知识点19 生物技术实践
1.(2015·广东高考·T3)关于DNA的实验，叙述正确的是(  )
A.用兔的成熟红细胞可提取DNA
B.PCR的每个循环一般依次经过变性—延伸—复性三步
C.DNA溶液与二苯胺试剂混合，沸水浴后生成蓝产物
梦见人头D.用甲基绿对人的口腔上皮细胞染，细胞核呈绿，细胞质呈红
【解题指南】(1)题干关键词：提取DNA、PCR、二苯胺试剂、甲基绿。
(2)关键知识:DNA的提取与检测方法、PCR反应过程、甲基绿的作用。
【解析】选C。本题主要考查了实验的原理、选材以及试剂的使用。兔为哺乳动物，其成熟的红细胞中无细胞核，不能从中提取DNA，故A项错误;PCR每次循环都可以分为变性—复性—延伸三步，故B项错误；在沸水浴的条件下,DNA遇二苯胺变成蓝，故C项正确；甲基绿使DNA 呈现绿，不论是细胞核还是细胞质，只要含有DNA，都会呈绿，故D项错误。
2.(2015·江苏高考·T11)下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，错误的是
(  )
A.固定化酶的主要目的是实现酶的重复利用
B.溶解氧交换受阻是固定化酶应用的重要限制因素
C.固定化细胞用于生产能分泌到细胞外的产物
D.凝胶与被包埋细胞之间不是通过共价键结合
【解析】选B。本题主要考查固定化酶和固定化细胞。固定化酶制作的目的是能够顺利从发酵产物中把酶分离出来，并能够使酶反复使用，故A项正确；溶解氧交换受阻会影响细胞呼吸，是固定化细胞应用的重要限制因素，故B项错误；固定化细胞用于生产、获得细胞的代谢产物，故C项正确；将细胞包埋在多孔载体内部而制成固定化细胞，细胞并不与凝胶通过共价键结合，故D项正确。
3.(2015·江苏高考·T17)关于“腐乳的制作”实验，下列叙述错误的是(  )
A.将腐乳坯堆积起来会导致堆内温度升高，影响毛霉生长
B.腐乳坯若被细菌污染，则腐乳坯表面会出现黏性物
C.勤向腐乳坯表面喷水，有利于毛霉菌丝的生长
D.装坛阶段加入料酒，可有效防止杂菌污染
【解析】选C。本题主要考查腐乳制作的过程和材料处理的方法及目的。将腐乳坯堆积起来
会导致微生物大量繁殖，堆内温度升高，影响毛霉生长，故A项正确；正常情况下毛霉等菌种，会使豆腐表面长出一层菌丝，被细菌污染，腐乳坯表面会出现黏性物，故B项正确；适于做腐乳的豆腐含水量为70%左右，适于毛霉菌丝生长，再加水不利于腐乳成形，故C项错误；装坛时加入料酒，可抑制杂菌生长，故D项正确。
4.(2015·江苏高考·T19)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是(  )
A.高压灭菌加热结束时，打开放(排)气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上
【解题指南】关键知识：培养基的灭菌方法、倒平板的方法和接种的过程。
【解析】选D。本题主要考查微生物的分离与培养实验。高压蒸汽灭菌加热结束后，让其自然冷却后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物，故A项错误；倒平板时左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖，故B项错误；灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种，故C 项错误；皿底的标记不会因为盖子混淆而混淆，故D项正确。秘书资格考试
5.(2015·四川高考·T3)下列是以酵母菌为材料进行的实验，有关叙述错误的是
(  )
A.探究酵母菌的呼吸方式，可用溴麝香草酚蓝检测产生的CO2
B.用酵母菌发酵酿制果酒，选择酸性重铬酸钾检测产生的酒精
C.探究酵母菌种数量变化，应设空白对照排除无关变量干扰
D.用稀释涂布平板法培养计数，应选择有30～300菌落数的平板
【解题指南】(1)题干关键词:“酵母菌”“错误”。
(2)关键知识：酵母菌无氧呼吸产物的鉴定原理、探究酵母菌种数量变化的实验设计原则及计数方法。
【解析】选C。本题考查酵母菌细胞呼吸方式探究及种数量变化研究。A项，酵母菌呼吸作用产生的CO2可使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄，故正确。B项，橙的酸性重铬酸钾与酒精发生化学反应，变成灰绿，故正确。C项，探究酵母菌种数量变化，不同时间的取样即为对照，不必设空白对照，故错误。D项，菌落数若太少的话不准确，太多的话不好计数，一般选择有30～300菌落数的平板计数，故正确。
6.(2015·江苏高考·T24)下图为苹果酒的发酵装置示意图，下列叙述错误的是(多选)(  )
A.发酵过程中酒精的产生速率越来越快
B.集气管中的气体是酵母菌无氧呼吸产生的CO2
C.发酵过程中酵母菌种呈“J”型增长
D.若发酵液表面出现菌膜，最可能原因是发酵瓶漏气
【解析】选A、B、C。本题主要考查果酒的制作原理、步骤和注意事项。发酵后期，底物减少、
酒精浓度增加等因素，都会造成酒精生产速率减慢，故A项错误；发酵初期，由于发酵瓶中有
氧气，酵母菌能进行有氧呼吸产生CO2，故B项错误；酵母菌种数量先增加后减少，故C项错
误；发酵瓶漏气，会使醋酸菌等大量繁殖，从而形成表面可以观察到的菌膜，故D项正确。
7.(2015·山东高考·T35)乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。
乳糖酶的制备及固定化步骤如下:
(1)筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用      作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂
的作用是      　。从功能上讲，这种培养基属于      　。
(2)培养微生物L前，宜采用      　方法对接种环进行灭菌。
(3)纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量(相对分子质量)大小。在相同条件下，带电荷相
同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量(相对分子质量)越      。
(4)乳糖酶宜采用化学结合法(共价键结合法)进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的      　确定其应用价值。除化学结合法外，酶的固定化方法还包
括        、        、离子吸附法及交联法等。
【解析】(1)已知乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，筛选产乳糖酶的微生物L时,
宜用乳糖作为培养基中的唯一碳源，培养基中琼脂的作用是凝固剂，从功能上讲，这种培养基
属于选择培养基。
(2)为了避免杂菌污染，在培养微生物前，对接种环应采用灼烧灭菌。
(3)用电泳法纯化乳糖酶时，若在相同条件下分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量(相对分
子质量)越小，电泳速度越快。
(4)固定化酶的应用价值与酶的活性(或活力)有关，因此用化学结合法固定化乳糖酶时，可通
过检测固定化乳糖酶的活性(或活力)来确定其应用价值。固定化酶的方法包括化学结合法、
包埋法、物理吸附法、离子吸附法及交联法等。
答案:(1)乳糖　凝固剂　选择培养基  (2)灼烧　(3)小
(4)(酶)活性[或(酶)活力]  包埋法　物理吸附法(注：后两空可颠倒)
8.(2015·全国卷Ⅰ·T39)已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和
油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题:
(1)显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用    　染。微生物A产生的油脂不
易挥发，可选用      (填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。
(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物
的土壤中取样，并应选用以      为碳源的固体培养基进行培养。
(3)若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用        直接计数；若要
柳月弯弯测定其活菌数量，可选用        法进行计数。
(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在
35℃、40℃、45℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中,    ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕    ℃设计后续实验。
【解题指南】(1)题干关键词：不易挥发、直接计数、活菌数量。
(2)关键知识：提取油脂的方法、分解油脂的微生物的分离、测定微生物数量的方法和探究酶
中国模特刘雯的最适温度的方法。
【解析】(1)脂肪可被苏丹Ⅲ(Ⅳ)染液染成橘黄(红)，题干中说明微生物A产生的油脂不
易挥发，则可以采用萃取法提取微生物A中的油脂。
(2)油脂为有机化合物，富含碳元素，故为了从自然界获得能够分解油脂的单菌落，应以油脂
为唯一碳源来配制培养基。在该培养基上，能分解油脂的微生物可以正常生长，其他微生物不
能正常生长。
(3)可利用血细胞计数板计数法测定菌液中的微生物数量，活菌和死亡的细菌都会被计数，所
以测定培养液中的活菌数应采用稀释涂布平板法。
肖茵
(4)在45℃下，降解10 g油脂所需酶量最多，则该温度下酶活性最低；由题干信息可知,40℃下降解10 g油脂所需的酶量最少。应围绕40℃设置不同温度梯度来探究酶的最适温度。
写植物的作文三年级答案:(1)苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)　萃取法  (2)油脂(其他合理答案也可)
(3)血细胞计数板　稀释涂布平板(其他合理答案也可)  (4)45　40
9.(2015·全国卷Ⅱ·T39)回答与胡萝卜素有关的问题:
“β-胡萝卜素”或“γ(1)胡萝卜含有的胡萝卜素中，最主要的是    (填“α-胡萝卜素”
-胡萝卜素”)，该胡萝卜素在人体内可以转变成两分子    ，后者缺乏会引起人在弱光下视物不清的病症，该疾病称为      。胡萝卜素是      (填“挥发性”或“非挥发性”)物质。
(2)工业生产上，用养殖的岩藻作为原料提取胡萝卜素时,         
(填“需要”或“不需要”)将新鲜的岩藻干燥。
(3)现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂，应选用其中的      作为胡萝卜素的萃取剂，不选用另外一种的理由是                   
                                　。
【解题指南】(1)题干关键信息:“弱光下视物不清”“萃取剂”。
(2)关键知识：胡萝卜素不溶于水；一分子β-胡萝卜素可被氧化成两分子维生素A；含水量影响胡萝卜素的萃取效果。
【解析】本题考查胡萝卜素的提取。
(1)根据双键的数目可以将胡萝卜素划分α、β、γ三类,β-胡萝卜素是其中最主要的组成成分。一分子β-胡萝卜素在人或动物的小肠、肝脏等器官被氧化成两分子维生素A。胡萝卜素可以用来因缺乏维生素A而引起的各种疾病，如夜盲症等。胡萝卜素的化学性质比较稳定，不溶于水，是非挥发性物质。
(2)萃取的效果受到含水量、温度等条件的影响，要保证好的萃取效果，需要将岩藻进行粉碎和干燥。
(3)萃取胡萝卜素的有机溶剂应不与水混溶，而乙醇为水溶性有机溶剂，乙酸乙酯为水不溶性有机溶剂，故选乙酸乙酯。
答案：(1)β-胡萝卜素　维生素A　夜盲症　非挥发性
(2)需要　(3)乙酸乙酯　萃取胡萝卜素的有机溶剂应不与水混溶，而乙醇为水溶性有机溶剂10.(2015·广东高考·T29)泡菜是我国的传统食品之一，但制作过程中产生的亚硝酸盐对人体健康有潜在危害，某兴趣小组准备参加“科技创新大赛”，查阅资料得到下图。