蛋白质的测定方法—凯氏定氮法
一、 原理
食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解,产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后用盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量。
二、 试剂
1、硫酸铜 硫酸钾 浓硫酸 氢氧化钠
2、硼酸溶液(20g/L):称取20g硼酸,加水溶解并稀释至1000ml。
3、氢氧化钠溶液(400g/L):称取400gNaOH加水溶解后,放冷,并稀释至1000ml。
4、盐酸标准溶液(0.05mol/L)
5、甲基红乙醇溶液(1g/L):称取0.1g甲基红,溶于95%宋喆老婆杨慧照片乙醇,用95%乙醇稀释至100ml。
6、溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L):称取0.1g溴甲酚绿,溶于95%乙醇,用95%乙醇稀释至100ml。
7、甲基红—溴甲酚绿混合指示剂:临用时以1:5混合。
三、测定
1、试样处理(消化):准确称取水解胶原蛋白0.5g,准确至0.0001g,硫酸铜0.2g,硫酸钾6g于干燥洁净的凯氏定氮管中,至消化炉上,加浓硫酸20ml,盖帽。开启消化炉(温度设定为400℃),仪器大约20分钟达到设定温度,开始计时,样品消化需2-3h,至液体呈蓝绿并澄清透明后。断电,放冷。
2、蒸馏与吸收:将消化好的试样转移至100ml容量瓶中,加水(边加边缓慢振摇容量瓶,由于样品放热,操作时戴手套以免烫伤)稀释至100ml容量瓶中,摇匀,备用。同时做空白试验。向接收瓶中加入硼酸(20g/L)50ml及10D甲基红—溴甲酚绿混合指示剂。打开凯氏定氮仪电源开关,打开冷却水,设置加碱(40%的NaOH 溶液)时间为7秒,蒸馏时间为6分钟,取定容后溶液10ml到消化管中,放置到相应位置。关闭安全门,开机预热3分钟
后按启动键开始加碱、蒸馏。当吸收液呈中性时,停止吸收。用0.05mol/L盐酸标准液滴定接收液,颜由绿变为灰红即为滴定终点,记录消耗盐酸体积。
3、计算
C*(V1-V0)*0.014
X=----------------------*F*100
M*10/100
其中水解胶原蛋白换算系数F为5.79冬季流行
1、 注意事项熊猫tv女主播
2、 放置消化管事项:先将消化管托架向下拉,其次将消化管口与黑胶体紧密接触,最后将消化管托架轻轻套在消化管上。
4、 清洗正面蒸汽瓶的污垢:操作同清洗碱电磁阀,但将蒸馏时间设置为5分钟,按启动键,反复几次直到干净为止。
5、 清洗仪器内蒸馏瓶的污垢:关闭电源,打开后盖,将蒸馏瓶上的塑料螺母拧开,注入米醋浸泡10分钟,然后将残夜排出,反复用蒸馏水冲洗干净后,再拧上塑料螺母,排干净后必须再夹上夹子。
6、 清洗碱桶、蒸馏水桶和清洗桶。(只需将桶盖打开即可)
7、 排废液:松开仪器背后的夹子将蒸馏瓶的残水排掉,排干净后必须再夹上夹子。(每3天)
8、 当取下或放上消化管时要注意烫伤。大学生实践报告
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