目的：首先到一种适合该菌株利用的糖，进一步确定初始糖浓度对发酵液素代谢的影响。
张一山和杨紫狂吻图1实验材料与方法
1.1材料及设备
1.1.1菌种 红曲霉菌M1菌株 ，由2010届毕业生以红曲粉为原料分离纯化获得，保存在食品学院食品微生物实验室。
1.1.2药品
1.1.3设备 灭菌锅，培养箱，摇床，离心机，紫外可见分光光度计，电子天平，pH计等。
1.1.4培养基及试剂
（1）平板活化培养基（酸化CPDAg·L-1）：葡萄糖 20, KH2PO4 3,MgSO4 1.5, 马铃薯200，琼脂15，VB1微量，乳酸调pH5.0。
制备方法：马铃薯去皮，切成小块加水，煮沸15 min（注意火力的控制，可适当补水），用纱布过滤，滤液加葡萄糖、KH2PO4 、悲伤逆流成河结局MgSO4、琼脂，乳酸调pH至4.0。0.1MPa灭菌30 min。
（2）液体发酵培养基（g·L-1）[1]：可溶性淀粉30，酵母膏5，NaNO3 3，KH2PO4 1，MgSO4·7H2O 0.5，乳酸调pH5.0，0.1MPa灭菌30min。
[1]如何申购新股流程孙菲菲, 岳田利, 袁亚宏, 等. 红曲霉菌5040发酵产生红曲素的工艺
及其素特性研究. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2006,34(6):137~141
（3）试剂
1.2方法
1.2.1菌株活化 将保存菌种转接到酸化CPDA培养基平板上，30℃~32℃恒温培养5d，当其菌落呈现鲜艳的深红、绒毛较长且发红、培养基背面也呈鲜艳的深红时进行平板接种培养，用于后续液态发酵培养研究。
1.2.2培养方法 用打孔器在长满红曲霉菌的平板培养基上打3个直径为1 cm的菌饼转接到装有吴亦凡的血型80 mL的产素发酵培养基的三角瓶（250 mL）中，水浴摇床中30 ℃，160 r·min-1培养4d作为种子液。以接种量10%(5 mL/50 mL)将种子液转接到装有产素培养基的三角瓶（80 mL/250 mL）中，30 ℃，160 r·min-1恒温振荡培养6 d天作为发酵液，试验重复3次。
发酵过程检测项目：生物量、胞内、胞外价、pH值、总糖。
1.2.3发酵液中菌丝干重测定
取充分振荡均匀的发酵液10mL，于3 000 r／min条件下离心20 min（或农村合作医疗网上缴费怎么交2021滤纸真空抽滤），去上清液；沉淀用蒸馏水洗涤，再离心(3 000 r／min，20 min)，去上清液，重复3次；将所得的沉淀于80℃烘箱中烘至恒重，1/10000电子天平称量干重，即得生物量。
1.2.4价的测定[2,3]
菌体素价的测定（胞内素价的测定）：取10mL发酵液，于3000 r／min条件下离
心20 min，去上清液。所得沉淀用体积分数为70％的乙醇，40℃下抽提1 h，然后离心(3 000 r／min，20 min)，上清液过滤并稀释适当倍数，用双光束紫外可见分光光度计在410 nm和510 nm处，分别测定其OD值，并乘以稀释倍数，即分别得胞内黄素价和胞内红素价。
水溶性素价的测定（胞外素价的测定）：取一定体积的发酵液于3 000 r／min条件下离心20 min，取上清液，将上清液过滤并且稀释适当倍数，用双光束紫外可见分光光度计测定上述2波长处的OD值，并分别乘以稀释倍数，所得值即为胞外黄素价和胞外红素价。各价与调的计算式如下：
总黄素价=胞内黄素价+胞外黄素价；
总红素价=胞内红素价+胞外红素价；
总价=黄素价+红素价；
调=总黄素价/总红素价。
每天三瓶，平分两份，一半测生物量，一半测价。
李小龙, 张凤琴, 刘飞, 等. 氮源对红曲霉菌株HNLI产素的影响. 湖南工业大学学报,2009,23(5):22~25
吸取发酵液1mL加入9mL70%乙醇溶液试管中，加塞，摇匀，静置15min后，用70%乙醇溶液作空白对照，在410nm和510nm波长下分别测定吸光度。用吸光值乘以发酵液的稀释倍数，即为发酵液的价（U/mL）[2,3]
红曲素的计量,一般以单位重量或体积内含红素的单位表示,习惯称为价。
[2]张永权, 张亮琦, 淡家林 . 红曲素价和调分析方法探讨. 食品与发酵工业, 1985(6):
[3]李小龙, 张凤琴, 刘飞, 等. 氮源对红曲霉菌株HNLI产素的影响. 湖南工业大学学报,2009,23(5):22~25
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[3]王伟平，陈德容，吴思方. 红曲霉液态发酵法生产红素研究进展[J].武汉工业学院学报,2003,22 (4):43-45
1.2.5发酵液含糖量测定
还原糖测定方法，试验重复孙菲菲3次
1.2.6发酵液pH值测定
精密pH试纸或pH计测定，试验重复3次。
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