摘要
本文通过研究具有抗糖尿病或利尿生津作用的中药金线莲、熟地黄、生地黄、地骨皮以及芦根的提取物对PPARs的两个亚型PPARβ和PPARγ的激动作用，探讨其抗糖尿病的作用是否可能是通过PPARs介导的。
本文首先对五种中药进行了提取，得到其石油醚、乙酸乙酯、70%醇提、水提以及水提醇沉五个部分，然后配制不同浓度的各提取物，以0.1% DMSO及水作为对照组，每组作3个复孔的平行对照，在96孔细胞培养板中，针对实验所用的Hela细胞进行了提取物细胞毒性实验，确定了五种中药各个提取物进行PPARs研究实验的浓度范围，接着采用Hela细胞报告基因筛选模型，对中药的提取物进行PPARs的激动实验，将报告质粒和PPARγ质粒（或PPARβ质粒）共转染Hela细胞，得到大量表达PPARγ（或PPARβ）的Hela细胞，用不同浓度的提取物作用转染细胞，并分别用0.1% DMSO及水作为阴性对照组，以0.5 µg/mL的非诺贝特作PPARβ组的阳性对照，以0.5 µg/mL罗格列酮作PPARγ组的阳性对照。最终进行荧光素酶活性检测，以药物作用组与阴性对照组的比值为参考标准，筛选出对PPARβ（或PPARβ）有激动作用的提取物
对于PPARβ有激动作用的包括金线莲（石油醚部分：200µg/mL）、熟地黄（石油醚部分：100µg/mL）及芦根（乙酸乙酯部分：200µg/mL），激活倍数分别为4.93倍、4.93倍及3.33倍。五种中药对于PPARγ均有一定激动作用，激活倍数分别为3.69倍、2.9倍、2.95倍、6.27倍、7.48倍（金线莲、熟地黄、生地黄、地骨皮、芦根）；其中以芦根的乙酸乙酯部分的激动作用最为显著，激活倍数达7.48倍。
关键词：糖尿病，中药提取物，过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)，天然激动剂
目录
中文摘要.......................................................................................................................................... I ABSTRACT ................................................................................................ 错误！未定义书签。目录............................................................................................................................................ III 1 绪论 . (1)
1.1五种中药的抗糖尿病作用研究概况 (1)
1.1.1金线莲的抗糖尿病作用研究概况 (1)
1.1.2熟地黄及生地黄的抗糖尿病作用研究概况 (2)
1.1.3地骨皮的抗糖尿病作用研究概况 (2)
1.1.4芦根的抗糖尿病作用研究概况 (2)
1.2 PPARs对糖尿病等疾病的作用概况 (3)
双系统安装教程1.3 PPARγ及PPARβ的功能简介 (3)
王棠云月事女1.3.1 PPARγ的功能 (3)
1.3.2 PPARβ的功能 (3)
1.4 关于PPARγ及PPARβ激动剂的研究现状 (4)
1.4.1PPARγ的激动剂研究现状 (4)
1.4.2 PPARβ的激动剂研究现状 (5)
1.5 小结 (6)
2 实验部分 (7)
2.1 实验材料 (7)
2.2 主要仪器 (7)
2.3 试剂 (8)
2.4 中药不同极性组分的提取 (9)
2.5 中药提取物的MTT细胞毒性实验 (12)
2.5.1 含胎牛血清双抗的培养基（DMEM）的配制 (12)
2.5.2 MTT细胞毒性实验具体操作步骤 (12)
2.6 中药提取物激动PPARγ及PPARβ的研究内容 (13)
2.6.1 基本实验 (13)
2.6.2 中药提取物对PPARγ与PPARβ 的激动作用实验 (16)
3 结果及分析讨论 (18)
3.1 MTT细胞毒性实验结果及分析讨论 (18)
3.2 中药提取物对PPARs的激动作用实验结果及分析讨论 (20)
3.2.1 阳激活倍数 (20)
3.2.2 中药提取物对PPARγ的激动作用 (21)
3.2.3中药提取物对PPARβ的激动作用 (26)
3.2.4 总结 (30)
彭于晏江疏影结论 (31)
参考文献 (32)
致谢 (36)
1 绪论
糖尿病是一种常见病，现在随着社会的发展及人口增加等原因，发病的人数越来越多了。发达国家糖
尿病的患病率最高已达10%，我国的糖尿病的患病率也已达3%。根据病因学的不同，糖尿病分为三类，即I、II及妊娠型。其中，Ⅱ型糖尿病是一种代谢上的疾病，其主要的特征是高血脂血糖、胰岛素耐受。病人一般经历以下的病理过程：发生肥胖的症状——细胞PPARs进行调节——胰岛素产生耐受——高血胰岛素的产生——胰岛B细胞受损及受压——胰岛素的释放量减少——最终导致发生高血糖。整个过程的核心环节是过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferators activated receptors，PPARs）的失活引起的胰岛素耐受[1]。。本论文主要从II型糖尿病方向展开，从传统的有抗糖尿病作用或利尿生津的中药出发，通过抗糖尿病中药与PPARs的关系出发进行研究和探讨。
1.1五种中药的抗糖尿病作用研究概况
金线莲、熟地黄、生地黄、地骨皮及芦根是传统的民间中药，据民间研究，五种中药均具有抗糖尿病或利尿生津作用，它们参与了许多与降血糖有关的过程，如参与脂肪代谢，免疫调节，改变胰岛细胞状态等过程，现在就五种中药的抗糖尿病作用进行简要概括。
1.1.1金线莲的抗糖尿病作用研究概况
金线莲(Anoectochilus roxburghii) 是兰科开唇兰属的植物，是一种多年生珍贵稀有的中草药，在我国主产于福建，广西.又名金蚕、金线虎头蕉、金石松、金线兰、金线入骨消等[2]全草药用，具有清热凉血、强心、利尿生津、降血压等功效[3]。。据有关文献报道金线莲对糖尿病有一定的作用[4]。
罗志祥 欧弟陈卓等通过研究STZ及四氧嘧啶所致的糖尿病小鼠模型，发现金线莲的水提物具有降血糖作用[5]。他们还对金线莲的各种提取物进行了降血糖作用的研究，发现现金线莲的大极性成分特别是水溶性的物质为降血糖的主要有效部分。初步估计为其多糖类物质在起作用[6]。
王航探讨了其降糖的有效成分及其作用机制，发现金线莲的有效成分可以调节脂肪代谢，降低模型小鼠的TG、TC等，最终达到降低血糖的效果，此作用可能与其保肝作用有关[7]。
旅行箱品牌排行榜研究还发现，Kinsenoside，野生金线莲中的丁酸苷类化合物，其对PTP1B有一定的抑制活性，其抑制的能力明显强于其对照及化合物methyl4-β-D-
glucopyranosyl- butanoate，说明其可以作为PTP1B抑制剂，或先导物用于Ⅱ型糖尿病和肥胖症等疾病[8]。
以上研究说明金线莲有抗糖尿病活性，但是其作用机制还有待研究。
1.1.2熟地黄及生地黄的抗糖尿病作用研究概况
熟地黄是玄参科植物地黄的块茎，相对生地黄，其炮制方法不同，一般为酒炖法或蒸法加工而成[9]。熟地黄在临床上应用较为广泛，用于心悸怔忡、血虚萎黄、、崩漏下血、肝肾阴虚、腰膝酸软、骨蒸潮热、眩晕、利尿生津等[10]。
据报道，熟地黄对链脲佐菌素（STZ）致糖尿病小鼠具有降血糖及血脂作用[11]。
生地黄是地黄( rehmannia glutinosalibosch) 的干燥的块根。有养阴生津，凉血清热等功效。生地黄传统上就用于糖尿病，对目前中医糖尿病处方中使用药物的统计也表明生地黄的使用频率居第三位[12][13]。现在用于糖尿病的中的中成药的组成组分中许多都含有生地黄，如其常与知母，黄芪连用用于糖尿病，常用的降糖乐中也含有生地黄[14]。有研究表明生地黄对糖尿病大鼠肾病病变有一定的保护作用，能有效的降低血胰岛素抵抗的作用，对resistin及脂肪代谢有改善作用，还具有改善胰岛β细胞的功能，减低肝葡萄糖-6-磷酸酶活性等作用[15]。
1.1.3地骨皮的抗糖尿病作用研究概况
地骨皮为枸杞的干燥的根皮，类属于茄科植物[16]。
药理研究表明，地骨皮对糖尿病模型小鼠的血糖量有一定的降低作用，还能降低糖尿病小鼠的葡萄糖的含量和肾上腺素性高血糖的值，其作用的效果与苯乙双胍降糖作用效果相似，并且剂量越高或时间越长其作用的效果越明显[17][18]。通。通过研究表明，地骨皮促进胰岛β细胞分泌胰岛素的作用效果超过黄芪的作用效果，还可以让糖尿病大鼠的血清中的肝糖元含量和胰岛素含量增加[19]。魏智清等通过研究发现地骨皮的水煎剂具有降低血糖的作用效果，且牛磺酸为其降低血糖的一种有效成分[20]。
1.1.4芦根的抗糖尿病作用研究概况海军舰艇
芦根(Rhizoma Phragmitis)类属于芦苇科植物，是芦苇的根茎，又名苇根、芦茹根等，具有清除体内毒素、调节免疫，调节机体代谢、维持体液的平衡、利尿生津等作用[21]。
据研究表明，芦根对链脲佐菌素诱导制备的糖尿病小鼠的肝脏及骨髓组织中Cu、Se、Ca、Zn、Mg元素含量有影响，芦根的醇提物可降低糖尿病小鼠肝组织中Cu 、Se、Ca、Mg的含量，有文献表明糖尿病小鼠微量元素代谢紊乱，芦根的醇提物对其微量元素代谢具有一定的改善作用[22]。张默函等通过研究发现，糖尿病病小鼠的肝脏线粒体出现了氧化应激的变化，芦根的乙醇提取物对这个变化具有一定的改善作用[23]。
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