏｌ３３Ｎｏ ２２０２１
图１　ＨＰＬＣ谱图
Ａ 混合对照品图谱；Ｂ 供试品图谱；Ｃ 供试品图谱放大；Ｄ 阴性对照图谱；１ ２ 马来酸氯苯那敏对照品；３ 双氯芬酸钠对照品；４ 胆红素对照品
２ ７　精密度试验　分别取“２ ２”项下混合对照品溶液连续６次进样，每次进样２０μＬ，测定马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素的峰面积，计算其ＲＳＤ值分别为０ １３％、０ １１％、０ １９％。结果表明精密度良好。
２ ８　稳定性试验　取“２ ３”项下配制的批号（１８０９４８）的供试品溶液于室温避光放置０、１、２、４、８、１２ｈ，按上述谱条件进行测定，记录峰面积，结果马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素峰面积的ＲＳＤ分别为０ ９６％、０ ５７％、１ ３６％。表明室温避光放置１２ｈ，样品溶液稳定。
２ ９　重复性试验　精密称取同一批号（１８０９４８）供试品６份，按“２ ３”项下方法制备溶液，进行测定，计算含量，样品中马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素含量的ＲＳＤ分别为０ ８５％、１ １９％、０ ７２％。说明该方法可靠，重复性好。
２ １０　加样回收率试验　精密称定已知含量的氯芬黄敏片的供试品（批号：１８０９４８）粉末９份，分３组，每组分别精密加入相当于样品中所含马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素量的８０％、１００％、１２０％的对照品贮备液，按“２ ３”项下方法制备溶液，进样测定，计算加样回收率，结果（见表３）。表３　马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素加样回收率试验结果　（ｎ＝９）
成分取样量
／ｇ
样品
含量
／ｍｇ
对照品
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均
回收率
／％
ＲＳＤ
／％
马来酸氯０ ０７４８１ ８３６０１ ３１６１３ １５５１１００ ２３
苯那敏０ ０７５０１ ８４０９１ ３１６１３ １４７０９９ ２４
０ ０７５１１ ８４３４１ ３１６１３ １５６５９９ ７７
０ ０７６１１ ８６７９１ ６４５１３ ５０３０９９ ３９
０ ０７５３１ ８４８３１ ６４５１３ ４８５３９９ ５１９９ ５３０ ４
０ ０７５６１ ８５５６１ ６４５１３ ４８５７９９ ０９
０ ０７５７１ ８５８１１ ９７４１４ ８１２２９８ ９９
０ ０７５２１ ８４５８１ ９７４１４ ８２０９１００ ０５
０ ０７６２１ ８７０４１ ９７４１４ ８３４４９９ ４９
双氯芬０ ０７４８１１ ６１３７９ ０９２６２０ ７３７３１００ ３４
酸钠０ ０７５０１１ ６４４７９ ０９２６２０ ６６６０９９ ２１
０ ０７５１１１ ６６０３９ ０９２６２０ ７５３３１００ ００
０ ０７６１１１ ８１５５１１ ３６５８２３ １５７６９９ ７９
０ ０７５３１１ ６９１３１１ ３６５８２３ ０５４１９９ ９７９９ ８３０ ３
０ ０７５６１１ ７３７９１１ ３６５８２３ １０５８１００ ０２
０ ０７５７１１ ７５３４１３ ６３９０２５ ３３５７９９ ５８
０ ０７５２１１ ６７５８１３ ６３９０２５ ２４５４９９ ４９
０ ０７６２１１ ８３１１１３ ６３９０２５ ４７４８１００ ０４
胆红素０ ０７４８０ ２３９７０ １９８６０ ４３８４１００ ０６
０ ０７５００ ２４０４０ １９８６０ ４３７７９９ ３９
０ ０７５１０ ２４０７０ １９８６０ ４３７４９９ ０４
０ ０７６１０ ２４３９０ ２４８２０ ４９０５９９ ３６
０ ０７５３０ ２４１３０ ２４８２０ ４８７５９９ １９９９ ４４０ ４
０ ０７５６０ ２４２３０ ２４８２０ ４８８４９９ １５
０ ０７５７０ ２４２６０ ２９７８０ ５３８７９９ ４２
０ ０７５２０ ２４１００ ２９７８０ ５３９５１００ ２３
０ ０７６２０ ２４４２０ ２９７８０ ５３９５９９ １４
２ １１　中间精密度试验　由不同人员，采用不同的高效液相
谱仪器和不同品牌的Ｃ
１８
谱柱测定，取批号（１８０９４８）的供试品６份，按“２ ３”项下方法制备溶液，进行测定，计算含量，样品中马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素的含量的ＲＳＤ分别为１ ０５％、０ ９６％、１ １８％。由结果可知本方法中间精密度良好。
２ １２　检测限和定量限考察　精密量取“２ ６”项下中间浓度的对照品溶液１ｍＬ，用２ ２项下混合溶液逐步稀释，取２０μＬ按上述谱条件检测，当Ｓ／Ｎ为３时，马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素的检测限分别为为：０ ２４μｇ·ｍＬ－１、０ ３１μｇ·ｍＬ－１、０ １８μｇ·ｍＬ－１。当Ｓ／Ｎ为１０时马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素的定量限分别为：０ ８８μｇ·ｍＬ－１、１ １７μｇ·ｍＬ－１、０ ６７μｇ·ｍＬ－１。
表４　样品中马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素测定结果
批号马来酸氯苯
那敏（％）
双氯芬酸钠
（％）
胆红素
（ｍｇ／片）
１８０９４８９７ ５５１０２ ８４０ ３２
１８０４０９９６ ２４９８ ３５０ ２６
１８０８０９９９ ３５１００ ２７０ ２８
海峡药学　２０２１年　第３３卷第２期
２ １３　样品含量测定　精密称定不同批号的氯芬黄敏片粉末，按“２ ３”项下方法制备溶液，进样２０μＬ进行谱测定，用外标法计算含量，结果（见表４）。３　讨论
３ １　氯芬黄敏片原标准
〔１〕
中含量测定项下马来酸氯苯那敏、
双氯芬酸钠和人工牛黄中胆红素的含量测定是分开的，有文献指出，人工牛黄中胆红素采用紫外 可见分光光度法测定，可能存在辅料干扰，结果出现偏差〔２〕
。本实验方法同时测定
３个成分，结果准确，重现性好，有助于提高检验效率，可以考
虑作为该制剂的质量控制方法。
３ ２　谱图中马来酸氯苯那敏出现两个峰，因为马来酸为二
元酸，其电离常数分别为Ｋ１＝１ ０×１０－２，Ｋ２＝
５ ５×１０－７
，在通常的流动相ｐＨ范围内，马来酸氯苯那敏主要解离为氯苯那敏阳离子和马来酸阴离子，所以在谱图中会出现马来酸
峰在前而氯苯那敏峰在后的两个峰〔３〕
。
３ ３　通过参考相关文献〔２，４〕以及原标准〔１〕，经过预实验，最
后确定采用以流动相∶∶甲醇∶乙腈比例为３∶９∶１１∶２的混合溶剂用于目标成分提取，该比例溶剂混合均匀，提取效率高，与流动相兼容性好，谱峰形理想，杂质干扰小，适于样品定量测定。
３ ４　通过紫外分光光度仪的扫描，本实验３个目标成分马来酸氯苯那敏、双氯芬酸钠、胆红素分别在２６２ｎｍ、２７６ｎｍ、４４９
ｎｍ处有最大吸收，与相关文献〔５，６〕以及原标准〔１〕中的有效成
彭于晏出柜分的检测波长一致，由此确定了上述有效成分的吸收波长。
３ ５　经参考相关文献〔７，８〕及原标准〔１〕
确定梯度洗脱检测条
件。预实验中先后采用甲醇 乙腈 磷酸二氢铵溶液及甲醇
１％磷酸溶液以及本实验用到的甲醇 乙腈 庚烷磺酸钠溶液进行梯度洗脱、切波长测定，结果表明以甲醇 乙腈 庚烷磺酸钠溶液为流动相进行梯度洗脱时，待测组份峰形理想，分离效果好，符合检测要求。
参考文献
〔１〕国家药品标准〔Ｓ〕 化学药品地方上升国家标准（第１１册），
２００２，６９
〔２〕吴琳，陈国章 高效液相谱法测定氯芬黄敏片中胆红素含量
〔Ｊ〕 中国药业，２００９，１８（１０）：４８ ４９
〔３〕纪宇 关于马来酸氯苯那敏谱峰的识别〔Ｊ〕 中国药品标准，
２００４，５（１）：３１
〔４〕李为，李喜平，张程亮，等 高效液相谱法同时测定复方牛黄贴
中胆红素和奥硝唑含量〔Ｊ〕 医药导报，２０１６，３５（１０）：１１０１ １１０４ 〔５〕易登峰，宋卫星，龙四清，等 ＨＰＬＣ法测定人工牛黄中胆红素的含
量〔Ｊ〕 中医药导报，２０１８，２４（１３）：６０ ６１
〔６〕曹帅，夏晶，杨新华，等 ３种牛黄及安宫牛黄丸中总胆红素含量
测定方法的优化〔Ｊ〕 药物分析杂志，２０１４，３４（２）：３２９ ３３４ 〔７〕刘洪海，刘维彬，李智慧，等 ＨＰＬＣ波长切换法测定氨咖黄敏胶囊
４个成分的含量〔Ｊ〕 中国药师，２０１６，１９（１）：１８９ １９１
〔８〕钟淮滨，孙凌云，应颖 ＨＰＬＣ法测定氯芬黄敏片中马来酸氯苯那
敏和双氯芬酸钠含量〔Ｊ〕 安徽医药，２００６，１０（１２）：９２５ ９２６
复方芩黄乳膏的质量标准研究
陈　锦，何琳俐（福建中医药大学附属第二人民医院，福建福州３５０００３）
摘要：目的　通过试验建立复方芩黄乳膏的质量标准。方法　对方中黄连、黄芩、大黄、桂枝等４味药材进行薄层谱鉴别；采用高效液相
谱法测定制剂中黄芩苷的含量：谱柱为ＡｇｉｌｅｎｔＥｃｌｉｐｓｅＰｌｕｓＣ１８
谱柱（４ ６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈 ０ １％甲酸溶液（２４：７６），流速１ ０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２７０ｎｍ，柱温３０℃，进样量１０μＬ。结果　黄连、黄芩、大黄、桂枝薄层谱斑点清晰、分离度好、专属性强。结论　
本研究建立的复方芩黄乳膏质量标准简便、易行、重复性好，可用于该制剂生产过程中的质量控制。
关键词：薄层谱；高效液相谱；质量标准；复方芩黄乳膏董洁的个人资料
中图分类号：Ｒ９２７　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６ ３７６５（２０２１） ０２ ００８５ ０４
立夏的诗句唯美
作者简介：陈　锦，女（１９８３－）。职称：主管中药师。研究方向：中药鉴定与中药制剂。
  软组织损伤与骨折则是当今社会最常见的创伤，患者深受病痛折磨。骨折、脱位、骨坏死、扭挫伤所致的软组织损伤在中医骨伤科辨证中统属于“伤筋”的范畴，病机为“气滞血
胡歌老婆是谁癖、血溢脉外、脉络不通”〔１〕。现代医学骨折与软组织损
伤常采用局部固定制动的方法，但是长时间的外固定制动不仅给病人带来痛苦，而且影响局部的血液循环而使损伤愈合效果不甚理想。祖国医学在骨折与软组织损伤方面疗效比较显著，中药骨折与软组织损伤具有痛苦小、简便易
行、价廉实用等优点。复方芩黄乳膏由黄芩、黄连、桂枝、蒲黄等十余味药材加以辅料制成，能清热消肿，活血化瘀，舒筋通络，临床上使用近１０年，用于骨折、脱位、骨坏死、软组织扭挫伤初中期见以上症候者。笔者通过薄层谱定性及高效液相谱定量研究，建立复方芩黄乳膏的质量控制标准，为该制剂在生产和贮存过程中的质量把控提供依据，为日后推广奠定基础。１　仪器与试药
１ １　仪器　ＬＣ ２０ＡＴ高效液相谱仪（日本岛津，ＳＰＤ Ｍ２０ＡＰＤＡ检测器）；ＦＲＱ １０１０ＨＴ超声清洗仪（杭州法兰特超声波科技有限公司）；ＲＥ ５２９９旋转蒸发仪（上海耀特仪器科技有
ＳｔｒａｉｔＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＶｏｌ３３Ｎｏ ２２０２１