新疆伊犁地区苹果黑星病病原菌鉴定㊃生物学特性及毒力测定研究
王华１，唐晓雪２，任毓忠２∗㊀
（１．伊犁职业技术学院，新疆伊宁８３５０００；２．石河子大学，新疆石河子８３２００３）
摘要㊀为明确伊犁地区苹果黑星病病原菌的种类和生物学特性，结合病原菌的形态特征㊁培养性状和分子生物学进行鉴定，确定引起新疆伊犁地区苹果黑星病的病原为Ｖｅｎｔｕｒｉａｉｎａｅｑｕａｌｉ㊂通过不同温度㊁ｐＨ及培养基等对苹果黑星病菌生物学特性研究表明，病菌生长的最佳培养温度在２０ħ左右，最适生长ｐＨ为７和８，在ＯＡ培养基上的生长速度最快，在ＯＭＡ培养基上生长最缓慢㊂室内毒力测定表明，供试４种原药中的３种对苹果黑星病菌菌丝的ＥＣ５０从小到大依次是吡唑醚菌酯＜啶酰菌胺＜嘧霉胺㊂关键词㊀伊犁地区；苹果黑星病；病原菌；鉴定；生物学；毒力中图分类号㊀Ｓ４３６．６１１．１㊀㊀文献标识码㊀Ａ㊀㊀文章编号㊀０５１７－６６１１（２０２３）１０－０１１４－０５
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．０５１７－６６１１．２０２３．１０．０２５㊀㊀㊀㊀㊀开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ
）：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄＶｉｒｕｌｅｎｃｅｏｆＡｐｐｌｅＳｃａｂｉｎＹｉｌｉＲｅｇｉｏｎｏｆＸｉｎｊｉａｎｇ
ＷＡＮＧＨｕａ１，ＴＡＮＧＸｉａｏ⁃ｘｕｅ２，ＲＥＮＹｕ⁃ｚｈｏｎｇ２㊀（１．ＹｉｌｉＶｏｃａｔｉｏｎａｌａｎｄＴｅｃｈｎｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｙｉｎｉｎｇ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ８３５０００；２．ＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉ⁃ｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｈｅｚｉ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ８３２００３）
Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀ＩｎｏｒｄｅｒｔｏｃｌａｒｉｆｙｔｈｅｓｐｅｃｉｅｓａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａｏｆａｐｐｌｅｓｃａｂｉｎＹｉｌｉａｒｅａ，ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｃｕｌｔｕｒｅｃｈａｒａｃｔｅｒｓａｎｄｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａ，ｉｔｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｈａｔｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｃａｕｓｉｎｇａｐｐｌｅｓｃａｂｉｎＹｉｌｉａｒｅａｏｆＸｉｎｊｉａｎｇｗａｓＶｅｎｔｕｒｉａｉｎａｅｑｕａｌｉ．Ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆａｐｐｌｅｓｃａｂａｔｄｉｆ⁃ｆｅｒｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ，ｐＨａｎｄｍｅｄｉｕｍｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｕｌｔｕｒｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｆｏｒｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｗａｓａｂｏｕｔ２０ħ，ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｇｒｏｗｔｈｐＨｗａｓ７ａｎｄ８，ａｎｄｔｈｅｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｏｎｔｈｅＯＡｍｅｄｉｕｍｗａｓｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔ．ＴｈｅｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｏｎＯＭＡｍｅｄｉｕｍｗａｓｔｈｅｓｌｏｗｅｓｔ．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｔｏｘｉｃｉｔｙｔｅｓｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＥＣ５０ｏｆ３ｏｆｔｈｅ４ａｃｔｉｖｅｄｒｕｇｓａｇａｉｎｓｔｔｈｅｍｙｃｅｌｉａｏｆＰ．ａｕｒｅｕｓｗａｓｐｙｒａｚｏｌｅｅｓｔｅｒ＜ｄｉｍｅｔｒｉａｍｉｎｅ＜ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｉｌ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ＹｉｌｉＲｅｇｉｏｎ；Ａｐｐｌｅｓｃａｂ；Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａ；Ｉｎｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｂｉｏｌｏｇｙ；Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ
基金项目㊀新疆维吾尔自治区自然科学基金项目（２０２０Ｄ０１Ａ１５）㊂
作者简介㊀王华（１９７３ ），女，新疆伊宁人，副教授，硕士，从事果树病
害防治研究㊂∗通信作者，副教授，硕士，从事分子植物病理学研究㊂
收稿日期㊀２０２２－０６－１９
㊀㊀苹果黑星病是由真菌Ｖｅｎｔｕｒｉａｉｎａｅｑｕａｌｉ引起的病害，是我国重要的外来检疫性病害［１］㊂该病害在新疆伊犁地区普遍发生，遍及特克斯县㊁伊宁县㊁新源县㊁伊宁市㊁尼勒克县等苹果种植区，在嘎啦㊁红富士㊁红星㊁秦冠㊁红津轻等品种上危害严重，病叶率达８０％以上，病果率可达３０％左右，严重制约了伊犁地区特林果业的可持续发展［２］㊂国内学者对苹果黑星病的研究集中于田间发生危害调查㊁症状识别及田间化学防治方面，新疆对苹果黑星病的研究主要集中在大田药剂防治方面㊂苹果黑星病病原菌的研究在国内主要集中于西北农林科技大学，而新疆的苹果黑星病病原菌尚未见报道［３
－１９］
㊂为保护伊犁地区苹果产业的发展，搞清伊犁地区苹
果黑星病病原菌的种类及生物学特性，笔者从形态学和分子生物学方面对苹果黑星病菌进行了鉴定，并对苹果黑星病菌的生物学特性及毒力测定进行研究，以期为病害的发生规律㊁综合防治以及抗病育
种提供理论依据㊂１㊀材料与方法
１．１㊀苹果黑星病的病原鉴定
１．１．１㊀病样的采集和症状描述㊂在苹果黑星病发病盛期，采集田间发病症状明显的苹果黑星病果实和叶片，用密封袋分装后带回实验室内，并对典型病样进行拍照和症状描述㊂１．１．２㊀病原菌的分离㊁纯化和代表性菌株的选择㊂将田间采集的苹果黑星病病样用７５％乙醇表面消毒后晾干，病菌分离分别采用组织块分离法和划线分离法㊂组织块分离法：在超净工作台内用灭菌解剖刀在病健交界处直接切取５ｍｍˑ
５ｍｍ的病样，在０．１％中浸泡２０ｓ后无菌水冲洗３次，用
无菌滤纸吸干，然后放置在ＰＳＡ培养基上；划线分离法：在火焰灭菌后的载玻片上滴加无菌水，然后用灭菌的解剖刀将叶片或果实表面病斑上的病菌轻轻刮入灭菌水中，用灭菌的接种环蘸取孢子悬浮液在ＰＳＡ平板上划线㊂最后将分离后的平板置于恒温２０ħ暗培养１４ｄ㊂待菌落出现后，根据采集地点㊁菌落特点等特征选取代表性菌株进行单孢纯化并于ＰＳＡ培养基上４ħ保存待用㊂
１．１．３㊀病原菌的鉴定㊂１．１．３．１㊀形态学鉴定㊂形态学鉴定主要参考Ｎｅｌｓｏｎ＆Ｔｏｕｓ⁃
ｓｏｕｎ＆Ｍａｒａｓａｓ的分类系统，依据病菌分生孢子的形态和着生方式，分生孢子梗的特征，厚垣孢子的有无，菌落的颜特征及其生长速度进行鉴定㊂将供试菌株移接至ＰＳＡ培养基上㊂在ＰＳＡ培养基上恒温２０ħ暗培养１４ｄ后观察其菌落形态，分别测量５０个分生孢子和５０个厚垣孢子大小；观察分生孢子梗和分生孢子的着生状态并拍照㊂
１．１．３．２㊀分子生物学鉴定㊂将供试菌株在ＰＳＡ培养基上培养１４ｄ后，用无菌解剖刀将其菌丝刮至２ｍＬ离心管中㊂使用ＢｉｏＦｌｕｘ真菌ＤＮＡ提取试剂盒提取供试菌株的基因组ＤＮＡ㊂使用真菌ＩＴＳ区的通用引物（ＩＴＳ１５ᶄ－３ᶄＴＣＣＧＴＡＧＧＴ⁃ＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ，ＩＴＳ４５ᶄ－３ᶄＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ，扩增片段５２０ｂｐ，退火温度５８ħ［２０］）对供试菌株ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增㊂反应程序均为９４ħ预变性５ｍｉｎ，９４ħ变性４０ｓ，
５８ħ退火４０ｓ，７２ħ延伸３０ｓ，３５个循环，７２ħ再次延伸７ｍｉｎ㊂ＰＣＲ产物经１％琼脂糖凝胶电泳检测后送至上海生工生物有限公司测序㊂测序结果至ＢＬＡＳＴ比对和分析，下载相似性高且同时含有ｒＤＮＡ－ＩＴＳ和ＴＥＦ－１α基因的黑星孢属（Ｖｅｎｔｕｒｉａ）参考菌株的序列㊂按照ｒＤＮＡ－ＩＴＳ和ＴＥＦ－１α㊀㊀㊀
安徽农业科学，Ｊ．ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃ．Ｓｃｉ．２０２３，５１（１０）：１１４－１１８
的顺序依次拼接，并以苹果果实黑点病的病原粉红聚端孢菌（ＴｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｕｍｒｏｓｅｕｍＬｉｎｋｅｘＦｒｉｅｓ）为外，使用ＭＥＧＡ５．０软件中邻接法（Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇＭｅｔｈｏｄ）构建系统发育树㊂１．２㊀苹果黑星病菌生物学特性的测定
１．２．１㊀温度对病菌生长的影响㊂将供试菌株在ＰＳＡ培养基上培养１４ｄ后，在无菌条件下从菌落的边缘用灭菌打孔器打成５ｍｍ的菌饼，供如下生物学特性测定使用㊂分别将菌饼移接至ＰＳＡ培养基上，置于５㊁１０㊁１５㊁２０㊁２５㊁３０和３５ħ的恒温箱中进行黑暗培养㊂１４ｄ后测量菌落直径并拍照㊂每种处理设置３个重复㊂
１．２．２㊀ｐＨ对病菌生长的影响㊂用ＨＣｌ和ＮａＯＨ将ＰＳＡ培养基的ｐＨ分别调至４㊁５㊁６㊁７㊁８㊁９㊁１０㊁１１，将菌饼移接至不同ｐＨ的ＰＳＡ培养基上，２５ħ恒温黑暗培养㊂１４ｄ后测量菌落直径并拍照，每种处理设置３个重复㊂
１．２．３㊀培养基对病菌生长的影响㊂将菌饼分别移接至马铃薯蔗糖培养基（ＰＳＡ）㊁马铃薯葡萄糖培养基（ＰＤＡ）㊁索莱宝麦芽汁琼脂培养基（ＭＥＡ）㊁燕麦琼脂（ｏａｔｍｅａｌａｇａｒ，ＯＡ）㊁玉米粉琼脂（ｃｏｒｎｍｅａｌａｇａｒ，ＣＭＡ）培养基上，２５ħ恒温黑暗培养㊂１４ｄ后测量菌落直径并拍照㊂
１．２．４㊀数据分析㊂用Ｅｘｃｅｌ２０１０进行数据统计，用ＳＰＳＳ１９．０对数据进行多重
比较和方差分析㊂
１．３㊀几种杀菌剂对苹果黑星菌的毒力测定１．３．１㊀供试菌株㊂选用新疆伊犁地区苹果黑星菌代表性菌株进行毒力测定试验㊂
１．３．２㊀供试药剂㊂供试４种原药药剂名称㊁生产厂家以及质量浓度见表１㊂
１．３．３㊀试验方法㊂采用菌丝生长速率法测定各药剂对病原菌生长的抑制情况㊂使用Ｎ，Ｎ－二甲基甲酰胺将原药溶解配制成高浓度母液，在超净工作台内使用０．２２μｍ细菌过滤器将母液过滤至１０ｍＬ离心管中待用㊂按照５种已设定好的浓度，分别将不同量的母液加入融化冷却至４５ħ左右的
ＰＤＡ培养基中，使得药剂与培养基混匀后制成相对质量浓度梯度（表１）的含药培养基㊂以不加入药剂的ＰＤＡ培养基为空白对照，每组处理３个重复㊂
表１㊀供试药剂及浓度
Ｔａｂｌｅ１㊀Ｔｅｓｔｒｅａｇｅｎｔｓａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
药剂
Ｒｅａｇｅｎｔ生产厂家
Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒ质量浓度
Ｍａｓｓｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎʊｍｇ／Ｌ９８％多菌灵９８％ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ江苏耕耘化学有限公司０．１㊁０．２㊁０．４㊁０．８㊁１．６９８％啶酰菌胺９８％ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ江苏耕耘化学有限公司０．４㊁０．８㊁１．６㊁３．２㊁６．４９７％吡唑醚菌酯９７％ｐｙｒａｚｏｌｉｎ江苏耕耘化学有限公司０．１㊁０．２㊁０．４㊁０．８㊁１．６９６％嘧霉胺９６％ａｚｙｒｉｄａｍｉｄｅ江苏耕耘化学有限公司４㊁８㊁１６㊁３２㊁６４
㊀㊀将苹果黑星菌培养１４ｄ后，用５ｍｍ灭菌打孔器打取菌饼若干，供毒力测定使用㊂将菌饼移接至含药培养基以及对照培养基中央，每种药剂设置５个梯度，２５ħ恒温黑暗培养，１４ｄ后测量菌落直径并拍照㊂
计算出菌丝生长抑制率，即抑制率＝（对照菌落增长直径－处理菌落增长直径）／对照菌落增长直径ˑ１００％㊂使用ＳＰＳＳ１９．０软件基于Ｐｒｏｂｉｔ回归法对所得数据进行毒力回归方程分析得到半数有效浓度（ＥＣ５０）［２１］㊂
２㊀结果与分析
２．１㊀苹果黑星病症状㊀苹果黑星病在新疆伊犁地区一般从５月中旬开始发病，７ ８月病害达到高
峰期，病菌主要感染叶片和果实，也能危害叶柄㊁花和幼嫩的枝条等部位，主干和主枝不被感染㊂叶片感病，病斑大多出现在叶面上，叶缘和叶边很少出现，病斑初为淡灰绿的圆形褪绿斑，后颜逐渐加深，变成褐或灰褐㊁黑，病斑在叶片正面微微隆起，边缘明显，叶片背面病斑边界不明显，颜淡褐或灰黑，较正面颜浅，表面生浅褐绒状霉层，病叶易卷曲；随着病斑的扩展，后期病叶上多个病斑融合，病斑中央组织易破裂穿孔，严重时整个叶片卷曲干枯死亡㊂果实发病从幼果期至成熟期均可受害，果实上的病斑多为圆形，少椭圆形或卵圆形，初期淡黄绿或灰褐，后逐渐变为褐或黑，病斑处果面凹陷明显，表面生绒状霉层；后期病斑从中心向四周开始硬化和龟裂，形成中央黑周围灰黑的病斑，且多个病斑合并形成大的不规则形的坏死斑，病斑大多只在果面扩展，向果肉内纵向扩展不明显（图１）㊂但病果较健康果实生长缓慢，单果重量明显较小，病斑对果实品质的影响严重㊂２．２㊀病原菌鉴定
２．２．１㊀形态学鉴定㊂苹果黑星菌的菌丝黑，有隔，在ＰＳＡ培养基上菌落墨绿至黑，气生菌丝明显，表面短绒毛状
（图２ａ）㊂分生孢子梗丛生，直立或稍弯曲，圆柱状，不分枝，深橄榄㊁淡褐或黑，基部膨大，１ ２个隔膜，分生孢子梗上有环痕，大小为（２２．４ ６５．３）μｍˑ（６ ８）μｍ，分生孢子梗直径明显粗于菌丝体，环痕式延伸；分生孢子上着生１ ２个分生孢子，分生孢子０ １隔膜，偶有２个以上隔膜，分隔处略隘缩，基部细胞明显大于顶部细胞，倒梨形或倒棍棒状，淡褐至褐或橄褐
，孢基平截，表面光滑或具小疣突，１６．９２ ３５．６３（２５．６３）μｍˑ５．１０ １２．７３（７．６４）μｍ；培养２１ｄ后，菌丝上形成黑或淡黑的厚垣孢子，厚垣孢子顶生或间生在菌丝上，单生或多个串生，球形㊁卵圆形㊁长圆形，大小为６．８０ ２９．３２（１５．２０）μｍˑ５．７９ ２２．８３（１２．６９）μｍ（图２ｂ㊁ｃ㊁ｄ）㊂依据病原的形态特征，与已报道的苹果黑星病菌（Ｖｅｎｔｕｒｉａｉｎａｅ⁃ｑｕａｌｉｓ）较一致，将引起伊犁地区苹果黑星病的病原初步确定为Ｖｅｎｔｕｒｉａｉｎａｅｑｕａｌｉｓ［２１－２３］㊂
２．２．２㊀分子生物学鉴定㊂采用真菌通用引物ＩＴＳ１／ＩＴＳ４对供试菌株ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，在ＮＣＢＩ进行Ｂｌａｓｔ对比，扩增产物片段大小为５２６ｂｐ，与来自印度㊁中国和荷兰的Ｖｅｎｔｕｒｉａｉｎａｅ⁃
５１１
５１卷１０期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀王华等㊀新疆伊犁地区苹果黑星病病原菌鉴定·生物学特性及毒力测定研究
ｑｕａｌｉｓ（登录号ＭＺ８２０００２．１㊁ＭＮ９５８６７３．１和ＫＦ１５６０４０．１）相似性达９９．４２％ １００％㊂
对供试菌株进行ＩＴＳ／ＴＥＦ－１α联合序列构建系统发育
树（图３）㊂供试菌株均与Ｖｅｎｔｕｒｉａｉｎａｅｑｕａｌｉｓ聚在同一个分支上，与引起苹果黑星病和梨黑星病的其他病原物（Ｖｅｎｔｕｒｉａｎａｓｈｉｃｏｌａ和Ｖｅｎｔｕｒｉａｐｉｒｉｎａ）都处于不同的分支上，
且与引起
图１㊀苹果黑星病的田间症状Ｆｉｇ．１㊀Ｆｉｅｌｄｓｙｍｐｔｏｍｓｏｆａｐｐｌｅ
ｓｃａｂ
图２㊀苹果黑星病菌形态特征
Ｆｉｇ．２㊀Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆａｐｐｌｅ
ｓｃａｂ
图３㊀基于ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列构建系统发育树
Ｆｉｇ．３㊀ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃｔｒｅｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｂａｓｅｄｏｎｒＤＮＡ⁃ＩＴＳｓｅｑｕｅｎｃｅ
６
１１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２３年
苹果果实黑点病的病原粉红聚端孢菌（Ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｕｍｒｏｓｅｕｍ）的系统发育关系较远㊂２．３㊀苹果黑星病菌生物学特性
２．３．１㊀温度对病菌生长的影响㊂苹果黑星病菌在１０ ２５ħ均可生长，但温度对苹果黑星病菌生长的影响极其显著，
５ħ以下和３０ħ以上不能生长㊂病菌在２０ ２５ħ生长速度较快，尤其是２０ħ生长速度最快，２５ħ生长速度次之，２０ħ以下随温度降低生长速度逐步变缓慢，高温不利于病菌的生长㊂这与已报道的一致，在病菌分离中也发现，在培养温度高于２５ħ时，很难有分离的菌落产生，当培养温度调整到
２０ħ时，不管是组织块分离法还是划线分离，５ ７ｄ后均有目标菌落出现，因此，在苹果黑星病的分离培养中，培养温度必须控制在２５ħ以内，尤以（２０ʃ２）ħ为最佳培养温度㊂这也与新疆苹果黑星病的发生现状相吻合，新疆目前只在夏季温度较低的北疆部分地区（伊犁㊁塔城和阿勒泰）有苹果黑星病的发生和危害，夏季温度相对较高的阿克苏地区目前无该病害的发生和危害，这与病菌对温度的适应性关系密切（图
４㊁５）㊂
图４㊀苹果黑星病菌在不同温度下的菌落形态
Ｆｉｇ．４㊀Ｃｏｌｏｎｙｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙｏｆａｐｐｌｅｓｃａｂａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ
注：不同小写字母表示不同温度间差异显著（Ｐ＜０．０５）㊂
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅ⁃
ｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ（Ｐ＜０．０５）．
图５㊀温度对病菌生长的影响
Ｆｉｇ．５㊀Ｅｆｆｅｃｔｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｂａｃｔｅｒｉａ２．３．２㊀ｐＨ对病菌生长的影响㊂由图６可知，苹果黑星病菌菌丝生长对ｐＨ不太敏感，在ｐＨ４ １１时均可生长㊂最适生长ｐＨ为７和８，１４ｄ菌落的直径分别为４．１６和４．０８ｃｍ；ｐＨ为７时菌落生长最快，菌落在培养基ｐＨ１１时生长速度最慢，仅为１．４９ｃｍ，其他ｐＨ条件下，菌落的生长速度居中㊂２．３．３㊀培养基对病菌生长的影响㊂由图７可知，苹果黑星病菌在供试５种培养基上均可生长㊂ＯＡ培养基上的生长速度最快，１４ｄ的菌落直径达３．９１ｃｍ，在ＰＤＡ和ＰＳＡ培养基上的生长速度次之，菌落直径分别为３．７８和３．７３ｃｍ；在ＯＭＡ和ＭＥＡ培养基上的生长速度较慢，１４ｄ的菌落直径仅为２．０１和２．４５ｃｍ，表明苹果黑
星病菌对培养基有较强的选择性㊂２．４㊀几种杀菌剂对苹果黑星菌的毒力测定㊀通过毒力测定试验发现供试４种药剂对苹果黑星病菌菌丝均有一定的抑制性㊂由表２可知，多菌灵对病原菌菌丝的抑制效果最好，药剂浓度为０．１ｍｇ／Ｌ时，菌丝抑制率仍达１００％，而吡唑嘧菌酯㊁９８％啶酰菌胺㊁嘧霉胺则表现为随着药剂浓度的增加，菌丝抑制率升高，其中９８％啶酰菌胺的浓度为６．４ｍｇ／Ｌ时，
菌
注：不同小写字母表示不同ｐＨ间差异显著（Ｐ＜０．０５）㊂
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅ⁃
ｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐＨ（Ｐ＜０．０５）．
图６㊀ｐＨ对病菌生长的影响
Ｆｉｇ．６㊀ＥｆｆｅｃｔｏｆｐＨｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆ
ｂａｃｔｅｒｉａ
注：不同小写字母表示不同培养基间差异显著（Ｐ＜０．０５）㊂Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｏｗｅｒｃａｓｅｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅ⁃
ｔｗｅｅｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉａ（Ｐ＜０．０５）．
图７㊀培养基对病菌生长的影响
Ｆｉｇ．７㊀Ｅｆｆｅｃｔｏｆｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉａｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｂａｃｔｅｒｉａ
丝抑制率达１００％㊂
㊀㊀根据以上４种药剂的试验数据进行回归统计分析，回归直线与观测值的拟合程度即Ｒ２均大于０．６０，说明毒力回归
７
１１５１卷１０期㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀王华等㊀新疆伊犁地区苹果黑星病病原菌鉴定·生物学特性及毒力测定研究
表２㊀不同药剂对苹果黑星病菌的抑制效果
Ｔａｂｌｅ２㊀Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｒｅａｇｅｎｔｓｏｎａｐｐｌｅｓｃａｂ
药剂Ｒｅａｇｅｎｔ
药剂浓度
Ｒｅａｇｅｎｔ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｍｇ／Ｌ
菌落直径
Ｃｏｌｏｎｙ
ｄｉａｍｅｔｅｒｃｍ
抑制率
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅ
％
多菌灵Ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ０．１０㊀１００㊀
０．２０１００
０．４０１００
０．８０１００
１．６０１００
ＣＫ３．６８
吡唑嘧菌酯０．１２．５５２７．９７Ｐｙｒａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎ０．２１．７６５０．１９
０．４１．１３６８．０８
０．８０．８６７５．６１
１．６０．８１７７．１２
ＣＫ３．５４
９８％啶酰菌胺０．４１．２８６６．３２９８％ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅ０．８１．１９６８．６８
１．６０．９３７５．６６
３．２０．７９７９．２１
６．４０１００
ＣＫ３．８０
嘧霉胺４２．３９３５．４１Ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｉｌ８１．９０４８．６５
１６１．３３６３．９６
３２１．２６６５．８６
６４０．８３７７．６１
ＣＫ㊀３．７０
方程与观测值拟合程度较好，可作为理论依据进行参考㊂供试４种药剂中的３种对苹果黑星病菌菌丝的ＥＣ５０由小到大依次为吡唑醚菌酯＜啶酰菌胺＜嘧霉胺㊂其中吡唑醚菌酯的ＥＣ５０为０．２２５９ｍｇ／Ｌ，其次为啶酰菌胺，ＥＣ５０为０．４６８２ｍｇ／Ｌ㊂而防效最差的药剂为嘧霉胺，ＥＣ５０高达０．９５２８ｍｇ／Ｌ（表３）㊂表３㊀４种药剂对苹果黑星病菌室内毒力测定结果
Ｔａｂｌｅ３㊀Ｉｎｄｏｏｒｔｏｘｉｃｉｔｙｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔｓｏｆｆｏｕｒｋｉｎｄｓｏｆｒｅａｇｅｎｔｓｔｏａｐｐｌｅｓｃａｂ
药剂Ｒｅａｇｅｎｔ
毒力回归方程
Ｔｏｘｉｃｉｔｙｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ
ｅｑｕａｔｉｏｎ
ＥＣ５０
ｍｇ／ＬＲ２
多菌灵Ｃａｒｂｅｎｄａｚｉｍ
啶酰菌胺Ｐｙｒｉｍｉｄｉｎｅｙ＝２．２９９６ｘ＋５．７５８００．４６８２０．６０９７吡唑醚菌酯Ｐｙｒａｚｏｘｙｓｔｒｏｂｉｎｙ＝０．９１０４ｘ＋５．５８８１０．２２５９０．８６３０嘧霉胺Ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｉｌｙ＝０．８９９９ｘ＋４．１４２６０．９５２８０．９５８５
３㊀结论
根据病原菌的形态特征㊁培养性状和分子生物学鉴定结果，确定引起新疆伊犁地区苹果黑星病的病原为Ｖｅｎｔｕｒｉａｉｎ⁃ａｅｑｕａｌｉ㊂通过不同温度㊁ｐＨ及培养基等对苹果黑星病菌生物学特性研究表明，病菌对温度的适应性差异较大，（２０ʃ
２）ħ是病菌生长的最佳培养温度，高温不利于病菌的生长；苹果黑星病菌对ｐＨ的适应范围较宽，最适生长ｐＨ为７和８；苹果黑星病菌对培养基有较强的选择性，ＯＡ培养基上的生长速度最快，在ＯＭＡ培养基上生长最缓慢，且菌丝较稀疏㊂以上结果和胡小平等［２２－２３］的苹果黑星病菌生长
适温为１５ ２０ħ，最适ｐＨ５．０ ６．５及在燕麦培养基上菌落生长较差有一定差异，可能是地域不同所导致㊂
４种杀菌剂原药对苹果黑星病原菌的毒力测定结果表明，４种药剂在不同浓度下对该病原菌均有不同程度的抑制作用，毒力强弱也不同㊂整体趋势表现为随着药剂浓度的增加，菌丝抑制率升高㊂４种原药对苹果黑星病菌室内毒力测定表明，供试４种药剂中的３种对苹果黑星病菌菌丝的ＥＣ５０由小到大依次是吡唑醚菌酯＜啶酰菌胺＜嘧霉胺㊂
苹果apple id注册
参考文献
［１］中华人民共和国农业部．农业部公告第８６２号：中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录［Ａ］．２００７－０５－２９．
［２］王华，陈卫民，麦尔旦，等．伊犁河谷苹果黑星病的发生危害和综合防治技术［Ｊ］．北方园艺，２０１１（１５）：１８９－１９１．
［３］赵彦生，杨正祥．苹果黑星病在礼县的发生情况与防治措施［Ｊ］．甘肃农业科技，２００４（２）：４７－４８．
［４］隋志义，李成林，韩好学，等．大苹果黑星病发生分布调查报告［Ｊ］．吉林农业科学，１９
８１（３）：７６－７８．
［５］皮素琴，高九思，侯春霞，等．豫西地区苹果黑星病发生危害及防治技术［Ｊ］．安徽农业科学，２００７，３５（４）：１００５－１００６．
［６］黄丽丽，张管曲．怎样识别和防治苹果黑星病［Ｊ］．西北园艺，１９９７（３）：２７．
［７］田雪亮，梁振宇，杨家荣，等．苹果黑星病的症状类型及时间动态［Ｊ］．西北农林科技大学学报（自然科学版），２００３，３１（Ｓｌ）：１９－２１．
［８］胡小平，杨家荣，田雪亮，等．渭北旱塬苹果黑星病的初侵染来源［Ｊ］．植物病理学报，２００８，３８（１）：８３－８７．
［９］罗康宁．苹果黑星病在庆阳市发生㊁扩展㊁蔓延及防治对策［Ｊ］．中国植保导刊，２００５，２５（８）：２４－２５．
［１０］苟建军，杨家荣，李随院，等．陕西苹果主产区苹果黑星病病情分布及防治对策［Ｊ］．陕西农业科学，２００５，５１（２）：７６－７７．
［１１］刘立新，武志坚．苹果黑星病的发生规律与防治方法［Ｊ］．现代园艺，２００９（４）：５５．
［１２］刘杰，陈怀武．苹果黑星病的发生规律与防治技术［Ｊ］．河北林业科技，２００４（１）：５２．
［１３］聂巍，赵斌．盆周山区红富士苹果黑星病综防技术［Ｊ］．四川农业科技，２００５（８）：３３．
［１４］王朴，刘杰，刘建强，等．新疆伊犁苹果黑星病的发生危害及防治对策［Ｊ］．北方园艺，２００３（２）：７０．
［１５］韩乃勇，杨莉，丁逸，等．苹果黑星病的发生与防治措施［Ｊ］．农业科技通讯，２００５（８）：４８．
［１６］徐阳，陈雪冬，宋义前，等．新疆伊犁垦区苹果黑星病的发生及综合防治［Ｊ］．现代农业科技，２０１９（５）：１１０－１１１．
［１７］邢维杰，史永清，吴海东，等．新疆塔城苹果黑星病的发生与防治［Ｊ］．北方果树，２０２０（３）：３１－３２．
［１８］赵春明．６种药剂对苹果黑星病田间防治试验报告［Ｊ］．农业科技与信息，２０１０（１）：２０，４８．
［１９］时春喜，段双科，李恩才，等．２５％ＡｍｉｓｔａｒＳＣ（阿米西达水悬浮剂）在苹
果病害管理中的应用［Ｊ］．西北农林科技大学学报（自然科学版），２００４，３２（１０）：９４－９８．
［２０］ＣＨＯＩＥＤ，ＫＩＭＧＨ，ＰＡＲＫＳＹ．Ｇｅｎｅｔｉｃｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｔｈｅｐｅａｒｓｃａｂｆｕｎ⁃ｇｕｓＶｅｎｔｕｒｉａｎａｓｈｉｃｏｌａｉｎＫｏｒｅａ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１９，４７（１）：７６－８６．［２１］陈斌，郑宇．基于Ｐｒｏｂｉｔ回归法的生防菌毒力测定分析［Ｊ］．安徽农学通报，２０１９，２５（２０）：７８－８０．
［２２］胡小平，杨家荣，梅娜，等．苹果黑星病菌中国菌株生物学特性研究［Ｊ］．植物病理学报，２００４，３４（３）：２８３－２８６．
［２３］梁振宇．陕西苹果黑星菌的生物学特性及寄主的抗病机制研究［Ｄ］．杨凌：西北农林科技大学，２００６．
８１１㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２３年