董宏伟，李新军，王晓光
（福安药业集团烟台只楚药业有限公司，山东 烟台 264002）
[摘要]目的：分析用反相高效液相谱（RP-HPLC）法测定克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质含量的效果。方法：本次实验采用RP-HPLC 法测定克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质的含量。本次实验使用的谱柱为C18谱柱（150×4.6mm，5 μm），使用的填料为ODS 填料，流动相为pH 2.5的磷酸二氢钾溶液-乙腈（775:225），流动相的流速为1.0ml/min，运行时间为三倍主峰保留时间，加样量为20 μl，检测波长为273 nm。在该谱条件下对克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质的含量进行测定。结果：克林霉素的含量在0.07475～0.67363 mg/L 区间时，呈现出良好的线性关系，r=0.9992。本法测得回收率的平均值为99.8%，RSD 值为0.7%。克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素的含量为99.3%～104.4%，相关物质的含量为2.7%～3.0%。结论：用RP-HPLC 法测定克林霉素磷酸酯注射液中的克林霉素及有关物质含量的效果较为理想。
[关键词]反相高效液相谱法；克林霉素磷酸酯注射液；克林霉素的含量；有关物质
[中图分类号]R446 [文献标识码]A [文章编号]2095-7629-（2021）02-0013-02
呼气样品中13C 的含量）。若结果＞4表示对研究对象进行13C-尿素呼气试验的结果为阳性，若结果≤4表示对研究对象进行13C-尿素呼气试验的结果为阴性。进行血清Hp 抗体分型检测的方法为：在清晨，采集研究对象的空腹肘静脉血3 ml。将静脉血静止放置2 h 后进行血清分离。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法从血清中分离出vacA 基因、cagA 基因、尿素酶A、尿素酶B 等Hp 抗原。将分离的抗原转移到硝酸纤维膜上，将硝酸纤维膜浸入血清中。然后，加入显剂及酶，观察硝酸纤维膜，根据硝酸纤维膜的显情况判断Hp 的类型。1.3 观察指标
史磊观察对这1522例研究对象进行血清Hp 抗体分型检测的结果。
1.4 统计学方法
对本次研究中的数据均采用SPSS 21.0统计软件进行处理，计量资料用均数±标准差（s ±）表示，采用t 检验，计数资料用百分比（%）表示，采用χ²检验。以P ＜0.05表示差异具有统计学意义。2 结果
2.1 对这1522例研究对象进行Hp 抗体分型检测的结果
对这1522例研究对象进行13C-尿素呼气试验结果的阳性率为14.06%（214/1522），阴性率为85.94%（1308/1522）。对这1522例研究对象进行Hp 抗体分型检测结果的阳性率为13.8%（210/1522），阴性率为86.2%（1312/1522）。对这1522例研究对象进行13C-尿素呼气试验与Hp 抗体分型检测时其病情的检出率相比，P ＞0.05。详见表1。
表1 对这1522例患者进行Hp 抗体分型检测的结果
检测方法
例数阳性［％（n ）］阴性［％（n ）］检出率（％）１３Ｃ－尿素呼气试验１５２２１４．０６（２１４）８５．９４（１３０８）１４．０６Ｈｐ抗体分型检测１５２２
１３．８（２１０）
８６．２（１３１２）
１３．８χ²值０．２４１P 值
０．８４５
2.2 这1522例研究对象中进行Hp 抗体分型检测结果为阳性研究对象Hp 抗体的分型
这1522例研究对象中，有210例进行Hp 抗体分型检测结果为阳性的研究对象。在这210例进行Hp 抗体分型检测结果为阳性的研究对象中，Hp 抗体分型为Ⅰ型的研究对象有166例，Hp 抗体分型为Ⅱ型的研究对象有44例。3 讨论
大部分胃肠疾病（萎缩性胃炎、浅表型胃炎、胃癌等）
的发生均与患者感染Hp 有关。对接受体检的人进行Hp 检测，可使其中的Hp 感染者在病情早期接受，进而可降低其胃肠疾病的发生率[3]。目前，临床上主要用13C-尿素呼气试验诊断Hp 感染。进行13C-尿素呼气试验是一种无创性操作。进行13C-尿素呼气试验诊断Hp 感染的原理为，患者消化道内的Hp 可被13C 标记的尿素分解成CO 2，然后根据其呼出CO 2的含量可诊断其病情。用13C-尿素呼气试验诊断Hp 感染的敏感度及特异度均较高[4]。但是从实际的应用情况来看，进行13C-尿素呼气试验具有操作复杂、检测费用高等缺点[5-6]。用血清Hp 抗体分型检测诊断Hp 感染具有操作简单、价格低廉、无创伤、易被患者接受等诸多优势。近年来，该检测方法逐渐在县级医院中得到应用。进行血清Hp 抗体分型检测诊断Hp 感染的原理为，对患者的血清进行分离，根据血清中vacA 基因或cagA 基因的阳性表达分辨其Hp 抗体的分型。本次研究的结果显示，对这1522例研究对象进行13C-尿素呼气试验结果的阳性率为14.06%。对这1522例研究对象进行Hp 抗体分型检测结果的阳性率为13.8%。对这1522例研究对象进行13C-尿素呼气试验与Hp 抗体分型检测时其病情的检出率相比，P ＞0.05。这1522例研究对象中，有210例进行Hp 抗体分型检测结果为阳性。在这210例进行Hp 抗体分型检测结果为阳性的研究对象
中，Hp 抗体分型为Ⅰ型的研究对象有166例，Hp 抗体分型为Ⅱ型的研究对象有44例。
综上所述，对接受健康体检的人进行Hp 抗体分型检测，其病情的检出率较高，且可确认其Hp 抗体的分型。
参考文献
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体检人胃疾病筛查中的意义[J].医学信息,2018,31(11):22-24.[2] 唐承璐，朱庆曦，韩菊平，等.胃蛋白酶原及幽门螺杆菌抗体
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《当代医药论丛》Contemporary Medical Symposium 2021 年 第 19 卷 第 2 期 14
克林霉素磷酸酯注射液是临床上的一种常用药。此药是克林霉素的衍生品，其抗菌作用比克林霉素更强，且具有良好的可吸收性[1-2]。有关物质是指在生产药物的过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物及在贮藏药物过程中出现的降解产物等[3]。为了有效地控制克林霉素磷酸酯注射液的质量，保证患者用药的安全性，有必要对此药中克林霉素的含量及有关物质进行测定。本次研究主要是分析用反相高效液相谱（RP-HPLC）法测定克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质含量的效果。
1 仪器与试剂
1.1 实验仪器
本次实验使用的仪器是Waters600型高效液相谱仪、Waters490E型紫外检测器、AR2140型电子天平、FE20型pH计。
1.2 实验试剂
本次实验使用的试剂是克林霉素磷酸酯对照品（含有76.9%的克林霉素）、克林霉素磷酸酯注射液、磷酸二氢钾、甲醇。
2 谱条件
本次实验使用的谱柱为C18谱柱（150×4.6mm，5 μm），使用的填料为ODS填料，流动相为pH 2.5的磷酸二氢钾溶液-乙腈（775:225），流动相的流速为1.0ml/min，运行时间为三倍主峰保留时间，加样量为20 μl，检测波长为273 nm。
3 制备溶液的方法
3.1 制备对照品溶液的方法
精密量取一定量的克林霉素磷酸酯，将其置于容量为20ml的量瓶中。在此量瓶中加入流动相，将克林霉素磷酸酯稀释到指定浓度（0.48 mg/ml），摇匀以备用。
3.2 制备供试品溶液的方法
精密量取2 ml的克林霉素磷酸酯注射液。在此注射液中加入流动相，将其稀释至0.48 mg/ml，摇匀以备用。
3.3 制备空白溶液的方法
以克林霉素磷酸酯注射液处方作为参照，以流动相作为溶剂，制备空白溶液（浓度为0.48 mg/ml，不含主药），摇匀以备用。
4 实验方法及结果
4.1 进行线性关系实验的方法及结果
取约49 mg的克林霉素磷酸酯对照品，精密称定，将其置于量瓶中。用流动相将其稀释、溶解至指定刻度。分别精密吸取4.5 ml、3.5 ml、2.5 ml、1.5 ml、0.5 ml的克林霉素磷酸酯对照品溶液，将其分别置于容积为10 ml的量瓶中，加入流动相，稀释到指定刻度。以本次实验的谱条件作为基础，检测峰面积。将峰面积作为纵坐标，将克林霉素的浓度作为横坐标，进行回归分析。结果显示，当克林霉素的浓度在0.07475～0.67363 mg/L区间时，呈现出良好的线性关系，r=0.9992。
4.2 进行加样回收率实验的方法及结果
取6份含量已知的样品，将克林霉素磷酸酯对照品分别加入其中，计算回收率。结果显示，测得回收率的平均值为99.8%，RSD值为0.7%。详细结果见表1。
表1 进行加样回收率实验的方法及结果
测得量
（ｍｇ）
取样含量
（ｍｇ）
加入量
（ｍｇ）
回收率
（％）
回收率的平均值
（％）
ＲＳＤ值
（％）２．８９５６１．１９７７１．７４６８１００．３
２．９５１４１．１９７７１．７４６８１００．２
２．９６４６１．１９７７１．７４６８１００．４９９．８０．７２．６８４１１．７８７１０．８７９２９９．９
２．６６５３１．７８７１０．８７９２９８．５
２．６６９８１．７８７１０．８７９２９９．３
4.3 对克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质含量进行检测的方法及结果
取20 μl的对照品溶液，将其置于液相谱仪中，对检测仪器的灵敏度进行调节，保证主成分峰值的最高峰介于满量程的10%～25%之间。各取20 μl的供试品溶液、对照品溶液，将这两种溶液置于谱仪中，对相关检测数据进行记录。如果在谱图上供试品溶液显示为杂质峰，单一杂质峰的面积需≤4倍（4.0%）
的对照品溶液主峰面积。不同杂质峰面积的总和需≤8倍（8.0%）的对照品溶液主峰面积。精密量取适量的克林霉素磷酸酯，以流动相将其稀释为0.45 mg/ml的溶液。量取10 μl此溶液，将其稀释后置于高效液相谱仪中，记录谱图。量取适量的克林霉素磷酸酯对照品，以同样的方法计算供试品中克林霉素的峰面积。吸取0.487 g/L的克林霉素磷酸酯对照品溶液，连续进样5次，测量峰面积。取适量的本品，用流动相将其稀释为0.48 mg/ml的溶液，取其中的10 μl进行检测，记录谱图。另取一定量的克林霉素磷酸酯对照品，以同法进行测定。详细结果见表2。
表2 对克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素及有关物质含量
进行检测的方法及结果（%）
组别克林霉素的含量有关物质的含量溶液１９９．３２．７
溶液２１０２．５２．９
溶液３１０４．４３．０
5 讨论
克林霉素磷酸酯注射液多被用于由革兰氏阳性菌引起的多种感染性疾病。为了确保患者用药的安全
性，加强对克林霉素磷酸酯注射液进行质量管理和成分分析具有重要的临床意义。近年来，临床上常用RP-HPLC法对克林霉素磷酸酯注射液进行质量管理和成分分析。此法具有分离速度快、检测灵敏度高的特点。本次实验的结果显示，克林霉素的含量在0.07475～0.67363 mg/L区间时，呈现出良好的线性关系，r=0.9992。本法测得回收率的平均值为99.8%，RSD值为0.7%。克林霉素磷酸酯注射液中克林霉素的含量为99.3%～104.4%，相关物质的含量为2.7%～3.0%。这说明，用RP-HPLC法测定克林霉素磷酸酯注射液中的克林霉素及有关物质含量的效果较为理想。
参考文献
[1] 周鹏，王娇，崔岚.国产克林霉素磷酸酯注射液药品说明书项目标
注的调查[J].中国药房,2016,27(27):3748-3750.
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酯栓的有关物质和降解产物[J].药学进展,2017,9(5):287-289. [3] 漏德宝，段更利，高敏洁.反相高效液相谱法测定克林霉素磷酸
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