J
J J
J
J J
J
J
J
J
J J
J J
VEGF 在复发性流产患者绒毛及蜕膜中的表达
范玮琪怀孕
郑 颖 左常婷¹
刘爱兰 山东大学附属省立医院西院妇产科(山东 济南) 250022
中国图书分类号 R714121  文献标识码 A  文章编号 1001-4411(2009)06-0796-03
¹通讯作者，山东大学附属省立医院妇产科 250021
=摘 要> 目的：探讨VEG F (血管内皮生长因子)在复发性流产(R S A )患者绒毛及蜕膜中的表达。方法：以免疫组织化学方法观察20例复发性流产(RSA )患者绒毛及蜕膜组织中VEGF 的表达及分布，并以20例正常早孕妇女作为对照组。结果:R S A 患者绒毛及蜕膜组织中VEG F 的表达显著低于正常早孕组(P <0105)。结论:V EGF 在早期妊娠的维持中起重要作用，其表达水平降低可能与RSA 的发生有关。
=关键词> V EGF  流产，复发性 绒毛 蜕膜
Expression ofVEGF i n chori onic villi and deci dua of recurrent spontaneous aborti on patients
Z HE NG Yi n g,ZUO Chang -T i n g,LI U A i -Lan 1Shandong P rovincialH os p ital ,Shandong University ,J inan 250022,Shandong,China
1Ab stract 2 O b jective :T o observe t he expression of V EGF i n chor i onic v illi and dec i duas of recurren t spontaneous abo rti on patients 1M ethod s :The expressi on and d i stri buti on o f VEGF we re observed i n cho ri on i c v illi and decidual ti ssues from 20patien ts w it h re -current spontaneous aborti on (R S A )by i m munohistoche m istry 1A t the sa m e per i od ,20nor m a l ear l y pregnant w o m en m atched for m aterna l
age and g esta tiona l age w ith R S A g roup w ere selected as contro l
g roup1R esu lts:The expressi on o f VEGF i n R S A g roup was si gn ifi cantl y lo w er than t hat i n contro l g roup(P<0105)1Conc l u sion:VEG F p l ays an i m portant ro le i n nor m a l pregnancy,the low expressi on of VEG F m ay be i nvo l ved in the pathogenes i s of R S A1 1K ey words2VEGF;R ecurrent spon taneous aborti on;Chor i on v ill;i D ec i dua
复发性自然流产(recurrent spon taneous aborti on,R S A)临床上指孕龄妇女与同一性伴侣连续发生2次或2次以上的自然流产，是妊娠期最常见的并发症之一，其发生率一般约占生育年龄层妇女的018%~1%。随着流产的反复发生，流产患者下次妊娠时流产率还要相应的增加，一般一次流产后再次妊娠的流产率约为10%~15%，而二次流产后的第三次妊娠流产率约为30%~40%，三次流产后的第四次妊娠流产率则为40%~60%。引起R S A的原因复杂，除染体、内分泌、感染、内生殖器官解剖异常外，
仍有60%~70%的患者病因不明。血管内皮生长因子(vascular endo the li a l g row th fac-tor,V EGF)是体内调节血管发生的中枢物质，对血管内皮细胞有显著的特异性，它一方面能促进血管内皮细胞及滋养细胞的分裂和迁移；另一方面也是血管通透性的主要调节者，促进新生血管的形成。近年来VEG F在复发性流产中的作用越来越受到重视112。
1材料与方法
111研究对象与分组
11111复发性自然流产组(R S A组)20例，为2006年5月~2007年10月在山东省立医院及省立医院西院就诊的患者, 25~36岁，孕6~10周，临床确诊为难免流产(包括B超示无原始心管搏动)，所有患者均有连续早期自然流产史\2次。按常规进行病因筛查，排除染体、解剖、内分泌方面异常、感染及自身免疫性疾病，微量细胞毒试验和抗磷脂抗体(连续检查2次，每次间隔3周)均为阴性。
11112正常早孕组20例，为同期、同地随机选择的来妇产科门诊就诊要求终止妊娠的正常健康早孕妇女，年龄20~37岁，孕周与RSA组相比无显著性差异，既往无自然流产、死胎，妊娠期高血压疾病等病史。
112方法将手术后采集的绒毛及蜕膜组织用019%生理盐水冲洗后立即置于4%的甲醛液中固定24~48h，
常规石蜡包埋后制成4~5L m厚的组织切片。采用免疫组化二步法染，观察绒毛及蜕膜组织中V EGF的分布及表达。一抗为鼠抗人VEG F单克隆抗体工作液，即用型Env i s i o T M试剂盒,DAB均购自福州迈新生物技术有限公司。染步骤参照说明书进行。用已知的阳性片作阳性对照,PBS代替一抗作阴性对照。切片集中染，以免批内、批间误差。
113结果判定采用双盲法观察阳性反应。VEGF表达阳性信号为棕黄，位于胞浆，每张切片随机观察10个视野，按阳性细胞占总细胞的百分比分为4级：阴性(-)：阳性细胞数<5%；阳性(+)：阳性细胞数5%~25%；中度阳性(++)：阳性细胞数25%~50%；强阳性(+++)：阳性细胞数>50%。
114统计学处理应用SPSS1110软件，采用V2检验进行统2结果
光镜下免疫组化苏木素复染V EGF表达阳性信号为棕黄，位于胞浆。
211VEGF在绒毛中的表达与分布R S A组与正常早孕组均可见完整的孕早期绒毛结构，绒毛表面被覆两层形态不同的滋养细胞，外层为合体滋养细胞，胞浆丰富，毛玻璃样；内层为细胞滋养细胞，界限清楚，核圆，小泡状，绒毛中间为疏松的间质，间质细胞呈星芒状，部分间质中可见小血管。VEG F主要表达于绒毛的滋养细胞和血管内皮细胞胞浆中，间质略有着。两组合体滋养细胞胞浆阳性染均较细胞滋养细胞强,R S A组阳性染较正常早孕组弱(见图1、2)。两组中V EGF的表达差异有显著性,R S A组显著低于早孕组(V2=4133,V=1,P<0105)，见表1
。
图1RSA组绒毛的免疫组化(苏木素复染@
200)
图2正常早孕组绒毛的免疫组化(苏木素复染@200)
表1绒毛组织中VEGF表达情况
组别例数
VEGF表达强度
-++++++
阳性率
(%)
RS A206140070
正常早孕组201181095
#
797
#
郑颖等VEGF在复发性流产患者绒毛及蜕膜中的表达第6期
蜕膜细胞体积增大，呈圆形或多边形，胞浆丰富，胞核相对缩小，细胞间隙加大，细胞呈叠瓦状排列，
蜕膜中的腺体呈高度分泌状态，并有乳头状结构，腺上皮细胞胞浆丰富，蜕膜间质中可见小血管。R S A 组腺体发育差，数量少。VEGF 主要表达于蜕膜细胞、腺上皮细胞和血管内皮细胞胞浆中，蜕膜细胞阳性染强(见图3、4)。两组中VEGF 的表达差异有显著性,R S A 组显著低于早孕组(V 2=4128,V =1,
P <
0105)，见表2
。
图3 RSA 组蜕膜的免疫组化(苏木素复染 @
200)
图4 正常早孕组蜕膜的免疫组化(苏木素复染
@200)表2 蜕膜组织中VEGF 表达情况
组别例数 VEGF 表达强度-++++++阳性细胞
>25%的率
RS A 20096555%正常早孕组
20
3
7
10
85%
3 讨论
V E G F 是体内调节血管发生的中枢物质,VEGF 在孕早期胎盘微血管的生成及网络构建、滋养细胞浸润过程中起十分重要的作用，而绒毛血管生成障碍与死胎有关;
Cho i HK
等122通过对复发性流产患者胎盘绒毛成份的研究发现，复发性
流产患者较正常怀孕妇女胎盘中7种血管生成因子相关基因(包括VEGF 相关基因)低表达。G irard i G 132通过对复发性流产和I UGR 患者研究发现，补体C5a 的激活导致可溶性VEG F 受体-1即S V EGFR -1(为强有力的抗血管生成因子)释放，从而使V EGF 减少，导致怀孕胎盘功能紊乱，发生流产和I U-GR 。
另有研究142显示妊娠期VEG F 水平升高可能与早孕期滋养层绒毛在发育过程中处于相对缺氧状态有关。叶喜阳152研究发现反复自然流产(R S A )患者血清及绒毛中VEGF 较正常早孕者升高，提示R S A 的发生可能与患者血清中VEGF 含量升高有关。但是究竟是VEGF 含量升高诱发流产，还是流产后表现血清中VEGF 含量升高，还有待于进一步研究。
K rokier II 162最新研究发现在正常妊娠过程中VEGF 在胎盘中的数量逐渐增加；而在自然流产患者中，前3个月VEG F 和它的受体呈相反的变化,V EGF 的数量增加而它的受体逐渐下降。这个发现使早期自然流产的研究又前进了一步。
本研究成果表明：在绒毛中V EGF 主要表达于绒毛的滋养细胞和血管内皮细胞胞浆中；在蜕膜中V EGF 主要表达于蜕膜细胞、腺上皮细胞和血管内皮细胞胞浆中。V EGF 在复发
性流产组绒毛和蜕膜组织中的表达均显著低于正常早孕组。据此，我们推断VEGF 表达减少或不表达，可导致绒毛血管网形成不良或滋养细胞分化、浸润异常，最终导致流产的发生。孕早期绒毛及蜕膜组织中VEG F 表达异常与复发性自然流产(R S A )的发生有关，其相关性有待进一步研究。4 参考文献
1 王国华，左常婷，王立俊1IL-2、IF N -C 与复发性流产的相关性
研究1J 21山东大学学报医学版,
2007,45(7):702
2 ChoiHK,C hoiBC,L ee SH e t al 1Expressi on ofangiogens i s and apopto -sis-relat ed genes i n chori on ic v illi deri ved fro m recurrent pregan cy loss pati en t 1J 21M ol Reprod Dev ,2003,
66(1):
24
3 G irard i Gg Yarili n D ,
Thor m an J M,C o m ple m en t activation i ndu ces dysregu l ation of angiogcn i c factors and cau s ed fetal rejection and gro w th restri ction 1J 21J Exp M ed 12006,
203(9):
2165~75
4 H efler L,Ober m a i r A ,H uss l ei n P et a l 1Vascu l ar endot heli al gro w th
fact or s erum levels i n pregnancy and p reecl a m ps i a 1J 21Act a Ob stet Gynecol Scand,2000,
79(1):
79
5 叶喜阳，徐宏星，徐洪斌1反复自然流产血清及绒毛组织中NO
含量和NOS 活性和血清中VEGF 含量1J 21中国妇幼保健,2004,14(08):19
6
Krok i er II ,Pogorelora TN ,O rlor V I ,P roducti on and recep tion of
gro w th factors i n the p l acenta duri ng physis o l og i cal and gestosis co m p l -i cated pregnancy 1J 21B i o m ed Kh i m ,
2007,53(1):86
(2008-04-02 收稿)
1编校 邹庆红2
#798#中国妇幼保健2009年第24卷