实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1M Tris-HCl □组份浓度 1 M Tris-HCl
（pH7.4，7.6，8.0） □配制量 1L
□配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值 浓HCl
7.4 约70mL
7.6 约60mL
8.0 约42mL
4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
（pH7.4，7.6，8.0） □配制量 1L
□配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。
pH值 浓HCl
7.4 约70mL
7.6 约60mL
8.0 约42mL
4. 将溶解定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2、1.5 M Tris-HCl □组份浓度 1.5 M Tris-HCl
（pH8.8） □配制量 1L
□配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TE Buffer □组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA
（pH 7.4，7.6，8.0） □配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL
2、1.5 M Tris-HCl □组份浓度 1.5 M Tris-HCl
（pH8.8） □配制量 1L
□配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
3、10×TE Buffer □组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA
（pH 7.4，7.6，8.0） □配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL
500 mM EDTA（pH8.0） 20mL
2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠 □组份浓度 3 M 醋酸钠
（pH5.2） □配制量 100mL
□配置方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
5、PBS Buffer □组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4
□配制量 1L
2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。
3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。
4. 室温保存。
4、3 M 醋酸钠 □组份浓度 3 M 醋酸钠
（pH5.2） □配制量 100mL
□配置方法 1. 称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。
2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。
3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
5、PBS Buffer □组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4
□配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。
NaCl 8 g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.42 g
KH2PO4 0.27g
2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6、10 M醋酸铵 □组份浓度 10 M醋酸铵
□配制量 100mL
□配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。中国文化遗产作文
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.42 g
KH2PO4 0.27g
2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。
4. 高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6、10 M醋酸铵 □组份浓度 10 M醋酸铵
□配制量 100mL
□配置方法 1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。
2.加去离子水将溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。中国文化遗产作文
4.密封瓶口于室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
7、Tris- HClOPPO手机搬家功能在哪平衡苯酚 □配置方法
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。
7、Tris- HClOPPO手机搬家功能在哪平衡苯酚 □配置方法
1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红或黄，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄。有助于方便识别有机相。
③ 加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
④ 重复操作步骤③。
⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧ 将苯酚置于棕玻璃瓶中4℃避光保存。
8、苯酚/氯仿/异戊醇 □配置方法
③ 加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
④ 重复操作步骤③。
⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。
⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧ 将苯酚置于棕玻璃瓶中4℃避光保存。
8、苯酚/氯仿/异戊醇 □配置方法
1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。
2. 配置方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：1）均匀混合后，移入棕玻璃瓶中4℃保存。
9、10％（W/V）SDS □组份浓度 10％（W/V）SDS
□配制量 100mL
□配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。
2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。
10、2 N NaOH □组份浓度 2N NaOH
□配制量 100mL
□配置方法
9、10％（W/V）SDS □组份浓度 10％（W/V）SDS
□配制量 100mL
□配置方法 1.称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。
2. 滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。
3. 将溶液定容至100mL后，室温保存。
10、2 N NaOH □组份浓度 2N NaOH
□配制量 100mL
□配置方法
1.量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。
2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
2. 称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。
4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
11、2.5 N HCl □组份浓度 2.5 N HCl
□配制量 100mL
□配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。
2. 去新加坡签证室温保存。
12、5 M NaCl □组份浓度 5 M NaCl
□配制量 1L
□配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
13、20％（W/V）Glucose □组份浓度 20％（W/V）Glucose
□配制量 100mL
□配置方法 1. 称取20g Glucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。
4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。
11、2.5 N HCl □组份浓度 2.5 N HCl
□配制量 100mL
□配置方法 1. 在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。
2. 去新加坡签证室温保存。
12、5 M NaCl □组份浓度 5 M NaCl
□配制量 1L
□配置方法 1. 称取292.2g NaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
13、20％（W/V）Glucose □组份浓度 20％（W/V）Glucose
□配制量 100mL
□配置方法 1. 称取20g Glucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。
2. 加去离子水将溶液定容至100mL。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
14、Solution I □组份浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose
（质粒提取用） □配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1M Tris-HCl（pH8.0） 25mL
0.5 M EDTA（pH8.0） 20mL
20％Glucose（1.11M） 45mL
dH2O 910mL
2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。
15、Solution II □组份浓度 250mM NaOH，1％（W/V）SDS
（质粒提取用） □配制量 500mL
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
3. 高温高压灭菌后，4℃保存。
14、Solution I □组份浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose
（质粒提取用） □配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。
1M Tris-HCl（pH8.0） 25mL
0.5 M EDTA（pH8.0） 20mL
20％Glucose（1.11M） 45mL
dH2O 910mL
2. 高温高压灭菌后，4℃保存。
3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。
15、Solution II □组份浓度 250mM NaOH，1％（W/V）SDS
（质粒提取用） □配制量 500mL
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
10％SDS 50mL
2N NaOH 50mL
2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀。
3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。
16、Solution III □组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH
（质粒提取用） □配制量 500mL
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
KOAc 147g
CH3COOH 57.5mL
2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500mL失业金怎么领取。
4. 高温高压灭菌后，合肥土特产4℃保存。
17、0.5M EDTA □组份浓度 0.5 M EDTA
2N NaOH 50mL
2. 加灭菌水定容至500mL，充分混匀。
3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。
16、Solution III □组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH
（质粒提取用） □配制量 500mL
□配置方法 1. 量取下列溶液置于500mL烧杯中。
KOAc 147g
CH3COOH 57.5mL
2. 加入300mL去离子水后搅拌溶解。
3. 加去离子水将溶液定容至500mL失业金怎么领取。
4. 高温高压灭菌后，合肥土特产4℃保存。
17、0.5M EDTA □组份浓度 0.5 M EDTA
(pH8.0) □配制量 1L
□配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
18、1 M DTT □组份浓度 1 M DTT
□配制量 20mL
□配置方法 1. 称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。
2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
19、10mM ATP □组份浓度 10mM ATP
□配置方法 1. 称取186.1g Na2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值值8.0（约20g NaOH）。
注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1L。
5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。
6. 室温保存。
18、1 M DTT □组份浓度 1 M DTT
□配制量 20mL
□配置方法 1. 称取3.09g DTT，加入到50mL塑料离心管内。
2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。
3. 适量分成小份后，-20℃保存。
19、10mM ATP □组份浓度 10mM ATP
□配制量 20mL
□配置方法 1. 称取121mg Na2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。
2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。
3. 适量分成小份，-20℃保存。
□配置方法 1. 称取121mg Na2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。
2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。
3. 适量分成小份，-20℃保存。
分子生物学实验常用培养基的配制方法
1、Ampicillin □组份浓度 100mg/ml Ampicillin
（100mg/ml） □配制量 50mL
□配置方法 1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
2、IPTG □组份浓度 24mg/mL IPTG
（24mg/mL） □配制量 50mL
配置方法 1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。
（100mg/ml） □配制量 50mL
□配置方法 1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
2、IPTG □组份浓度 24mg/mL IPTG
（24mg/mL） □配制量 50mL
配置方法 1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。
2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
3、X- Gal □组份浓度 20mg/mL X- Gal
（20mg/mL） □配制量 50mL
□配置方法 1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。
2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
4、LB培养基 □组份浓度 1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl
□配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。
4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
3、X- Gal □组份浓度 20mg/mL X- Gal
（20mg/mL） □配制量 50mL
□配置方法 1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。
2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。
3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。
4、LB培养基 □组份浓度 1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl
□配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
5、LB/Amp培养基 □组份浓度 1％（W/V） Tryptone
0.5％（W/V） Yeast Extract
1％（W/V洗葡萄的方法） NaCl
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 加去离子水将培养基定容至1L。
3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 高温高压灭菌后，4℃保存。
5、LB/Amp培养基 □组份浓度 1％（W/V） Tryptone
0.5％（W/V） Yeast Extract
1％（W/V洗葡萄的方法） NaCl
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量 1L
□配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中
Tryptone 10g
Yeast Extract 5g
NaCl 10g
2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。
4. 加去离子水将培养基定容至1L。
5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。
7. 4℃保存。
6、TB培养基 □组份浓度 1.2％（W/V） Tryptone
2.4％（W/V） Yeast Extract
0.4％（V/V） Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
□配制量 1L
□配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。
2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。
7. 4℃保存。
6、TB培养基 □组份浓度 1.2％（W/V） Tryptone
2.4％（W/V） Yeast Extract
0.4％（V/V） Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
□配制量 1L
□配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。
2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
Tryptone 12g
Yeast Extract 24g
Glycerol 4mL
3. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。
4. 加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6. 4℃保存。
7、TB/Apm培养基 □组份浓度 1.2％（W/V） Tryptone
2.4％（W/V） Yeast Extract
0.4％（V/V） Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量 1L
□配置方法
5. 待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。
6. 4℃保存。
7、TB/Apm培养基 □组份浓度 1.2％（W/V） Tryptone
2.4％（W/V） Yeast Extract
0.4％（V/V） Glycerol
17mM KH2PO4
72mM K2HPO4
0.1mg/mL Ampicillin
□配制量 1L
□配置方法
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