Folin-Ciocalteus法
1.1配制试剂
Folin—Ciocalteu试剂：
100．Og钨酸钠和25．Og钼酸钠，将二者溶解于700mL蒸馏水中，倒入2000mL圆底烧瓶中，加入50mL 85％磷酸和100mL浓盐酸，放入几粒玻璃珠，混匀，连接回流冷凝器，用文火回流lOh。用50raL水冲洗冷凝管上的附着物，边摇边加入150．Og硫酸锂和数滴溴水，开口煮沸约15rain(至溴水挥尽为止)，冷却，定容至1000mL的容量瓶中，过滤并置棕瓶中保存备用。
20％碳酸钠溶液：
称取无水碳酸钠Csa2c03)2009溶于1000mL沸水中，混匀，冷却至室温，加数块结晶碳酸
钠晶种，24h后过滤。
酚母液(0．5％)：称取O．5009五倍子酸，用蒸馏水溶解，倒入100mL容量瓶中定容。
取6支1 00mL向井理容量瓶，按表2—1配制0～500mg／L标准溶液；
表王祉萱2．1标准溶液配制
(1)用刻度吸管分别精确吸取0mL、1．0mL、2．0mL、3．0mL、5．0mL、10．0mL酚母液分别到100mL容量瓶中，用水定容至刻度。这些溶液可以分别表示为0mg／L、50mg／L、100mg／L、150mg／L、250mg／L、500mg／L(以相应的没食子酸表示)。
(2)从上述不同浓度的标准溶液中分别移取1．OmL加入到100mL容量瓶中，再分别加入60
mL去离子水，混合，各加入5mL Folin．Ciocalteu试剂，充分混合。
(3)在0．5"一8min张萌的个人详细资料内各加入15mL20％碳酸钠溶液，混合后用蒸馏水定容。
(4)将上述标准溶液在20。C下放置2h后，在765nm波长下测定吸光值。制作标准曲线，以标准溶液的吸光值为纵坐标，以相应酚浓度为横坐标，绘制标准曲线，如图2．1所示，根据方程求出葡萄汁中总酚的含量。
Folin-Denis法
1.1样品预处理
1.2总多酚的提取
1.3测定
使用5 mL刻度吸管吸取1．0 mL滤液(若多酚含量过高，可适当稀释)或一水合没食子酸标准溶液，分别用刻度吸管加入FD显剂及7．5％碳酸钠溶液，用蒸馏水定容至10 mL，混匀，室温显(下同)，测定765 nin吸光度，根据稀释倍数和从标准曲线中查出的浓度，计算样品多酚含量
高锰酸钾滴定法
分光光度法快速测定葡萄酒中总酚的含量
1.1原理
正常发酵生产的葡萄酒中富含多酚类化合物。试样中的多酚化合物在碱性条件下，与Foline phenol试剂形成蓝物质，在765nm处测定吸光值，并与标准曲线比较来对葡萄酒中多酚类化合物进行定量检测。
1.2仪器与试剂
（1） 紫外-可见分光光度计
（2） Foline-phenol试剂：试剂公司购得
（3） 5%（w/v）碳酸钠溶液：称取50g无水碳酸钠（分析纯），用水溶解并定容至1000ml。
（4）400mg/L没食子酸标准溶液：称取0.1000g没食子酸，用蒸馏水溶解，定容至250ml，移入棕瓶中，避光低温保存。
（5）40mg/L没食子酸标准使用溶液：吸取上述溶液10ml，再用蒸馏水定容至100ml，现用现稀释。
1.3步骤
（1）标准曲线的制备
分别吸取0.0, 0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5ml没食子酸标准使用溶液（40mg/L）于看比管中（相当于含没食子酸0.0，20，40，60，80，100，120 ，140μg），各管分别用蒸馏水补至3.5mL，再分别加入1ml Foline-phenol试剂，用5%（w/v）碳酸钠溶液定容至刻度，摇匀，放置10分钟后，于765nm处，1cm比皿测定吸光值，绘制标准曲线。
（2）样品的测定
先将样品稀释10倍，取适量体积V（视样品总酚含量确定）稀释液于洗葡萄的方法25ml比管中，再分
别加入1ml Foline-phenol试剂，用5%（w/v）碳酸钠溶液定容至刻度，摇匀，放置10分钟后，于765nm处，1cm比皿测定吸光值，与标准系列比较。
（3）计算公式
X ——样品中总酚（以没食子酸计）的含量，mg/L；
m ——测定样品中总酚（以没食子酸计）的含量，μg；
V ——测定样品的体积，ml；
N ——稀释倍数。
m可以通过求得，也可用回归方程计算得出。
固相萃取高效液相谱法测定葡萄酒多酚物质
1.1模拟酒样（将 乙醇和酒石酸加入到 容量瓶中，然后再加入一定量的几种多酚类物质，混匀备用）
1.2仪器和试剂
仪器：岛津高效液相谱仪，包括：泵， 检测器， 柱温箱，积分仪；真空抽滤器；超声波脱气机；纯水机；薄膜旋转蒸发仪，天平；固相萃取小柱
试剂：甲醇，乙腈（谱纯）；酒石酸，乙酸，乙醚，乙酸，乙酯，甲醇，乙醇（分析纯）
1.3实验方法
1.4谱条件
参考成宇峰等的方法，并稍加修改
谱柱： 反相柱(250*4.0mm,5um)；流速：学校岗位设置方案0.8ml/min ；柱温：30℃ 检测波长：280nm
梯度洗脱：流动相A ：水 乙酸（98:2 ）；流动相B ：乙腈
洗脱程序： 0—8min，B为18%—40% ；20—25min
1.5标准曲线制备
分别称取约0.0100g 没食子酸安息香酸儿茶素咖啡酸香草酸槲皮酮阿魏酸香豆酸标样，用谱甲醇定容于10ml 容量瓶中，配成混合溶液，将此溶液稀释成不同浓度梯度的标准溶液，-30℃ 保存备用
1.6 SPE柱萃取方法
活化吸附剂：在萃取样品之前先进行活化，具体操作为，用5ml 甲醇冲洗小柱，流完后加 5ml水冲洗
上样：取 5ml待测模拟酒样装入活化后的固相萃取柱
洗涤：酒样在柱中停留一段时间，用2 倍上样液体积的蒸馏水冲洗小柱，弃去废液
洗脱：加入 15ml乙醚将多酚类物质洗脱下来
测定：洗脱液经旋转蒸发干燥后（<40℃ ），谱甲醇溶液（1:1 ）定容，经 微孔滤膜过滤，HPLC 测定
1.7数据统计与分析
实验所得数据均采用数理统计软件DPS V7.55版处理，其结果以平均值表示
1.8结论
实验建立了25min 郭敬明到底多高内同时检测葡萄酒中多种多酚类物质的方法 并通过对固相萃取柱萃取参数：洗脱溶剂洗脱溶剂用量以及葡萄酒pH 值进行选择优化，建立了一种利用 HPLC测定葡萄酒中多酚类物质时样品前处理的方法，在此方法下，利用HPLC 检测葡萄酒中几种常见的多酚类物质时，各物质间分离效果好且提取率较高
葡萄中单体酚的分析测定方法
具体步骤方法：葡萄中单体酚的提取方法取赤霞珠葡萄果实5 g研磨后溶于25 mL70%甲醇中,加入80 mg抗坏血酸(溶于15 mL纯水中),再加入10 mL6 mol盐酸,将所有溶液置于100 mL
的容量瓶中,超声波处理10 min,密闭后在35℃条件下避光提取12 h,12000×g 4℃离心20 min,将上清液在40℃条件旋转蒸发去掉甲醇,用30 mL乙酸乙酯萃取一次之后再用20 mL乙酸乙酯萃取两次,合并所有萃取液,在40℃条件旋转蒸发至干再溶于5 mL50%谱甲醇中,经0.45μm有机滤头过滤后HPLC测定。
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