急性肾功能衰竭及肾功对药物作用的影响
肾脏是人体重要器官之一，对调节和维持人体内环境的稳定有重要作用。当各种病因引起肾脏的泌尿功能在短期内急剧下降，机体内环境将会发生严重紊乱，临床表现有尿量和尿成份的变化、氮质血症、高钾血症和代谢性酸中毒。其发病机制主要与肾血液灌流减少、肾小管阻塞、肾小管原尿返漏等因素有关。
【实验目的】
【实验原理】
用引起急性肾小管坏死（ATN）复制中毒性肾病，并观察少尿期主要机能代谢变化。
【实验对象】
家兔(体重在2-2.5kg)
【器材、药品】
1%HgCl2、0.9%NaCl溶液、1%普鲁卡因、0.2%肝素钠溶液、肌酐标准应用液、、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、3%焦锑酸钾溶液、无水乙醇、氢氧化钙、钠标准应用液、pH 12.0磷酸盐－氢氧化钠缓冲液、724型分光光度计、离心机、恒温水筒、5ml离心管、5ml注射器、0.5ml、2ml、饰品批发市场5ml刻度吸管、手术器械、火焰光度计、血气分析仪。
【方法步骤与观察项目】
本实验以一般状态、尿量、尿蛋白、血浆肌酐、尿肌酐、内生肌酐清除率、血浆钠、尿钠、血浆钾、滤过钠排泄分数、酚红排泄率、肾形态学观察为观察指标。
(一) 复制模型：在实验前24小时取两只家兔称重后，一只肌肉端午节放假安排2020高速免费吗(或皮下)注射1%HgCl2(1.2ml╱kg)造成急性肾功能衰竭，另一只在相同部位注射等量的生理盐水作为正常对照。
(二) 取上述两只家兔分别称重固定于兔台上，耳缘静脉注射5%葡萄糖溶液（15ml/kg），以保证有足够的尿量。
(三) 颈部剪毛、局麻、作颈动脉插管，取血置于盛有肝素的离心管内，离心(2000rpm，15min)后取血浆以备测定血中肌酐钠浓度。
(四) 腹部剪毛、局麻，在耻骨联合上1.5cm处作腹正中切口，分离皮下组织，沿腹白线切开腹膜，暴露膀胱，抽取膀胱中的尿液以备作尿肌酐、尿钠浓度测定，分离两侧输尿管，作输尿管插管，收集1h尿液，换算成每分钟排尿量。
(五) 观察实验组及对照组家兔的一般状态、呼吸、尿量等。
(六) P.S.P试验 1.从家兔耳缘静脉内准确快速注入酚红溶液6mg/ml，立即记时。
2.用50ml注射器抽取生理盐水30ml及20%葡萄糖20ml，由耳缘静脉注入。
3.分别于注射酚红后30分钟、1小时后收集尿量。
4.将每次收集的尿量放入500ml量筒内，加10%NaOH5ml，再加水至500ml，搅拌均匀后，从中取10ml置于标准管内径相等的试管中与标准管比，得出不同时间内酚红排除率。
(七) 尿蛋白定性试验
将膀胱中收集的尿液取5ml置于试管中在酒精灯上加热至沸腾，待尿变混浊后加10%醋酸3-5滴，如混浊不退(或加热混浊仍不退)为蛋白定性试验阳性，按其混浊程度与下面标准判定结果，如加醋酸后尿变清，是尿中无机盐所致。
野子歌词 “－” 表示尿液清晰不显混浊
“＋” 尿液出现轻度白混浊，呈白雾状(含蛋白质约0.01-0.05克%)
“＋＋” 医药价格查询尿液呈颗粒混浊(含蛋白质约0.05-0.2克%)
“＋＋＋” 尿液呈絮状混浊(含蛋白质约宋佳陈学冬0.2-0.5克%)
“＋＋＋＋” 尿液呈块状混浊(含蛋白质>0.5克%)
(八) 应用焦锑酸钾比浊法按下表的操作测定血清和尿钠含量。
取膀胱中尿液5ml，移入含氢氧化钙的试管中，用玻璃棒搅拌混匀，放置15min后离心(2000rpm，5min)，吸取上清尿液(已除去磷酸盐类)至另一试管供作尿钠测定。
钠测定操作步骤
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标准管(ml) 测定管(ml)
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血清或尿滤液 --- 0.2
钠标准应用液 0.2 ---
无水乙醇 1.8 1.8
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混和测定管离心(2000rpm，3min)后吸取上清液，标准管直接吸取，分别移入另一试管。
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上清液
3%焦锑酸钾溶液
混合、静置5min后用520nm波长，以蒸馏水校正光密度至零点进行比浊，记录各管光密度读数。
计算： 测定管光密度
×140＝钠mmol/l
标准管光密度
(九) 按下表沉淀蛋白的操作测定血清和尿肌酐含量。
取膀胱中尿液1ml，用蒸馏水作1：100稀释，以备测定尿中肌酐含量。
肌酐测定操作步骤
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标准管(ml) 测定管(ml) 空白管(ml)
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血清或1：50稀释尿 --- 0.6 ---
肌酐标准应用液 0.6 --- ---
蒸馏水 --- --- 0.6
50mmol/L 2.4 2.4 2.4
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充分混匀3min后离心(2000rpm，10min)测定管，将上述三种试管中的上清液分别直接倾入另一试管内
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PH12.0磷酸盐－
氢氧化钠缓冲液 0.6 0.6 0.6
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充分混合置37℃水箱中25min后取出室温冷却20min后，以波长525nm蒸馏水调零，比记录各管光密度读数
计算：
测定管光密度－空白管光密度
×2＝肌酐mg╱dl
标准管光密度－空白管光密度
尿中肌酐含量
内生肌酐清除率： 尿量(ml╱min) =ml╱min
血中肌酐含量
肌酐mg%×88.402=μmol╱L
(一十) 将上述测定的血清及尿的钠和肌酐和肌酐含量，按下列公式计算FENa
尿〔Na+〕╱血〔Na+〕
FENa＝ ×100
尿〔肌酐〕╱血〔肌酐〕
(一十一) 应用火焰光度分析法按下述的操作测定血钾含量(或参见实验四十七 高钾血症)
1. 血清的稀释：取血清0.1ml置于150×15mm试管内，加重蒸馏水9.9ml，充分混匀。
2. 安装调试好仪器，将钾滤片置于光路中，将样液吸入管放入钾标准液内，待火焰呈黄后，开启快门，移动光栅，使检流计读数控制在80-100之间，作为钾标准读数，关闭快门。
3. 用重蒸馏水喷雾洗涤至火焰恢复到空白时所呈的蓝紫。
4. 将样液吸入管放入稀释血清(1/100)中，待火焰呈黄后，开启快门，记录检流计上的读数(钾样读数)关闭快门，依上法用重蒸水喷雾洗涤至火焰恢复到蓝紫。
计算：
钾测定读数 钾测定读数
×0.04×100＝ ×4＝mmol╱L
钾标准读数 钾标准读数
(一十二) 形态学观察
1.处死动物，取出两侧肾脏，沿肾之凸面中部作一水平切面，深达肾盂，注意肾包膜情况，切面的泽、皮质与髓质分界是否清楚等，并与对照组兔肾作比较。
2.组织切片示教：于显微镜下观察皮质肾小管上皮有无明显的变性坏死、脱落，管腔内有无蛋白、红细胞和管型存在。
【注意事项】
(一) 试管吸管等器材要求清洁。血清、尿液标本和标准液等试剂量必须准确，所有操作均应按生化要求严格进行。
(二) 于膀胱壁穿刺抽取尿液时，应于无血管处部位穿入，避免出血以致影响实验
结果。
(三) 吸取酚红液一定要注意量的准确。
(四) 做尿蛋白定性试验加热时谨防管内尿液喷出伤人。
(五) 凡蹙怎么读FENa>2表明急性肾功能衰竭，FENa<1为功能性急性肾衰，正常动物FENa>1
或<2。
附：
(一) 3%焦锑酸钾溶液：称取焦锑酸钾(K2H2Sb2O7·4H2O)15g，加蒸馏水350ml和10%KO
H溶液15ml，煮沸溶解冷却后加蒸馏水至500ml。
(二) 钠标准贮存液(1mol/L)：取NaCl少许置于烧杯中在110-120℃烘箱内烤4h，取出后在干燥器内待冷，精确称取5.845g置于100ml容量瓶内加蒸馏水至刻度。
(三) 钠标准应用液(140mmol/L)：准确吸取钠标准贮存液14ml置于100ml容量瓶内加蒸馏水至刻度。
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