(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利
(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 202111644663.3
(22)申请日 2021.12.30
(65)同一申请的已公布的文献号
申请公布号 CN 114002427 A
(43)申请公布日 2022.02.01
(73)专利权人 北京健乃喜生物技术有限公司
地址 101407 北京市怀柔区雁栖经济开发
区雁东二路36号
(72)发明人 陈亚萍 尹午山 王美娜 张磊
贾晨晨 石云敬 赵雷 张丛
(74)专利代理机构 北京润捷智诚知识产权代理
事务所(普通合伙) 11831
代理人 安利霞
(51)Int.Cl.
2011年思想汇报
迪丽热巴的毕业院校G01N 33/569(2006.01)
G01N 33/577(2006.01)G01N 33/558(2006.01)G01N 33/548(2006.01)G01N 33/58(2006.01)C07K 16/10(2006.01)C12N 15/13(2006.01)审查员 张建敏
(54)发明名称
(57)摘要
本发明提供了一种新型冠状病毒抗原检测
的方法和试剂盒。试剂盒包括试剂条，试剂条包
括底板，以及位于底板上的沿样品层析的方向依
次相连的样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸
水纸；胶体金垫上附着有胶体金标记的质控标记
物和第二新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体；硝酸纤
维素膜上设有T线和C线，T线含有第一新型冠状
病毒核衣壳蛋白抗体，C线包含与胶体金标记的
质控标记物特异结合的配体；第一新型冠状病毒
核衣壳蛋白抗体具有包含SEQ ID NO:1、2和3所
示CDR序列的第一重链可变区和SEQ ID NO:4、5
和6所示CDR序列的第一轻链可变区。所提供的试
剂盒用于新型冠状病毒的体外检测，具有极高的
灵敏度和特异性。权利要求书1页 说明书17页序列表8页 附图1页CN 114002427 B 2022.04.12
C N 114002427
B
1.一种试剂盒，包括试纸条，其特征在于，所述试纸 条包括：
底板，以及位于底板上的样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；
沿样品层析的方向，所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次相连；
所述胶体金垫上附着有胶体金标记的质控标记物和第二新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段；
所述硝酸纤维素膜上设有T线和C线，所述T线含有第一新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段，所述C线上包含与所述胶体金标记的质控标记物特异结合的配体；
所述第一新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段具有第一重链可变区和第一轻链可变区，
所述第一重链可变区包括SEQ ID NO:1、2和3所示的CDR序列；
所述第一轻链可变区包括SEQ ID NO:4、5和6所示的CDR序列；
所述第二新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段具有第二重链可变区和第二轻链可变区，
所述第二重链可变区选自SEQ ID NO:11、12和13所示的CDR序列；
李光洁博客所述第二轻链可变区包括SEQ ID NO:14、15和16所示的CDR序列。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一重链可变区为：SEQ ID NO:7所示的序列。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述第一轻链可变区为：SEQ ID NO:8所示的序列。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，编码所述第一重链可变区的核苷酸序列为：SEQ ID NO:9所示的序列。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，编码所述第一轻链可变区的核苷酸序列为：SEQ ID NO:10所示的序列。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二重链可变区为：SEQ ID NO:17所示的序列。
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7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二轻链可变区为：SEQ ID NO:18所示的序列。
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，编码第二重链可变区的核苷酸序列为：SEQ ID NO:19所示的序列。
9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，编码第二轻链可变区的核苷酸序列为：SEQ ID NO:20所示的序列。
10.根据权利要求1~8中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述质控标记物选自羊抗鸡IgY抗体、鸡IgY抗体、羊抗兔IgG抗体、兔IgG抗体、亲和素、生物素‑BSA、兔抗鼠IgG、鼠IgG 抗体、DNP抗体、DNP ‑BSA中的至少一种。关于教师节的来历
11.根据权利要求10所述的试剂盒，其特征在于，所述与所述胶体金标记的质控标记物特异结合的配体选自鸡IgY抗体、羊抗鸡IgY抗体、兔IgG抗体、羊抗兔IgG抗体、生物素‑BSA、亲和素、鼠IgG抗体、兔抗鼠IgG、DNP ‑BSA、DNP抗体中的至少一种。
权 利 要 求 书1/1页CN 114002427 B
新型冠状病毒抗原检测的方法和试剂盒
技术领域
[0001]本发明涉及医药检测领域，具体涉及一种新型冠状病毒抗原检测的方法和试剂盒。
背景技术
[0002]新型冠状病毒（SARS‑COV‑2）其感染人体后会大概率导致新型冠状病毒肺炎（COVID‑19），具有极强的传染性和致病性，被世界卫生组织认定为一种严重的流行性疾病，对人类社会造成了极大的影响。
[0003]新型冠状病毒疫情出现后，为实现疾病的诊断和阻断病毒传播链，多种新型冠状病毒体外诊断技术问世，主要方法包括新新型冠状病毒核酸检测，新新型冠状病毒抗体检测和新型冠状病毒抗原检测几大类型。抗体检测是疫情初期的主要检测手段，但其为间接检测，有着无法直接判断是否携带病毒且窗口期长等缺点，后续逐渐被淘汰。核酸检测由于其高灵敏度一直被作为金标准使用，但核酸检测需要专业的设备及操作人员，而且检测速度较慢，无法在缺乏这些资源的地区广泛使用。抗原快速检测由于其检测速度快、操作简便、结果准确率较高等特点，成为世界范围内新型冠状病毒检测最主要的手段。
[0004]新型冠状病毒抗原检测主要使用免疫学方法检测，其检测原理是由新型冠状病毒抗体特异识别样本中含有的微量新型冠状病毒抗原，并通过与抗体结合的信标物将检测信号放大，以实现检测的目的。该技术的关键原料为新型冠状病毒的抗体，其决定了检测的准确性。
[0005]但是针对新型冠状病毒的检测还存在一系列的问题。主要表现为：1）抗体与抗原结合的亲和力不够高，导致检测的灵敏度较低，在实际应用中容易出现漏检。2）抗体易收到样品中其他物质的干扰，导致检测的特异性较差，在实际应用中容易出现假阳性结果。有关新型冠状病毒的检测还需要进一步改进。
发明内容
[0006]本发明的目的是提供一种新型冠状病毒抗原检测的方法和试剂盒，其应用于新型冠状病毒的检测，具有极高的灵敏度和特异性。
[0007]具体而言，本发明提供了如下技术方案：
[0008]本发明的第一方面提供了一种试剂盒，包括试纸条，所述试剂条包括：
[0009]底板，以及位于底板上的样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；
[0010]沿样品层析的方向，所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次相连；[0011]所述胶体金垫上附着有胶体金标记的质控标记物和第二新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段，
[0012]所述硝酸纤维素膜上设有T线（检测线）和C线（质控线），所述T线含有第一新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段，所述C线上包含与所述胶体金标记的质控标记物特异结合的配体；
[0013]所述第一新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段具有第一重链可变区和第一轻链可变区，
[0014]所述第一重链可变区包括SEQ ID NO:1、2和3所示的CDR序列，或者与SEQ ID NO: 1、2和3所示的序列至少具有一个保守氨基酸取代的序列；
乔丹-卡佛[0015]所述第一轻链可变区包括SEQ ID NO:4、5和6所示的CDR序列，或者与SEQ ID NO: 4、5和6所示的序列至少具有一个保守氨基酸取代的序列。
[0016]本发明的第二方面提供了一种新型冠状病毒抗原检测方法，包括：采用所述的试剂盒对待测样品进行检测。所述待测样品选自唾液、鼻拭子、鼻咽拭子、咽拭子、血液或尿液中的至少一种。
[0017]本发明所取得的有益效果为：本发明所提供的试剂盒，其含有的新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段用于新型冠状病毒体外诊断，具有极高的灵敏度和特异性。
附图说明
[0018]图1是根据本发明的实施例提供的试纸条的结构示意图，其中标号1为样品垫，2为胶体金垫，3为硝酸纤维素膜，4为吸水纸，5为底板，6是检测线，7是质控线。
具体实施方式
[0019]下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。在对本发明描述的过程中，对于本文中有关的术语进行了解释和说明，这些解释和说明仅仅是为了方便对于方案的理解，并不能看做是对本发明保护方案的限制。
[0020]抗体
[0021]本文中，术语“抗体”是能够与特异性抗原结合的免疫球蛋白分子。包括两条分子量较轻的轻链和两条分子量较重的重链，重链（H链）和轻链（L链）由二硫键连接形成一个四肽链分子。其中，肽链的氨基端（N端）氨基酸序列变化很大，称为可变区（V区），羧基端（C端）相对稳定，变化很小，称为恒定区（C区）。L链和H链的V区分别称为VL和VH。
[0022]在可变区中某些区域氨基酸组成和排列顺序具有更高的变化程度，称为高变区（Hypervariable region，HVR），高变区为抗原和抗体结合的位置，因此也称为决定簇互补区（complementarity‑determining region，CDR）。重链可变区和轻链可变区上均有三个CDR区。
[0023]本发明提供了一种试剂盒，包括试纸条，所述试剂条包括：底板，以及位于底板上的样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；沿样品层析的方向，所述样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次相连；所述胶体金垫上附着有胶体金标记的质控标记物和第二新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段；所述硝酸纤维素膜上设有T线（检测线）和C 线（质控线），所述T线含有第一新型
冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段，所述C线上包含与所述胶体金标记的质控标记物特异结合的配体；所述第一新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或抗原结合片段具有第一重链可变区和第一轻链可变区，所述第一重链可变区包括SEQ ID NO:1、2和3所示的CDR序列，或者与SEQ ID NO:1、2和3所示的序列至少具有一个保守氨基酸取代的序列；所述第一轻链可变区包括SEQ ID NO:4、5和6所示的CDR序列，或者与
SEQ ID NO:4、5和6所示的序列至少具有一个保守氨基酸取代的序列。“抗原结合片段”是指具有特异性结合新型冠状病毒核衣壳蛋白抗原能力的抗体片段。“保守氨基酸取代”指的是氨基酸被另一氨基酸发生生物学上、化学上或者结构上相似的残基所取代。生物学上相似的指的是该取代不破坏新型冠状病毒核衣壳蛋白抗体或者与新型冠状病毒核衣壳蛋白抗原的生物学活性。结构上相似指的是氨基酸具有相似长度的侧链，如丙氨酸、甘氨酸或丝氨酸，或具有相似大小的侧链。化学相似性指的是氨基酸具有相同的荷电或者都是亲水或者疏水的。例如疏水残基异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸或者甲硫氨酸相互取代。或者用极性氨基酸例如用精氨酸取代赖氨酸、谷氨酸取代天冬氨酸、谷氨酰胺取代天冬酰胺，丝氨酸取代苏氨酸等等。所提到的保守氨基酸取代可以是一个、两个或者三个氨基酸取代。
[0024]所示出的各序列如下所示，需要说明的是这些CDR序列来自于IMGT数据库()的结果。本领域技术人员应该知悉的是，选择分析的数据库发生改变时，来自于重链可变区和轻链可变区的CDR序列会稍有改变，这些改变也应包括在本发明的保护范围之内。
[0025]
[0026]在至少一些实施方式中，所述第一重链可变区选自：（1）SEQ ID NO:7所示的序列，或者（2）与SEQ ID NO:7所示的序列相比，具有80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%以上同源性的序列。
[0027]在至少一些实施方式中，所述第一轻链可变区选自：（1）SEQ ID NO:8所示的序列，或者（2）与SEQ ID NO:8所示的序列相比，具有80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%以上同源性的序列。
[0028]在至少一些实施方式中，编码所述第一重链可变区为如SEQ ID NO:7所示的序列。[0029]QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSPSSYGMSWVRQAPGKGLEWIGYINIEDYAYYAPWAKGRFTI SKTSSTTVDLKVTSPTTEDTATYFCGRGGYAADIWGPGTLVTVSS（SEQ ID NO:7）
[0030]在至少一些实施方式中，编码所述第一轻链可变区为如SEQ ID NO:8所示的序列。[0031]DVVMTQTASPVSAAVGGTVTISCQSSESVYTNNRLSWFQQKPGQRPKLLIYRASKLASGVPSRFSGSG SGTQFTLIISDVQCDDAATYYCAGVGSGGTDIAFGGGTKVEIK（SEQ ID NO:8）
[0032]所提供的抗体或抗原结合片段，除了上述提到的第一重链可变区和第一轻链可变区之外，还可以进一步包括重链恒定区和轻链恒定区。重链恒定区和轻链恒定区序列可以来自于人来源的序列。
[0033]在至少一些实施方式中，编码所述第一重链可变区的核苷酸序列选自：（1）SEQ ID NO:9所示的序列；或者（2）与SEQ ID NO:9所示的序列相比，具有80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%以上同源性的序列。在至少一些实施方式中，编码所述第一轻链可变区的核苷酸序列选自：（1）SEQ ID NO:10所
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