上周中洪君跟⼤家简单介绍了部分动物造模实验，有许多⼩伙伴反映想看更多更详尽的动物造模实验，本⽂将详细介绍肝脏局部缺⾎再灌注模型构建⽅法，希望能帮助到⼤家。
实验前准备
动物：8-12周龄C57BL/6雄性⼩⿏。
注意：尽管不同品系都可⽤于造模实验，但是不同性别动物对缺⾎再灌注损伤的反应差异较⼤，必须使⽤同⼀性别的动物。
Tips：建议每个实验组使⽤同⼀品系、性别动物⾄少7只。
试剂：4%⽔合氯醛；⽣理盐⽔；肝素钠（1000 units/ml）；⽆菌纱布；碘酒；4%PFA（多聚甲醛）；伊红；苏⽊素。
⼿术器械：组织剪⼑（钝头，11.5cm）；⽌⾎钳（直头，12cm）；⾮创伤性微型⾎管夹（夹颚长6mm，宽1mm，总长17mm）
其他器械：25g针头；1ml注射器；纱布海绵；棉签；带线缝合针（4-0丝线）；电动刮⽑⼑。
造模步骤
⼀、⿇醉
动物禁⾷16-18h，8ul/g腹腔注射4%⽔合氯醛⿇醉。
⼆、开腹
动物⿇醉后，腹部朝上摆放，⽤医⽤胶布固定四肢，电动刮⽑⼑褪去腹部⽑发，70%酒精对腹部表⽪进⾏消毒。从箭突末端沿腹中线向下剪开3cm切⼝，暴露腹腔。注意：切⼝不能超过箭突，该处⽪肤与肌⾁中汇集⼤量⾎管，破损会导致动物⼤量失⾎。⽤⽌⾎钳分别夹住切⼝两侧和箭突并拨开，尽量暴露腹腔。Tips：可⽤纱布垫⾼⽌⾎钳，以抬⾼腹壁，便于观察。
苏醒图片三、暴露⾎管
⽤⽣理盐⽔湿润纱布和棉签。取两块湿润的纱布置于切⼝右侧（动物左侧）。⽤湿润的棉签⾮常轻柔地将⼩⿏的肠道从腹腔从推⾄旁边的纱布上，使门静脉充分地暴露。再取⼀块湿润的纱布覆盖肠道，以防⼲燥。⽤剪⼑仔细地剪开⽅肝叶与左肝叶之间的联结组织，以更好地暴露第⼀肝门（门静脉，肝动脉，胆管）（如Figure 1）。必要时，需将中肝叶和左肝叶往膈膜⽅向铺开，以⽅便观察左肝叶与⽅肝叶的联结。
Figure 1：⼿术⽰意图
Quadratelobe（⽅肝叶）；right lateral lobe（右肝叶）；median lobe（中肝叶）；left lateral lobe（左肝叶）。图中所⽰为动物开腹后，将中肝叶和左肝叶向膈膜⽅向铺开情况下腹⾯的⽰意图。肝静脉为蓝⾊；肝动脉为红⾊；胆管为黄⾊。
四、夹闭⾎管
肝门中到右肝叶分⽀，并在右肝叶分⽀上⽅⽤⾎管夹夹闭门静脉，肝动脉和胆管。夹闭后，中肝叶和左肝叶（体积约占整个肝脏70%）的颜⾊会很快由⾚褐⾊变成苍⽩。若中肝叶和左肝叶颜⾊没有发⽣明显变化，则取下夹⼦重新夹闭。夹⼦放置的深度很重要。肝动脉的深度⽐门静脉要深。
注意：夹⼦反复使⽤多次后，其⾦属刚性的改变会减⼩夹闭⼒，因此在使⽤夹⼦的过程中，要时刻关注夹⼦的⽼化问题，并及时更换。
五、⽣理状态维持
成功完成⾎管夹放置后，⽤湿润的棉签轻轻的将肠道推回腹腔内，向腹腔内滴加500µl 10U/ml肝素钠⽣理盐⽔溶液，⽤⽣理盐⽔湿润的纱布覆盖切⼝。将动物转移到加热灯或加热垫下，是动物体温维持在37℃。在缺⾎过程中紧密看护动物，防⽌动物体温下降，并确保覆盖的纱布保湿湿润。期间为防⽌动物苏醒可向腹腔滴加少量⿇醉剂（50µl）。
六、结束缺⾎
实验设定的缺⾎时间结束后，轻轻将⾎管夹取出，向腹腔内滴加500µl⽣理盐⽔，以补充⼿术过程中的体液损失。
注意：再灌注会使肝脏在⾎管夹取出后数⼗秒后很快恢复正常的⾚褐⾊。若夹闭的时间过长有可能造
成⾎液回流受阻。
七、缝合切⼝
取出⾎管夹后，对切⼝进⾏双层缝合。实验设定的再灌注时间结束时处死动物采样保存。
实验结果
Figure 2：肝脏HE染⾊图⽚
左侧Sham为假⼿术对照肝脏。右侧为经过1⼩时缺⾎+6⼩时再灌注处理肝脏。其中⿊⾊虚线所圈区域为坏死区。坏死区内出现⼲细胞坏死、空泡化、核固缩等情况。
到这⾥，⼩⿏肝脏缺⾎再灌注损伤模型就已经做好了。造模过程中的七个步骤是茂师兄我⾃⼰做的时候觉得这样⽐较顺畅好记忆的分法，⼤家不必严格遵守哈。毕竟，重要的不是分了⼏步，⽽是⾃⼰对实验的理解和对流程的熟悉，融会贯通后配合⾃⼰平时的实验操作习惯，任何的实验都会只是⼩蛋糕⽽已。希望今天的实验讲解⼤家能有所受益，若有疑问或是不同看法可以在留⾔或电话咨询我们，咱们下期再见啦。
参考⽂献：
参考⽂献：
Mouse model of liver ischemia and reperfusion injury: method for studying reactive oxygen and nitrogen metabolites in vivo.[J]Free Radical Biology and Medicine Volume 46, Issue 1, 1 January 2009, Pages 1–7。
中洪动物造模实验服务
⼀、服务项⽬
⼆、服务流程
1. 构建模型；
2. 药效学评价，动物组织及⾎液标本采集；
3. 后续各项指标检测包括：⾎液⽣化，组织病理学评价，蛋⽩、基因相关检测。
三、实验交付：
客户提供：
1、药物或其他实验材料
2、动物模型及⽅案的选择
3、其他技术要求
我们提供：
1. 实验过程图像资料；
2. 组织、⾎液样本。
3. 实验报告（主要仪器及试剂说明，实验步骤，实验结果）
中洪动物造模实验⽰例
动物房⼀隅
裸⿏成瘤（中洪实拍图，盗者必究）你可能还想看
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