常用大肠杆菌感受态JM109,DH5a,BL21等的区别-用途-特征解析
常用大肠杆菌感受态 JM109, DH5a , BL21等的区别
任嘉伦为何娶了聂欢1:DH5a 菌株
DH5a 是一种常用于质粒克隆的菌株。 E.coli DH5a在使用 pU C 系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:F -, φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF U 169, deoR , recA 1, endA 1,
hsdR17(rk-, mk+, phoA , supE44, λ-, thi-1, gy rA 96, relA 1
2:BL21(DE3 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体 T7启动子的表达载体(如 pET 系列的基因。 T7噬菌体 RNA 聚合酶位于λ 噬菌体 DE3区,该区整合于 BL21的染体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:F -, ompT , hsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE3
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3:BL21(DE3 pLysS 菌株
该菌株含有质粒 pLy sS ,因此具有氯霉素抗性。 PLy sS 含有表达 T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:F -, ompT hsdS(rBB-mB -, gal , dcm (DE3, pLy sS , C amr
4:JM109菌株
该菌株在使用 pU C 系列质粒载体进行 DNA 转化或用 M13 phage载体进行转染时,由于载体 DNA 产生的 LacZa 多肽和 JM09编码的La cZΔM15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株
基因型:recA 1, endA 1, gy r A 96, thi -1, hsdR17, supE44, re lA 1, Δ(lac -proA B /F’[traD36, proAB+, lacIq , lacZΔM15] 5:TO P10菌株
该菌株适用于高效的 DNA 克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:F - , mcr A Δ(mrr-hsd RMS-mcrBC , φ80 , lacZΔM15,△ lac Ⅹ 74, recA 1 , araΔ139Δ(ara-leu7697, galU , galK , rps , (Strr endA1, nupG
6:HB101菌株
该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验
模拟人生4 秘籍基因型:supE44, hsdS20(rB-mB -, recA 13, ara -14, proA 2, lacY1, galK2, rpsL20, xy l-5, mtl-1, le uB6, thi-1
7:M110或 SCS110t-ara成员左乳曝光
大多数大肠杆菌菌株中含有 Dam 甲基化酶和 Dcm 甲基化酶, 前者可以在 GA TC 序列中腺嘌呤 N-6位上引入甲基, 后者在 CCA /TGC序列的第一个胞嘧啶 C -5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生 dam,dcm ,从而受到甲基化的影响 .
部分限制性内切酶对甲基化的 DNA 不能切割,如 F baI 和 MboI 等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。
大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如 XbaI, BclI等。而且甲基化只发生在特定序列,以 XbaI 为例,只有在位点序列旁出现 GA 或 TC ,该 XbaI 位才会被甲基化。
而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:
(1选用上述酶的同功酶,如 Sau3AI , DNA 识别切割位点与 MboI 相同;但不受甲基化影响;
(2利用甲基化酶缺失的受体细胞进行 DNA 的制备,如 E.coli JM110和链霉菌等,前者 Dam 和 Dcm 甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的 DNA 就能被上述酶切割。
li JM110
马凡舒简历要排除 dam,dcm 甲基化的影响,需要用特定的 dam-,dcm-的菌株,如 JM110
如果由 JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化 .
各种感受态细胞的区别用途特征
Xl1-Blue 菌株
基因型:endA 1 gyr A 96(nalR thi-1 recA 1 relA1 lac glnV44 F‘[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZM15] hsdR17(rK- mK+。
特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。
用途:分子克隆和质粒提取。
BL21(DE3菌株
基因型:F – ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB- λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5]。
特点:该菌株用于以 T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。 T7噬菌体 RNA 聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体 DE3区的 lacU V 5启动子,该区整合于 BL21的染体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达。
BL21(DE3ply菌株
基因型:F - ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB- λ(DE3 pLysS(cmR。
特点:该菌株带有 pLy sS ,具有氯霉素抗性。此质粒还有表达 T7溶菌酶的基因, T7溶菌酶能够降低目的基
因的背景表达水平,但不干扰 IPTG 诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达
DH 5α菌株
基因型:F - endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyr A 96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF U 169, hsdR17(rK-, λ–
特点:一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与 pU C 载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。 recA 1和 endA 1的突变有利于克隆 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。
用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。
JM109菌株
基因型:endA 1 glnV44 thi-1 relA1 gyr A 96 recA 1 mcrB+ Δ(lac-proA B e14-
[F‘ traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+。特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达 , 可用于 M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。
用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。
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DH10B 菌株
基因型:
F - mcr A Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 endA1 recA1 deoR
Δ(ara,leu7697 araD139 galU galK nupG rpsL λ-
The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。
host for pUC and other α-complementation vectors; pBR322
useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues, useful for plasmid rescue procedures。 ELECTROMA X DH10B T1 CELLS
说明:
DH10B 细胞是高转化效率的 E. coli,可以完美应用于大多数实验应用。
DH10B 基因型具有以下特点:
lacZΔM15 用于重组克隆的蓝 /白斑筛选
消除了 m crA 、 mcrBC 、 mrr 和 hsdRMS 限制系统,允许构建更多具有代表性的基因组文库 (1,2
endA1突变,可以增加质粒产量和数量
高效率转化大小为 150 kb的质粒,用于产生 cDNA 或基因组文库
DH10B? 可以表达 tonA 的基因型, tonA 能够提供对 T1和 T5噬菌体感染的抗性 (DH10B? T1R。
DH10B? 的基因型:F · mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA 1 endA1 araD139 Δ(ara, leu7697 galU galK λ · rpsL (StrR nupG
DH10B? T1R的基因型:F · mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu7697 galU galK λ · rpsL (StrR nupG tonA