(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利说明书
(10)申请公布号 CN 103183616 A
(43)申请公布日 2013.07.03
(21)申请号 CN201210543580.X
(22)申请日 2012.12.06
(71)申请人 长沙理工大学
    地址 410004 湖南省长沙市雨花区万家丽南路2段960号
(72)发明人 舒孝顺 卿婉华 许凯扬
(74)专利代理机构
    代理人
(51)Int.CI
      C07C69/732
      C07C67/48
                                                                  权利要求说明书 说明书 幅图
(54)发明名称
      一种从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法
(57)摘要
      本发明公开了一种从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法，该方法包括以下步骤：药材前处理、乙醇回流提取、浓缩、过滤、凝絮沉淀、树脂吸附分离、浓缩、绿原酸粗品、重结晶、制得绿原酸精品，本发明获得了从中药红腺忍冬叶中分离，纯化绿原酸的最佳工艺条件：用单因素和正交试验对红腺忍冬叶中绿原酸的分离，纯化工艺进行了最佳条件的筛选，采用正交表L
法律状态
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
权 利 要 求 说 明 书
1.一种从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法，其特征在于，该方法包括以下步            骤：药材前处理、乙醇回流提取、过滤、浓缩、凝絮沉淀、树脂吸附分离、浓            缩、绿原酸粗品、重结晶、制得绿原酸精品，具体步骤为：           
药材红腺忍冬叶片烘干，再粉碎过60目筛；称取红腺忍冬叶干粉置于园底            烧瓶中，再加乙醇混合于磨口圆底烧瓶中加热提取，完成后，趁热抽滤，合并两            次提取液，并使用旋转蒸发仪进行浓缩，浓缩至2ml/1g药材；再用醋酸溶液配            成壳聚糖胶体作为澄清剂，对浓缩液进行沉淀初步除杂；初步除杂后澄清液再            上D101大孔树脂进行纯化，就上柱溶液量、上柱溶液pH值及上柱溶液吸附流            速对绿原酸吸附效果的影响进
行考察，确定最佳上柱吸附条件，最佳上柱吸附            条件为：固液比-树脂1g∶6ml上柱溶液、乙醇pH为2、流速为40滴/min；经            最佳上柱吸附条件吸附后，再就洗脱剂浓度、洗脱剂体积、洗脱剂pH值和洗脱            流速对绿原酸洗脱效果的影响进行考察，确定洗脱条件；上述洗脱液乙醇相使用            旋转蒸发仪进行浓缩，再在真空干燥箱中真空干燥，干燥物以热水溶解再泠却到            室温，溶解液与乙酸乙酯用量比1∶2萃取，水相用乙酸乙酯萃取3-5次，乙酸乙            酯相浓缩干燥得绿原酸粗品；绿原酸粗品再用甲醇溶解，再结晶，得到白针状            晶体，真空干燥；再进行薄层分析，以乙酸乙酯∶甲酸∶水＝10∶1∶2为展开剂展开，            以三氯化铁乙醇溶液为显剂，在与对照品谱相应的位置上显相同颜斑点，            阴性对照无此斑点。           
2.如权利要求1所述的从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法，其特征在于，该            方法进一步包括绿原酸含量测定方法，具体步骤为：           
步骤1，标准样溶液的制备           
精密称取绿原酸对照品1mg，置50mL量瓶中，加无水乙醇，使其完全溶解并                            稀释至刻度。摇匀，即得，每1mL中含绿原酸20ug；           
步骤2，最大吸收波长的确定           
将绿原酸标准样溶液在200～400nnl进行紫外扫描，最大吸收波长为328nm，            故选328m为检测波长；           
步骤3，标准曲线的绘制           
精密量取对照品溶液1、2、4、6、8mL，分别用无水乙醇定容至10mL容量瓶，            摇匀。以无水乙醇作参比液，在328nm处测定其吸光度，以标准品质量浓度C(ug            /mL)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。           
3.如权利要求1所述的从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法，其特征在于，绿            原酸的醇提方法为：           
将10g药材与100ml的pH3，70％乙醇混合于磨口圆底烧瓶中加热提取，提取            1.5小时，次数为2次；           
完成后，趁热抽滤，并使用旋转蒸发仪在75度下进行浓缩，浓缩至2ml/1g            药材，比定量分析检测提取液绿原酸含量，以验证与薄层分析结果差异。           
4.如权利要求1所述的从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法，其特征在于，绿            原酸的初步除杂方法为：           
步骤1，壳聚糖的配制：           
用1％的醋酸溶液配成1％的壳聚糖胶体作为澄清剂；           
步骤2，对滤液澄清效果的考察：           
100ml浓缩液中加入1％壳聚糖溶液8ml，搅拌，在60℃静置60min，过            滤，检测除杂效果，肉眼看各处理组过滤液澄清效果、薄层分析比较大极性杂质            即绿原酸斑点下方杂质斑点大小及绿原酸斑点大小，同时比定量分析检测各            处理绿原酸含量，以验证与薄层分析结果差异。           
5.如权利要求1所述的从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法，其特征在于，该            方法进一步包括上柱条件的优化试验方法：           
步骤1，树脂溶液处理量的确定方法           
5g经预处理的D101大孔树脂分别加入四根层析柱，每根加5g树脂，5、            10、15、20ml上述壳聚糖澄清液分别上柱，60滴/分钟反复动态吸附4次，定            量分析每根柱的流出液绿原酸含量，确定树脂最大吸附量；           
步骤2，提取液pH值对吸附效果的影响           
上述壳聚糖澄清液分别调pH值2、3、4、5，按最佳上样量上样，分别上柱            吸附，60滴/分钟吸附，操作按上述处理，最后定量分析每根柱的流出液绿原酸            含量，算出各个水平吸附率大小，分析pH值对树脂吸附绿原酸量的影响；           
步骤3，流速对吸附效果的影响           
按上述最佳上样量及pH值，以40、60、80、100滴/分钟流速吸附，从生            产成本和生产效益等方面考虑，确定最佳上柱吸附流速。           
6.如权利要求1所述的从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法，其特征在于，该            方法进一步包括洗脱条件的选择方法：           
步骤1，洗脱剂浓度的确定           
分别用pH8、20ml的10、20、40、60％乙醇以60滴/分钟的流速进行洗脱            看其洗脱效果，洗脱液比定量分析绿原酸含量，干燥后称取提取物干重。看不                            同浓度的乙醇洗脱对绿原酸纯度的影响，选择最佳洗脱剂；           
步骤2，洗脱液体积           
绿原酸洗脱率随洗脱体积增加而不断增大，分别用最佳pH值、15、20、30、            40ml最佳浓度乙醇以最佳流速进行洗脱看其洗脱效果，洗脱液比定量分析绿            原酸含量，干燥后称取提取物干重。看不同流速对绿原酸纯度的影响，选择洗            脱最佳洗脱体积，从解吸率来看解吸最佳洗脱体积。           
步骤3，洗脱剂pH值           
分别用PH6、7、8、9的20ml最佳浓度乙醇以60滴/分钟的流速进行洗脱            看其洗脱效果，洗脱液比定量分析绿原酸含量，干燥后称取提取物干重。看            不同PH值的乙醇洗脱对绿原酸纯度的影响，选择洗脱剂最佳pH值，从洗脱率            来看洗脱最佳pH值；           
步骤4，洗脱液流速           
分别用最佳pH值的20ml最佳浓度乙醇以40、60、80、100滴/分钟的流速            进行洗脱看其洗脱效果，洗脱液比定量分析绿原酸含量，干燥后称取提取物            干重；看不同流速对绿原酸纯度的影响，选择洗脱最佳流速，从洗脱率来看最            佳洗脱流速。           
7.如权利要求1所述的从红腺忍冬叶制备绿原酸的方法，其特征在于，该            方法进一步包括样品含量的测定及相关计算方法：            真空干燥箱使用方法