---- 凯氏定氮法
一:实验目的:掌握凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理
学会凯氏定氮法的操作技术
二:实验原理:◆蛋白质的含氮量较恒定,一般为 16%,上下略有浮动
◆N/16%=N*6.25=蛋白质的含量
◆样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,其中碳和氢被氧化为二氧化碳和水逸出,而样品中的有机氮转化为氨与硫酸结合成硫酸铵。然后加碱蒸馏,使氨蒸出,用硼酸吸收,再以标准盐酸溶液滴定,测出释放的氨含量,并计算氮素含量,再乘以6.25即为蛋白质的含量。
◆整个过程分三步:消化、蒸馏和吸收、滴定
1:消化:蛋白质 + H2SO4 → (NH4)2SO4 + SO2↑+ CO2↑+ H2O
瓶颈45度角倾斜
2:蒸馏:消化液 + 氢氧化钠加热蒸馏,放出氨气
2NaOH+ (NH4)2SO4= 2NH3 ↑ + Na2SO4 + 2H2O
3:吸收与滴定(1)用4%硼酸吸收
(2)用盐酸标准溶液滴定
(3)混合指示剂(甲基红—溴甲基酚绿混合指示剂)
指示剂:红———→绿 ———→红
(酸)吸收 (碱) 滴定 (酸)
3NH3 + H3BO3→ (NH4)3BO3
(NH4)3BO3+ 3HCl → 3NH4Cl + H3BO3
三:实验步骤
1、消化:准确量取牛奶0.5mL,移入干燥的凯氏烧瓶中(勿粘附在瓶壁上),加入0.2g硫酸铜、0.3g硫酸钾、10mL浓硫酸,小心摇匀,于通风橱内消化(先小火,待炭化完全后,加大火力至溶液呈蓝绿),冷却至室温,定容至25mL。
同时消化一份空白试剂为对照。
2、蒸馏、吸收
陈秀丽老公◆取40mL硼酸溶液于锥形瓶中,加2d混合指示剂,置于冷凝管下端,为接受瓶。
◆量取5mL样品消化液由加料口加入反应室,用5mL蒸馏水冲洗加料口,再加入40%NaOH10mL(溶液呈蓝褐),不要摇动,立即封口。
◆夹紧缓冲管下口,开始蒸馏,当接收瓶溶液颜变化时,继续蒸馏3-5min,下降接收瓶,使硼酸液面离开冷凝管口,继续蒸馏1min,用蒸馏水淋洗浸入硼酸的管外壁,移出接收瓶,滴定。
3、滴定
◆用0.01mol/L的盐酸标准溶液滴定接收瓶内的反应液
美容养颜汤的做法◆同时做空白对照
四:实验结果计算: ×5
W—蛋白质的质量分数,方志友无马赛克图片%;
入库单
c—盐酸标准液的浓度,mol/L;
1—空白滴定消耗标准盐酸液量,mL;
用苹组词V2—样品滴定消耗标准盐酸液量,mL;
m—样品体积,mL;
0.014—氮的毫摩尔质量,g/mmol;
F—蛋白质系数。
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