细胞免疫功能测定中流式细胞仪抗体用量
的探讨
梁建秀,等.复杂性麻风足底溃疡综合防治效果观察?513?
方法.均显示了一定的防治效果.两组病例以综合防治组效
果为佳,其治愈率为73.8l,总有效率为96.83(均,J<
0.01);可能与因采用小外科扩创.清除厚皮和死骨.外用或
全身给予抗生素的,降低了感染,促进了溃疡的愈合等
有关.
本研究显示,综合性防治措施不仅对复杂性麻风足底溃
疡具有良好的疗效,而且对预防溃疡的发生也有较好的作
用在连续3年的观察中,综合防治组复发和新发仅有2例
(2.15),明显低于对照组l2例(21.O5),说明综合性防
治措施预防复杂性麻风足底溃疡的可行性和有效性是肯定
的.
在项目实施3年后,我们观察到综合防治组仍有一定的
无效,新发和复发病例.据我们观察,主要系患者不坚持自
我护理,尤其是不坚持穿防护鞋所致,揭示了防护鞋对促进
复杂性麻风足底溃疡的愈合以及预防溃疡的发生和防止复
发有一定的效果,可能与防护鞋的硬底能有效阻止锐物刺伤
足底皮肤以及软垫均匀分散了行走时的足底压力有关;印证
月落和尚青山去广西医科大学2002Aug;l9(4)
了国际着名麻风康复专家Brand教授"麻风足底溃疡不是单
纯的医学问题,而与力学密切相关"的观点..同时也提示
医护人员应加强对病人的教育和监护,改变病人的不良习惯
或行为.只有这样才能收到更好的防治效果.
参考文献
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京:科学普及出版社,l991.插页.
细胞免疫功能测定中流式细胞仪抗体用量的探讨
秦雪李山黄军强
(广西医科大学第一附属医院临床医学实验中心南宁530021)
摘要目的:探讨流式细胞仪抗体用量问题.方法:采用3种不同标本量及抗体量的方法,用原装试剂及自配试剂同时检测淋
巴细胞亚.结果:两种试剂及同种试剂采用不同标本及抗体用量,其结果均无显着性差异(P>0.05).结论:同时减少单克
隆抗体及标本用量并不影响实验结果.在经济欠发达地区,值得推广应用.
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L
关键词流式细胞仪;抗体;细胞免疫
中国图书资料分类法分号R446
流式细胞分析(FlowCytometry.FCM)是以高能量激
光照射高速流动状态下被荧光素染的单细胞或微粒.测
开学第一课2020手抄报量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)
的理化及生物学特性(细胞大小,DNA水平,细胞表面抗原
表达等)进行定量检测的一种现代细胞分析技术.由于FCM
对试剂要求较严格,过去一般是使用美国进I21的原装配套试
剂.为了使该试剂国产化以节省成本.本科室在成功地研制
出全血溶解试剂,鞘液及清洗液的基础上.又对FCM的抗
体用量问题进行了研究.现将结果报告如下.
1材料与方法
1.1仪器:EpicsXI型FCM,EpicsImmunologyWorkstat
ion(美国Beckman—coulter公司).
收稿日期:2002—03—18
1.2试剂:三单抗:CD一FITc/cD8一PE/cD.一PE—CY5.
阴性对照:IgG1-FITC/IgG1一PE/IgG1一PE—CY5;三二单
抗:CD.-FITC/CD.6+CDPE,阴性对照IgG1-FITC/IgG1一
PE;标准荧光微球,配套的清洗液,鞘液,全血溶解试剂均
购自美国Beckman—Coulter公司;④自配鞘液,清洗液,全血
溶解试剂.
1.3方法
1.3.1标本制备:对EDTA抗凝的全血标本采用3种不同
标本量及抗体量的方法,A法是5Ol标本加5l单克隆抗
体,B法是i00l标本加1ol单克隆抗体,c法是100l标本
加2O『』l单克隆抗体,均加入12mm×75mm试管中,混匀.室
温避光孵育20rain,直接将试管放入标本前处理仪样本台
上,用全血溶解试剂,裂解红细胞.设立阴性对照:除抗体改
龙梅子
为小鼠IgG1一FITC/IgG1一PE/IgG1一PE—CY5或IgG1一FITC IgGl—PE,其余步骤同上.
514广西医科大学2002Aug;19(4)
1.3.2流式细胞仪测定:打开FCM及氩离子激光光源(488
nm),预热2Omin,仪器自动初始化,用标准荧光微球进行光
路与流路标准,所有荧光信号的变异系数(CV)均小于2,
在前向散射光(FS)和侧向散射光(SS)散点图中圈定细胞
选择淋巴细胞为分析对象,去除细胞碎片,用阴性对照确定
荧光阴性范围及PMT电压标准,颜补偿,每份标本测定
5000个细胞,全部数据用FCM和软件SYSTEMⅡ获取和分
析.
1.4统计学处理:采用SPSS8.0软件包作方差分析和配对
t检验.
2结果
2.1标本及抗体用量检测:取2O个标本分别采用原装及自
配试剂,A,B,C3种方法同时检测淋巴细胞亚,结果显示叶可儿
两种试剂3种方法所测结果均无显着性差异(均P>0.05). 见表1.
表1两种试剂不同标本及抗体用量淋巴细胞亚检测结果(is) 3讨论
FCM最主要的功能之一是行细胞免疫功能测定,由于
FCM具有的高灵敏度,高速度和多参数分析的特点,对血液
中淋巴细胞免疫表型检测比其他方法更精确,故FCM被认
为是血液中淋巴细胞免疫表型分析的标准方法,其最大的
优点是对混合细胞体中亚细胞的计数.淋巴细胞根据其
表面标志的不同分为T淋巴细胞,B淋巴细胞,NK细胞,T
淋巴细胞又可分为辅助(或)诱导T淋巴细胞和抑制(或)细
胞毒T淋巴细胞等.在淋巴细胞亚分析中,若标本处理好,
则粒细胞,单核细胞和淋巴细胞分界清晰,体集中,能正确
五岳是哪五岳
设门固定淋巴细胞最集中的区域进行分析.淋巴细胞亚检测,常规实验操作是按c法进行,为了探讨抗体用量问题,我
们采用A,B法与之比较.所测结果均无显着性差异.据文献
报道每个标本T+B+NK细胞的值应在95~105之
间,否则应将标本重新处理后再行检测.我们的结果显示.不
论是原装试剂或自配试剂,3种不同标本及抗体用量实验结
果均与文献报道一致.根据特异性抗原抗体结合时量的变
化规律.在一定浓度范围内,无论是稀释抗原或稀释抗体而
使相应的抗体或抗原浓度不变,均可发现只有在两者分子比
例合适时才出现最强的反应.为了保证可靠的线性关系,血
样品内的白细胞数应调整到(4.0~10)×109/L.细胞数太多抗体量不足(如某些白血病病人),染不完全.阳性结果偏低,细胞数太少,抗体量过多又造成浪费,并且测定时速度太慢而影响激光管的寿命.本实
验观察到同时减少标本和抗体用量并不影响实验结果的可靠性,每个标本T+B十NK细胞均在95~105,与全量使用抗体的结果没有显着性差异.
故该法在经济欠发达地区推广使用,可减少成本支出.
参考文献
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猜灯谜大全及答案3黄健,沈永生,冯霞.流式细胞仪检测淋巴细胞亚型
中若干问题探讨.临床检验杂志,1998,16(4):227.
医学中法定计量单位对长度单位的要求
医学中在微小的长度计量中以往常用的A,(指作为
单位单独使用.代表微米)不属于法定单位,不宜再用,宜采
用法定单位中长度基本单位m的分数单位.如nm,pm等.以往将词头重叠的用法,如mm,/q*m等,不符合法定计量单位3'),?
使用方法的规则,不宜再用,宜采用只有一个词头与单位构成的分数单位,~!lnm,pm等.以往用X线波长的X单位(舍巴恩单位)不是法定单位,不宜再用,宜采用m的分数单位.