新冠病毒检测⽅法是什么?
新冠病毒的检测⽅法是什么?销售流程管理
新型冠状病毒的检测⽅法主要包含核酸检测、抗体检测、抗原检测⼏种⽅法。由于抗原检测检测检出率较低,⽬前新冠检测主要集中在抗体和核酸检测。核酸检测⽬前是新型冠状病毒检测的“标准”,具有早期诊断、灵敏度和特异性⾼.等特点;但抗体检测操作便捷、检测迅速,可作为核酸诊断的补充⼿段,但由于抗体检测“假阳性”和“假阴性”的局限性,不适⽤于复⼯复产复学等⼴⼤⼈的筛查,也不适⽤于低流⾏地区的流⾏病学调查。
检测原理:
基本上所有⽣物都含有核酸,核酸包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA),除了朊病毒外。⽽新型冠状病毒属于Beta冠状病毒属,该病毒是蛋⽩包裹的单链正链RNA病毒,寄⽣和感染⾼等动物(包括⼈)。病毒中特异性RNA 序列是区分该病毒与其他病原体的标志物。建筑经济技术指标
新型冠状病毒出现后,我国科学家已经成功发现了新型冠状病毒中的特异性核酸序列。如疑似患者样本中能检测到新冠病毒的特异性核酸序列,则认为该患者可能被新型冠状病毒所感染。
新型冠状病毒常⽤的核酸诊断⽅法有两种:病毒核酸特异基因检测和病毒基因组测序。最常见的检测新
冠病毒特异性核酸序列的⽅法是荧光定量PCR(聚合酶链式反应)。由于新型冠状病毒是RNA病毒,试剂盒检测基本都采⽤反转录加实时聚合酶链式反应法(RT-PCR),扩增病原体的核酸(RNA),同时通过荧光探针实时检测扩增产物。
那些明星整过胸在PCR反应体系中,包含⼀对特异性引物以及⼀个Taqman探针,该探针为⼀段特异性寡核苷酸序列,两端分别标记了报告荧光基团和淬灭荧光基团。
探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;如反应体系存在靶序列,PCR反应时探针与模板结合,DNA 聚合酶沿模板利⽤酶的外切酶活性将探针酶切降解,报告基团与淬灭基团分离,发出荧光。每扩增⼀条DNA链,就有⼀个荧光分⼦产⽣。荧光定量PCR仪能够监测出荧光到达预先设定阈值的循环数(CT值)与病毒核酸浓度有关,病毒核酸浓度越⾼,CT值越⼩。不同的⽣产企业的产品会依据⾃⾝产品的性能确定本产品的阳性判断值。
由于每个RT-PCR反应需要2个⼩时左右才出结果,因此,试剂盒在开发是⼀般都针对病毒序列中⾼度保守的2~3个序列。⽐如编码replicase(复制酶)或者necleocapsid(核蛋⽩⾐,核鞘)的核酸序列设计引物,但是各个⽅法⽤的序列都不完全相同。⼀些⽅法使⽤multiplex,也就是把多个⽬标序列在统⼀反应中扩增;另⼀些采⽤分布,先⽤⼀个⽬标序列筛查,阳性后再⽤另⼀个序列确认,这样可以有效缩短整个流程时间,加快检测速度。另外RNA病毒变异很快,⽤多个保守⽬标序列可以防⽌病毒变异造成的假阴性。
陈浩民马德钟⽬前批准产品均基于新型冠状病毒基因组中开放读码框1a/b(open reading frame 1ab,ORF1ab)、包膜蛋⽩(Envelope protein,E)和核⾐壳蛋⽩(nucleocapsid protein,N)进⾏选择。不同产品的检测原理基本⼀致,但是其引物、探针设计存在不同、有单靶区段(ORF1ab)、双靶区段(ORF1ab、N蛋⽩)、三靶区段(ORF1ab、N蛋⽩和E蛋⽩)的检测和判读差别。⼀般检测位于病毒ORF1ab和N基因上的两个靶标,同⼀份标本满⾜双靶标阳性或重复检测为单靶标阳性或两种标本同时满⾜单靶标才能确认病毒核酸阳性。
检测流程:
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检测程序需要经过5个步骤,取样、留样、保存、核酸提取、上机检测。⾸先根据试剂盒说明书进⾏样本采集,样本类型包括咽拭⼦、⿐拭⼦、痰液等。获得患者样本后,需尽快进⾏检测,如⽆法⽴即检测需要进⾏低温封装,并送到专门的检测机构进⾏检测。检测机构收到样本后,对样本进⾏核酸提取,核酸提取试剂应使⽤批准产品说明书中指定的核酸提取试剂盒。最后是荧光PCR核酸检测,也就是上机器检测。将提取物进⾏荧光PCR扩增反应,需要70~80分钟。