纯化水微生物限度检测
计数方法适用性试验
1.供试液制备
根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均勻加热，且温度不应超过45#C。供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。
常用的供试液制备方法如下。如果下列供试液制备方法经确认均不适用，应建立其他适宜的方法。
(1)水溶性供试品取供试品，用PH7.0无菌氣化钠-蛋白胨缓冲液，或PH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1:10供试液。若需要，调节供试液pH值至6〜8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步1 0倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
2.接种和稀释
按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。
(1)试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混勻，使每lm l供试液或每张滤膜所滤过的供试液中含菌量不大于100cfu。
(2 )供试品对照组取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。
(3)菌液对照组取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加人试验菌液并进行微生物回收试验。若因供试品抗菌活性或溶解性较差的原因导致无法选择最低稀释级的供试液进行方法适用性试验时，应采用适宜的方法对供试%液进行进一步的处理。如果供试品对微生物生长的抑制作用无法以其他方法消除，供试液可经过中和、稀释或薄膜过滤处理后再加人试验菌悬液进行方法适用性试验。
供试品检查
检验量即一次试验所用的供试品量(g、m l或cm2)。
洗葡萄的方法一般应随机抽取不少于2个最小包装的供试品，混合，取规定量供试品进行检验。除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml;膜剂为100cm2;贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂还不得少于4片。
意大利旅游签证供试品的检査
按计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试品中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。
阴性对照试验以稀释液代替供试液进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长，如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调査。
1.平皿法
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平皿法包括倾注法和涂布法。除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平板。
培养和计数除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30〜35°C培养3〜5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20〜25°C培养5〜7天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15，则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。
菌数报告规则需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于lOOcfu的稀释级，作为菌数报告的依据。取最髙的平均菌落数，ij*算lg 、lm l或10cm2供试品中所含的微生物数，取两位4效数字报告。
小艺是谁如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1时，以< 1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。
2.薄膜过滤法
除另有规定外，按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备。取相当于l g 、lm l或10cm2供试品的供试液，若供试品所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液，照方法适用性试验确认的方法加至适量稀释液中，立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养。
培养和计数培养条件和计数方法同平皿法，每张滤膜上的菌落数应不超过lOOcfu苗数报告规则以相当于lg 、lm l或10cm2供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以< 1报告菌数（每张滤膜过滤lg 、lm l或10cm2供试品），或< 1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。
3. MPNxx
取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和供试品接种，所有试验管在30〜35X：
培养3〜5天，如果需要确认是否有微生物生长，按方法适用性试验确定的方法进行。记录每一稀释级微生物生长的管数，从表3査每l g 或lm l供试品中需氧菌总数的最可能数。李美琪个人资料
结果判断
需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数(包括真菌菌落数霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数(包括细菌菌落数）。若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可使用含抗生素（如氣霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红钠琼脂培养基)进行霉菌和酵母菌总数测定。使用选择性培养基时，应进行培养基适用性检查。
若采用M P N法，测定结果为需氧菌总数。
各品种项下规定的微生物限度标准解释如下：
lO ^ fu：
可接受的最大菌数为20;
102cfu：
可接受的最大菌数为200;
103cfu：
可接受_____的最大菌数为2000，依此类推。若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检査结
果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其
中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合
规定。
稀释液、冲洗液及培养基
见非无菌产品微生物限度检查：
控制菌检查法