1 将细胞在含12mM浓度的葡萄糖和1 uCi/ml的氚标葡萄糖的培养液中培养3-360min,用预冷的PBS缓冲液漂洗3遍以将反应终止,用细胞裂解液裂解细胞,其中一部分用来测蛋白浓度,而另一部分用液闪仪检测其闪烁计数(具体操作你可以跟操作的实验员咨询),最终结果表示为每mg细胞裂解产物的放射比活性:即cpm/mg。具体你可以参考文献:Glycogen-targeting Subunits and Glucokinase Differentially Affect Pathways of Glycogen Metabolism and Their Regulation
in Hepatocytes
洗葡萄的方法2 葡萄糖摄取:含0.2 % BSA的和DMEM培养基(葡萄糖浓度为25mM)并含或不含胰岛素的培养基继续培养2个小时后,收集培养基以葡萄糖氧化酶的方法确定葡萄糖浓度。葡萄糖摄取的确定如下:空白组(含相同的干预液,但不含细胞)葡萄糖浓度值减去实验组细胞葡萄糖值。并通过MTT比法以校正因细胞数量差异而导致的结果差异。可以参考文献:Effects of Berberine on Glucose Metabolism In Vitro
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糙米粥个人觉得第一种方法相对比较精确,可以检测代谢后氚标的水的量,从中可以了解肝细胞经胰岛素刺激后对葡萄糖的吸收,因此可以反映出肝细胞的胰岛素敏感性,国际上很多文献都是用这种方法。
而第二种只能检测出葡萄糖转运到细胞膜内后培养基中葡萄糖浓度的变化,不能反映出肝细胞内胰岛素的敏感性,因胰岛素的功能除了促进葡萄糖在膜内外的转运,还有后面在细胞内进一步酵解,因此国际上用的不多。
你是做in vivo还是做in vitro?
方法其实都可以,基本都是探测gamma射线,2脱氧葡萄糖在组织内代谢会被阻断,因此停留在局部组织内,用C14或氚标记后可以进行探测,其实也可以用18F做标记。
关之琳高尔夫球是什么梗做In Vivo其实就是PET,用18F-FDG
不做活体都无所谓,把动物杀了取组织然后测gamma计数 ,做个蛋白矫正就可以
GLUT 可以用免疫印迹,但注意有转位,因此建议除了做总表达量的变化还要做细胞膜GLUT量的变化倪妮个人资料
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