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车晓菲1，张肖建1-2，王红志1-2，郭永红1-2，郗艳菊2*
*基金项目：石家庄市科学技术研究与发展项目（191500094A ）
作者简介：车晓菲（1987-），女，大专，研究方向：中药检验
*通讯作者：郗艳菊（1981-），女，硕士，畜牧师，研究方向：动物营
养与饲料科学
（1.河北维尔利动物药业集团有限公司050200；2.河北省中兽药产业技术研究院050200；
3.河北省功能性添加剂技术创新中心050200）
摘要：为了建立黄芪益丹合剂组分的检测方法，为产品提
供稳定可靠的检测依据，试验采用了薄层谱（TLC ）法对黄芪
益丹合剂中的肉苁蓉进行定性鉴别；采用了高效液相谱 （HPLC ）法对制剂中的黄芪、当归和黄柏进行含量测定。结果显
示：肉苁蓉以松果菊苷作为定性鉴别指标，斑点清晰，与对照品
匹配度高；黄芪、当归和黄柏含量检测条件:C18谱柱,4.6mmx
250mm ,5滋m ，流动相采用乙腈与0.1%磷酸溶液梯度洗脱,DAD
检测器全波长扫描，同时测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸、盐
酸小檗碱的含量。研究表明：检测方法专属性高、准确可靠，可为 黄芪益丹合剂提供有效的质量控制方法。
关键词：黄芪益丹合剂；松果菊苷；毛蕊异黄酮葡萄糖苷； 阿魏酸；盐酸小檗碱
黄芪益丹合剂是在《中华人民共和国药典》“当归补血口服
液”基础上进行组方加减，由黄芪、当归、黄柏、肉苁蓉、益母草尧 丹参等中药配方组成，按规定工艺制备而成的口服液，用于预防 和蛋鸡输卵管炎。处方中黄芪、当归、黄柏是三大主要组分,
而肉苁蓉价格高可算“贵重药材”，为有效地控制产品质量，本试 验参考2015年版《中华人民共和国兽药典》円中相关质量标准，
制定了如下研究方案：①通过TLC 法定性鉴别肉苁蓉；②通过
HPLC 法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷尧阿魏酸、盐酸小檗碱的含量。 本试验以黄芪益丹合剂检测方法为研究对象，研究复方中药制 剂定性检测的专属性以及定量检测的可靠性，为黄芪益丹合剂
的检验分析提供科学依据。
1材料与方法
1.1主要仪器
UltiMate 3000高效液相谱仪（德国Thermo 公司），DAD
检测器，变龙工作站；AUW120D 型电子天平（日本SHIMADZU
公司）；DZKW-4电子恒温水浴锅（北京中兴伟业仪器有限公 司）；ZF-20D 台式紫外分析仪（上海贝仑仪器设备有限公司）
1.2主要试剂与对照品
松果菊苷对照品（批号19092501，含量87.15%），毛蕊异黄 酮葡萄糖苷对照品（批号19031302，含量93.12%），盐酸小檗碱 对照品（批号19050604，含量94.08%），阿魏酸对照品（批号
110773-201604，含量99.0%），阿魏酸对照品购于中国食品药品 检定研究院，其他对照品购于成都格利普生物科技有限公司；甲
醇、乙腈、磷酸为谱纯。
1.3药材
黄芪、当归、益母草、丹参、黄柏、茵陈、茯苓、巴戟天、肉苁
蓉、青皮、川楝子等11味药材均购于安国药材市场，经本公司质 控部鉴别均符合《中华人民共和国兽药典》2015版（二部）有关项 下规定。
1.4样品制备方法
黄芪益丹合剂样品的制备：处方中黄芪200g 、当归150g 、益
母草100g 、丹参100g 、黄柏150g 、茵陈100g 、茯苓50g 、巴戟天
50g 、肉苁蓉50g 、青皮25g 、川楝子25g，共计11味，总重1kg 遥将 配好的药材加水煎煮2次，每次煎煮时间2h，加水量分别为10 倍和8倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至1000mL 左右，加入0.6%
苯甲酸钠，放冷，静置24h ，滤过，滤液加水制成1000mL ，即得。
2结果与分析
2.1定性鉴别
2.1.1肉苁蓉的薄层鉴别
取黄芪益丹合剂供试品5mL ，水浴蒸干，加甲醇20mL，超声 处理20min ，过滤，蒸干，残渣加甲醇5mL 使溶解，作为供试品溶
液；取松果菊苷对照品适量，加甲醇制成每1mL 含1mg 的溶液， 作为对照品溶液；另按供试品工艺制备不含肉苁蓉的阴性样品，
同法制成阴性对照溶液；照2015版《中华人民共和国兽药典》円 “附录0502”薄层谱法试验，吸取对照品溶液、供试品溶液和阴
性对照溶液各2滋L ，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲醇-醋 酸-水（2：1：7）为展开剂，展开，取岀，晾干，置紫外光灯（365nm ）下
chexiao检视。结果见图1遥由图1可知，供试品谱中，在与对照品谱
相应的位置上，显相同颜的荧光斑点，阴性对照无干扰。
0.松果菊苷对照品4.阴性对照1-3供试品
图1肉苁蓉TLC 图
2.2含量测定
2.2.1谱条件
5
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谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以乙
腈为流动相A ，以0.1%磷酸溶液为流动相B ，梯度洗脱程序见表 1；流速：1.0mL/min ；检测波长：全波长扫描（0~9mm 毛蕊异黄酮
葡萄糖苷检测波长为260nm ,9~13min 阿魏酸检测波长为
314nm ,13~35min 盐酸小檗碱检测波长为345nm ）；柱温:30益;
进样量：10滋L 。
表1梯度洗脱程序
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35
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2.2.2制样方式考察
精密量取供试品5mL ，置25mL 棕量瓶中，平行取样3
份，编号1、2、3，分别加入100%甲醇、70%甲醇和60%甲醇约
20mL ，超声处理（功率200W ，频率50kHz ） 10min ，取岀，放冷，定
容至刻度，离心，取上清液，滤过，即得供试品溶液。
按“221”项下规定的谱条件行分析，结果见表2、图2遥由
表2、图2可知：用70%甲醇制备供试品溶液，目标成分的回收率
较高，故选用70%甲醇超声处理作为供试品溶液制备方式。
表2不同提取溶剂对含量测定的影响
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图2不同提取溶剂对含量测定的影响
2.2.3供试品溶液及阴性样品溶液的制备
精密量取本品5mL ，置于25mL 棕容量瓶中，加70%甲醇 约20mL ，超声处理（功率200W ，频率50kHz ） 10min ，取岀，放冷，
加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，离心取上清液,0.45滋m 微孔滤膜
滤过，即得。按“1.4样品制备方法”项下的工艺制备不含黄芪、当 归、黄柏的阴性样品，并按上述供试品溶液的制备方法制备阴性 样品对照溶液。
2.2.4对照品溶液的制备
取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、阿魏酸对照品和盐酸小檗
I 阴性样品（345nm ）
图3不同波长下各成分HPLC 谱图
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碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品50滋g、阿魏酸对照品50滋g和盐酸小檗碱对照品15滋g的混合对照品溶液，即得。
2.2.5专属性考察
分别精密吸取对照品溶液尧阴性对照品与供试品溶液各10滋L，按“221”项下谱条件进样测定，记录谱图。对专属性进行考察。结果表明，阴性样品对测定无干扰，结果见图3遥
2.2.6线性关系考察
精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品50mg、阿魏酸对照品50mg和盐酸小檗碱对照品15mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品储备液。精密量取混合对照品储备液1mL，依次用甲醇稀释至50mL、25mL、12.5mL、5mL、2.5mL、2mL，作为混合对照溶液，分别精密量取10滋L，按“221”项下谱条件进样测定，记录峰面积。以浓度作为横坐标(X，滋g/ mL)，谱峰峰面积作为纵坐标渊Y,mAU
*m m)，进行线性回归计算。
结果：毛蕊异黄酮葡萄糖苷(260nm)回归方程为Y= 0.5492X-0.1132,R2=0.9999，在9.3604~234.01滋g/mL范围内线性关系良好；阿魏酸(314nm)回归方程为Y=0.2425X-0.155, R2=0.9997，在9.7496~243.74滋g/mL范围内线性关系良好；盐酸小檗碱(345nm)回归方程为Y=1.9199X+0.1333,R2=1，在3.9514~98.785滋g/mL范围内线性关系良好。
2.2.7重复性考察
取同一批样品(批次：20200701)，按取样量0.5:1.0:1.5的比例分别取样，各平行3份，按供试品溶液制备的方法制备，照上述谱条件测定，分别计算毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸和盐酸小檗碱的平均含量及平均含量的RSD值，考察方法的重复性。测得平均含量分别为：毛蕊异黄酮葡萄糖苷=0.113mg/mL,RSD= 0.90%；阿魏酸=0.130mg/mL,RSD=0.93%；盐酸小檗碱=0.202mg/ mL,R SD=0.75%，结果表明该方法重复性良好。
2.2.8精密度考察
取同一供试品溶液，按确定的谱条件连续进样6次，分别记录毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸和盐酸小檗碱谱峰峰面积，并分别计算峰面积的RSD值，考察方法的精密度。测得毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸和盐酸小檗碱谱峰峰面积RSD值分别为：0.22%、0.26%和0.16%，表明该方法精密度良好。
2.2.9稳定性考察
取同一供试品溶液，分别于0,4,8,12,18,24h进样1次，分别记录毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸和盐酸小檗碱谱峰峰面积，并分别计算峰面积的RSD值，考察方法的稳定性。测得毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸和盐酸小檗碱谱峰峰面积RSD值分别为：0.52%、0.56%和0.47%，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.2.10准确度考察
精密量取“225”项下混合对照储备液1.0mL加甲醇稀释并定容至10mL，作为混合对照溶液。取同一批样品(批次：20200701)作为供试品，平行9份，每份2.0mL，平均分成3组。第一组加混合对照溶液1.0mL，第二组加混合对照溶液3.0mL，第三组加混合对照溶液5.0mL，按“222”项下方法制备供试品溶液，在“221”项下谱条件下测定。记录峰面积并计算回收率，考察方法的准确度。测得毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸和盐酸小檗碱的回收率均在98%~102%之间。结果：
毛蕊异黄酮葡萄糖苷平均回收率=99.56%,RSD=0.98%(n= 9)；阿魏酸平均回收率=100.21%,RSD=1.22%(n=9)；盐酸小檗碱平均回收率=100.06%,RSD=0.77%(n=9)，结果表明该方法准确度符合要求。
2.3样品测定
取9批样品，每批平行样个数n=3，按“223”项下方法制备供试品溶液，在“221”项下谱条件下测定，计算含量。结果见表3：
表3各成分含量测定结果
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3讨论
本试验参考肉苁蓉在《中华人民共和国兽药典》［2］中标准规定以及研究文献［円，通过TLC薄层谱条件的摸索，筛选岀最佳展开条件，完成肉苁蓉TLC鉴别检验方法的制定。在探索过程中发现：供试品谱中，在与松果菊苷对照品谱相应的位置上，显相同颜的荧光主斑点。而阴性对照液谱中，在与松果菊苷对照品谱相应的位置上，未显示荧光斑点遥由此可见，松果菊苷可作为鉴别肉苁蓉的专属指标。
中医药理论强调的是整体观念的原则。中药复方制剂中化学成分复杂，有效成分往往难以确认，只对单一成分进行检测，无法体现制剂整体质量情况以及中医药的整体性特点，所以中药复方制剂质量评价应进行多组分检测。在黄芪益丹合剂处方中黄芪、当归、黄柏是三大主要组分，而毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸和盐酸小檗碱分别为黄芪、当归、黄柏的主要活性成分。经查阅文献［5-12］，建立了同时测定此3种成分含量的高效液相谱法。对毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、阿魏酸对照品和盐酸小檗碱对照品进行全波长扫描，谱图同文献［13-16］结果一致，故确定检测波长分别为260nm、314nm、345nm，通过HPLC全波长扫描同时测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、阿魏酸和盐酸小檗碱的含量。建立中药制剂质量标准和分析手段时，应采取准确、灵敏、可行的分析方法，测定多种有效成分，才能更加科学客观的评价中药制剂质量。随着中药化学成分研究分析方法学与制剂工艺学研究的不断深入和发展，中药制剂分析的灵敏度、准确度和稳定性，将会
7
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泰迪犬颈部气管闭合性破裂的诊断与
舒丽】，龚志成2
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(1.重庆市荣昌区职业教育中心402460；2.内江职业技术学院641000)
摘要：6岁雄性泰迪犬出现皮下大面积气肿现象，经临床症
状、血常规、血液生化及CRP 、X 线等综合检查诊断为颈部气管
闭合性破裂，通过手术并结合术后对症护理；该犬预后良
好。本文就该病例的诊治过程进行描述与分析，旨在为该病在临 床上的诊断及提供一定的方法参考和指导。
关键词：犬；闭合；气管破裂；诊断；
1病例介绍
1.1病史
雄性泰迪犬;6岁；主诉该犬当天与一只大型犬打斗后岀现
精神状态较差；喜卧；无食欲；呼吸加快；触摸其皮服有松软、下 陷、空洞等感觉；身上不见外伤及岀血表现。无既往病史；未绝
育、日常免疫及驱虫史良好，平时主要饲喂狗粮。
2检查方法及结果
作者简介：舒丽(1987-10)，女，汉族，湖南怀化，中级讲师，硕士 研究生，寄生虫方向
2.1临床检查
体重4.9kg，体温38.9益、呼吸52次/min 、心率114次/min,
该犬表现精神沉郁、运动不耐受、可视黏膜轻度发绀，体态臃肿、
皮下触诊有明显捻发音；皮肤无实感表现空洞化，颈部小面积皮 肤见轻微泛红；深压该处患犬有疼痛感，听诊呼吸音粗糙，其他
不见异常。
2.2血液检查
白细胞20.1X107 8901*45
16/L ； C-反应蛋白浓度47.8mg/L ，提示其机体 存在组织损伤及炎症反应，血糖7.15mmol/L 提示有疼痛或者应 激反应，其他指标不见异常；详见表1、表2、表3 遥
2.3 X 线检查
X 光片显示颈背部、胸背部及腹背部等皮下位置存在大面
积低密度暗区，提示气体积聚，胃内蓄积大量气体，气管腹侧的 连续性结构有断裂现象，提示气管破裂(见图1箭头)。
3诊断
根据该病犬的病史、临床检查初步怀疑为气管结构性损伤，
进一步结合X 线及血液相关指标的检查结果确诊为颈部气管闭
逐步提高，以满足中药制剂质量控制的实际需求。
4结论
中药制剂分析以中药理论为指导，应用现代分析理论和方
法，研究中药制剂质量，如何确定质量评价的指标是其关键问
题。本试验通过TLC 定性鉴别和HPLC 定量测定来进行组分检 测方法的研究，样品前处理条件以及系统适用性均经过对比验
证，最终选择以70%甲醇作为制样溶剂，影响因素及中间精密度
考察RSD 值均小于2%，结果表明此检测方法专属性高、准确可 靠，可为黄芪益丹合剂提供有效的质量控制方法。中药制剂有已
知成分又有未知成分，不确定因素诸多，分析难度大，存在问题 多，极具挑战性，对药物分析工作者而言任重而道远。
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