化学工业
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汪美麟121
纸谱法是分离、鉴定有机化合物的重要方法之一。纸谱属分配谱，以滤纸为载体，滤纸所吸附
的水为固定相，展开剂为流动相，由于样品各成分在两相溶剂中的分配系数不同而实现分离[1]。纸谱法应用广泛，纸谱具有所需仪器设备简单，操作方便、所需样品量少和灵敏度较高等优点[2]，既是分离、分析氨基酸混合物的常用方法，也是生物类专业课程实验教学中必须掌握的内容。纸谱分析法是用滤纸作为惰性支持物的微量分离的分析层析法。层析溶剂（扩展剂）由一定比例的多元溶剂构成。
1 材料与方法
1.1 实验器材考证券从业资格证
手套，塑料薄膜，白线，针，小刀，直尺，毛细管，大烧杯（1000 mL），小烧杯：(500 mL)培养皿：（直径9 cm），定性滤纸（双圈牌90 c m×90 c m大张滤纸：用小刀和直尺裁取长12 c m、宽14 c m 的一张），电吹风。
1.2 实验试剂
（1）扩展剂：为4份水饱和的正丁醇和一
份醋酸的混合物共72 m L，充分静置后分
层，放出下层水分，取上层液体作扩展剂。
（2）氨基酸溶液：
0.5％的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸（各组分浓度均为0.5%)各50 mL。
（3）显剂：
0.1％水合茚三酮正丁醇溶液50 m L。(称取0.1 g水合茚三酮溶于100 mL正丁醇溶液中)
1.3 实验方法与步骤
（1）将盛有20 m L展层溶液的小烧杯置于倒置的大烧杯中，用塑料薄膜密封，平衡20分钟。
（2）带上手套，取宽为12 c m 、高为14 cm的滤纸一张。按下图1所示在滤纸的底端距边缘2 cm处轻轻用铅笔划一条直线，在直线上做六个记号，每个记号间隔2 cm，这就是原点的位置，也就是点样位置。
（3）点样：点样时，用毛细管分别取5 u L左右的氨基酸样品，点在这六个位置上。按六个点从左至右的顺序，分别点以下溶液：丙氨酸，缬氨酸，赖氨酸，脯氨酸，精氨酸，混合溶液（将以上五个溶液混合后的溶液点样）。点样后，立即用电吹风热风吹干再点，同一位置上需点2～3次，2～3u L/次。保证每点在纸上扩散的直径控制在
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2～3 m m。
（4）层析：用针、线将滤纸缝成筒状，纸的两侧边缘不得接触。取20 m m 左右的扩展剂倒入培养皿（液面高度约1厘米），将平衡好的大烧杯垂直提起，立即把盛有扩展剂的培养皿放在其下，以点样一端在下，将滤纸直立于培养皿中（见图1）。迅速置于倒置的大烧杯中，用塑料薄膜密闭（用塑料薄膜将大、小烧杯全部包裹）层析大约2 h，等待溶剂前沿上升约10 c m 时，取出滤纸，将筒状的滤纸两侧边缘缝的线拆开，将滤纸展开，立即用铅笔描出溶剂前沿线，迅速用电吹风热风吹干。
（5）显：将显剂装在喷雾器中，用喷雾器在通风橱中向滤纸上均匀喷上0.1％茚三酮正丁醇溶液，然后立即用电吹风热风吹干，即显出各层析斑点。0577是哪里的区号
（6）计算各种氨基酸的Rf值。
3 实验结果
3.1 实验结果的表示方法
氨基酸经展开并分离显后在纸谱(层析)图谱上的位置是用Rf值(比移值)来表示的：
Rf＝原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离(见图2)。
在一定的条件下某种物质的R f值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
3.2 实验结果
丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸、脯氨酸、精氨酸五种氨基酸以及五种氨基酸的混合溶液分别点六个样，以正丁醇：乙酸：水=4∶1∶5的溶剂系统为展开剂，长12 c m、宽14 c m 的大张双圈定性滤纸为谱滤纸，在实验温度30 ℃下进行纸谱分析实验，获得以下实验结果，见图3和表1。
李小璐蒋劲夫新剧参考文献
[1] 刘约权，李贵深.化学教学论[M].北京：
高等教育出版社,2005：84－87.[2] 罗建成.生物工业分析[M].北京：化学工
业出版社,2009:108.
表1 30℃下氨基酸的Rf值
氨基酸的纸谱分析
夏凡
（南京化工职业技术学院应用化学系 江苏南京 210048）
摘 要：纸谱法是分离、鉴定有机化合物的重要方法之一。纸谱法还是分离、分析氨基酸混合物的常用方法。该文以正丁醇：乙酸：水=4:1:5的溶剂系统为展开剂，长12 cm、宽14 cm的大张双圈定性滤纸为谱滤纸，在实验温度30℃下进行纸谱分析实验，以丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸、脯氨酸、精氨酸五种氨基酸分别点样，以Rf值表示实验结果，得到以上实验条件下五种氨基酸的Rf值，可为从事氨基酸纸谱分析实验者提供定性分析的参考结论。
关键词：纸谱 分析 氨基酸中图分类号：O658.1 文献标识码：A
文章编号：
1674-098X(2013)09(b)-0121-01
图1 点样及层析方法示意图
图2 Rf值示意图
图3 实验斑点图氨基酸Rf值丙氨酸0.288缬氨酸0.495赖氨酸0.208脯氨酸0.374精氨酸
香皂的成分0.231
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