凯氏定氮法原理
凯氏定氮法是一种检测物质中“氮的含量”的方法。蛋白质是一种含氮的有机化合物，食品中的蛋白质经硫酸和催化剂分解后，产生的氨能够与硫酸结合，生成硫酸氨，再经过碱化蒸馏后，氨即成为游离状态，游离氨经硼酸吸引，再以硫酸或盐酸的标准溶液进行滴定，根据酸的消耗量再乘以换算系数，就可以推算出食品中的蛋白含量。
  一凯氏定氮法原理
凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程称为有机物的消化。为了加速和完全有机物质的分解，缩短消化时间，在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、、过氧化氢等试剂，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解，除硫酸钾外，也可以加入硫酸钠、氯化钾等盐类类提高沸点，但效果不如硫酸钾。硫酸铜起催化剂的作用。凯氏定氮法中可用的催化剂种类很多，除硫酸铜外，还有、汞、硒粉、钼酸钠等，但考虑到效果、价格及环境污染等多种因素，应用最广泛的是硫酸铜。使用时常加入少量过氧化氢、次氯酸钾等作为氧化剂以加速有机物氧化。消化完成后，将消化液转入凯氏定氮仪反应室，加入过
量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内，硼酸接受氨后，形成四硼酸铵，然后用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。滴定
消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-次甲基蓝混合指示剂颜变化来判定。测定出的含氮量是样品的总氮量，其中包括有机氮和无机氮。
反应式如下：
  1.有机物中的氮在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，消化生成（NH4）2SO4 合肥师范学院专升本
 反应式为： H2SO4==SO2+H2O+[O]  ；R. CH.COOH+[O]==R.CO.COOH+NH3；
  R.CO.COOH+[O]==nCO2+mH2O；    2NH3+H2SO4==(NH4)2SO4
  2.在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3 ，收集于 H3BO3 溶液中反应式为： 2NH4++OH-==NH3+H2O；NH3+H3BO3==NH4++H2BO3-
3. 再用已知浓度的HCI标准溶液滴定，根据HCI消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量。 反应式为： H2BO3-+H+==H3BO3
  蛋白质是一类复杂的含氮化合物，每种蛋白质都有其恒定的含氮量[约在14％~18％，平均为16％（质量分数）]。凯氏定氮法测定出的含氮量，再乘以系数6.25，即为蛋白质含量。
 
二. [方法和步骤]
  （一）消化
 1、准备6个凯氏烧瓶，标号。1、2、3号烧瓶中分别加入适当浓度的蛋白溶液1.0mL，样品要加到烧瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶颈上。再依次加入硫酸钾-硫酸铜接触剂0.3g，浓硫酸2.0mL，30%过氧化氢1.0mL。4、5、6号烧瓶作为空白对照，用以测定试剂中可能含有的微量含氮物质，对样品测定进行校正。4、5、6号烧瓶中加入蒸馏水1.0mL代替样液，其余所加试剂与1、2、3号烧瓶相同。
 2、将加好试剂的各烧瓶放置消化架上，接好抽气装置。先用微火加热煮沸，此时烧瓶内物质炭化变黑，并产生大量泡沫，务必注意防止气泡冲出管口。待泡沫消失停止产生后，加大火力，保持瓶内液体微沸，至溶液澄清后，再继续加热使消化液微沸15min。
在消化过程中要随时转动烧瓶，以使内壁粘着物质均能流入底部，以保证样品完全消化。
消化时放出的气体内含SO2，具有强烈刺激性，因此自始自终应打开抽水泵将气体抽入自来水排出。整个消化过程均应在通风橱中进行。消化完全后，关闭火焰，使烧瓶冷却至室温。
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计算
杜平
凯氏定氮法中常量、微量、半微量的差异化比较
凯氏定氮法是经典已毋庸置疑，在测定物质中氮的含量或者样品中蛋白质的含量时，凯氏定氮法是百试不爽的方法。而如今，根据凯氏定氮法的原理，各种凯式定氮仪、全自动定氮仪纷纷亮相，它们把实验中需要人工操作的步骤集成到了仪器之中，使得仪器在无人的情况下也能正常运行。
凯氏定氮法的原理如下：在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准碱滴定，就可计算出样品中的氮量。
凯氏定氮法分为常量，微量，和半微量，这三者的区别在于检测用样品量，但是它们的区分并不是那么明显，你在具体操作时可以灵活应用，不必拘泥于特定的方法。下面分析下这三者在定义上的区别：
1、常量由于可以把全部消化液一同蒸馏测定，故较适合蛋白质含量低的样品。
2、微量、半微量差别在装置上，二者皆属于水蒸汽蒸馏操作，只是前者把蒸汽直接导入反应室内，后者把蒸汽导入反应室外加热，由于二者皆取消化液的一部份操作，可平行蒸馏操作，但检测限要较常量法高。
3伤了心的女人怎么了、纯粹从回收率的角度看，半微量要稍好。
原理：
微量凯氏定氮的使用范围在0.2-1.0毫克氮
步骤：
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1.浓硫酸消化→2.蒸馏挥发无机氨（氨气）→3.硼酸吸收（含有指示剂）→4.盐酸滴定
计算：
X为样品蛋白质含量，g/100g；V1为样品滴定消耗盐酸体积，ml
V2为空白滴定消耗盐酸的体积，ml；C为标准盐酸的浓度，mol/L；F为氮换算蛋白的系数；0.014为消耗1ml盐酸N的分子量；m为样品质量
原理：
微量凯氏定氮的使用范围在0.2-1.0毫克氮
步骤：
1.浓硫酸消化→2.蒸馏挥发无机氨（氨气王俊凯有没有整容）→3.硼酸吸收（含有指示剂）→4.盐酸滴定
计算：
X为样品蛋白质含量，g/100g；V1为样品滴定消耗盐酸体积，ml
V2为空白滴定消耗盐酸的体积，ml；C为标准盐酸的浓度，mol/L；F为氮换算蛋白的系数；0.014为消耗1ml盐酸N的分子量；m为样品质量