番茄的植物组培
14生物科学一班
201412200501026 朱少峰
摘要
目的:传统西红柿中的番茄红素含量相当少,并且大量存在于西红柿籽周围的类脂物中,所以我们希望通过植物组培的方法获得高产量番茄红素的番茄。方法:先对番茄种子进行杀菌消毒,进行培育,再利用培养的幼苗选取外植体进行愈伤组织培养,发育成成熟植株。结果:得到了高产量番茄红素的番茄。结论:利用组织培养而成的番茄番茄红素的产量较传统种植多。
关键词:番茄红素 愈伤培养 激素配比 外植体培养
前言
番茄营养丰富,风味香郁,深受人们的喜爱,在世界各地被广泛种植,成为各国的主要蔬菜作
物之一.由于它是典型的双子叶植物,具有自花授粉、染体图谱较清楚、较易栽培等优点,成为生物学领域研究最多的模式植物之一。近年来发现番茄中的番茄红素和胡萝卜素具有抗氧化、各种癌症等功能,因此其食用价值和经济价值备受关注。
一、试验主要仪器和试剂
仪器
烧杯(100ml 3个,用于放初步处理后的外植体;1L 1个,用作废液缸;250ml 3个,包好牛皮纸后灭菌,分别装酒精、和无菌水)、电子天平、称量纸(若干)、钥匙(若干)、玻璃棒(一根)、量筒(100ml和10ml各1个),胶头滴管(1个)、高压灭菌锅、超净工作台、保鲜膜、酒精灯、记号笔(或标签纸)、培养皿、试管
试剂
75% 酒精、大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、铁盐母液、无菌水、0.1%HgCl2、蔗糖、琼脂、6-BA、NAA
二、实验方法
1培养基的选择
番茄汁 50mL 酵母抽提液 5g 肉膏 10g 乳糖 20g 葡萄糖 2g k2HPO4 2g
吐温80 1g 乙酸钠 5g 琼脂 15g 水加至1000mL pH6。8±0。2
2。MS培养基(1L)
大量元素 50ml 钙盐 50ml 微量元素 10ml 维生素 10ml 铁盐 5ml 糖 50g 肌醇 0.1g 琼脂 4。5g
注意: 1)要在前种物质全部溶解后才能加入后种物质。
2)加热过程中要不停地搅拌。
当半成品的溶液沸腾时立即从电炉上取下搪瓷杯,放在实验桌上,用玻璃棒沾取少量的液体滴在酸性ph试纸上,用0.1mol/L的NaOH或0。1mol/L的HCl调整液体的pH至5.6—5.8,最后在搪瓷杯中用蒸馏水定容至1L
3.培养基的分装
准备30支试管,分成两组,一组不添加任何激素,一组添加6—BA、NAA激素
番茄的种植方法4.番茄种子的处理
自来水冲洗种子20min;0。1%的浸泡5~10min,依照种皮硬度而定,所以番茄种子我们只消毒5min;然后用无菌水冲洗4次;
5.接种
1)将所需物品放入超净工作台:三种实验材料、灭菌好的培养基、无菌水、培养皿、吸水纸、操作工具、空烧杯、75%酒精、0.1%溶液、废液缸、刀片、酒精灯、打火机
2)进入接种室前,需要洗净手和手腕.进入超净工作台内需用75%酒精纱布擦拭手、手腕,再擦培养基瓶和超净工作台。
3)剪、镊消毒:接种前剪、镊应插入75%酒精瓶中,取出后置于酒精灯外焰上彻底灼烧,灼烧时应将剪口、镊口张开,烧至剪、镊上火焰熄灭为止,冷却后方可进行接种。 接种后仍需灼烧并插回75%酒精的磨口瓶待用。注意每次取出时剪口并拢,不可接触磨口瓶和其它器皿,并保持尖端向下.
4)种子接种:将处理好的种子无菌操作放进准备好的果酱瓶培养基中,一般放2~3颗
5)外植体的处理
1。选取番茄的茎尖。 再生能力强,其次是遗传稳定性好.
2.外植体的初处理。将外植体置于医用口缸内,用皂粉清洗干净附着在材料上的泥沙等杂质;并用自来水冲洗干净.
3.外植体的消毒灭菌。将初处理过的材料在无菌操作台上用75%酒精表面消毒10s,再用无菌水冲洗2—3次;然后再用10%次氯酸钙消毒10—15min(此步骤能有效杀灭真菌),再用无菌水冲洗2-3次;然后再用3‰(Hgcl2)消毒10min(此步骤能有效钝化细菌),再用无菌水冲洗2—3次,洗净附着在材料上的药剂。
4。将消毒灭菌后的外植体置于灭过菌的滤纸上,吸干水分。
5。接种时,用剪刀去除外植体取材时的伤口部位,以尽力保障接种材料不带菌。
2.外植体的初处理。将外植体置于医用口缸内,用皂粉清洗干净附着在材料上的泥沙等杂质;并用自来水冲洗干净.
3.外植体的消毒灭菌。将初处理过的材料在无菌操作台上用75%酒精表面消毒10s,再用无菌水冲洗2—3次;然后再用10%次氯酸钙消毒10—15min(此步骤能有效杀灭真菌),再用无菌水冲洗2-3次;然后再用3‰(Hgcl2)消毒10min(此步骤能有效钝化细菌),再用无菌水冲洗2—3次,洗净附着在材料上的药剂。
4。将消毒灭菌后的外植体置于灭过菌的滤纸上,吸干水分。
5。接种时,用剪刀去除外植体取材时的伤口部位,以尽力保障接种材料不带菌。
6)注意事项
① 操作人员的头、胳膊等不得进入台内
② 操作人员不得随意谈话、说笑,以免造成污染
③ 用酒精对双手消毒时,务必待酒精彻底挥发后再靠近酒精灯火焰,以免火焰伤
④ 台外人员走动要轻、动作要小
6.培养:
培养室的温度应控制在25~28℃,每日光照时间为10~12h,光照强度为1600~2000lx。 此外还要定期观察是否出现污染。
7。实验结果观察和分析
在接种后的一周、两周和三周,分别观察各锥形瓶内愈伤组织的形成情况和污染情况,做好记录工作。在三次记录工作完成之后对结果进行分析,计算出诱导率和污染率,并做相应的实验结果分析。
诱导率(%)=形成愈伤组织数/总接种数×100
污染率(%)=污染数/总接种数×100
8.实验结果
试管中种子成功发芽,但仍有很多种子因污染问题不能发芽。
9.讨论
本次实验首先第一感觉是很难,因为教学与实验之间相隔一个很大的空白期,所以实验的
时候并没有很好的运用理论课的只是,而是盲目的跟随他人的操作,导致污染率其高。有些组的外植体完全被污染了,所以实验失败。对番茄种子的消毒过程操作不熟练。然而,有些添加的激素的试管中,番茄种子成功发芽,也变命了通过完善的激素配比,可以使番茄发芽率进一步提高
10.参考文献
1。雷0柱,胡0荣 生物工程下游技术实验手册 北京.科学出版社,2010—11
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5。潘瑞炽,王小菁,李娘辉. 植物生理学[M]. 北京: 高等教育出版社, 2008: 175
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